莫海玲，李以軍，蔣璐慧，周海堅(jiān)，周佳寧，陸海鵬

（廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院，廣西 南寧 530001）

瑤藥止痛散為廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，由毛兩面針、洋金花、草烏、山烏龜、莪術(shù)等10味藥材組成，具有解毒散結(jié)、消腫止痛、補(bǔ)氣行血、溫通經(jīng)絡(luò)的功效［1-3］，臨床用于緩解腫瘤患者放化療及手術(shù)過程中所引起的疼痛。方中毛兩面針為主藥，為蕓香科植物毛葉兩面針的干燥根和莖，瑤藥稱之為“入山虎”，“入山虎”是最具代表性瑤藥“五虎”之一，具有活血化瘀、行氣止痛、祛風(fēng)通絡(luò)的功效，其主要有效成分為氯化兩面針堿［4］。烘干和粉碎工藝是否合理將直接影響散劑的質(zhì)量，進(jìn)而影響臨床療效。為使瑤藥止痛散更有效、更穩(wěn)定、更安全，本文采用正交試驗(yàn)法，以氯化兩面針堿含量為指標(biāo)，考察烘烤溫度、粉碎細(xì)度和烘烤時(shí)間因素的影響，為該產(chǎn)品的實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供可靠的保證。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器 LC-2030 型高效液相色譜儀（日本島津公司，包括UV 檢測器，柱溫箱，Labsolutions 色譜數(shù)據(jù)工作站）；METTLER TOLEDO XS 205 電子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；KQ-300DB 型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率300 W，頻率40 kHz）；HHitech 和泰水純化系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；DLF-28分級連續(xù)投料粉碎機(jī)（溫州頂級醫(yī)療器械有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海智誠分析儀器制造有限公司）；藥用篩（浙江上虞市五四儀器廠）。

1.2試藥與試劑 氯化兩面針堿對照品（批號:110848-201604，純度：91.0%）購自中國食品藥品檢定研究院；毛兩面針（批號：1809034）、洋金花（批號：1811151）、草烏（批號：D1703003）、山烏龜（批號：1811081）、莪術(shù)（批號：1811092）等藥材均購于廣西張益堂中藥飲片有限公司，經(jīng)我院周海堅(jiān)副主任中藥師鑒定為正品?，幩幹雇瓷ⅲㄗ灾浦苿?，批號為20190607、20190608、20190609）；三乙胺、磷酸試劑均為分析純，乙腈為色譜純，水為實(shí)驗(yàn)室自制純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以氯化兩面針堿含量的綜合評分為指標(biāo)，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)考察烘烤溫度、粉碎細(xì)度和烘烤時(shí)間因素，正交因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2樣品制備 按處方比例準(zhǔn)確稱取毛兩面針、洋金花、草烏、山烏龜、莪術(shù)等10 味藥材共18 份（每次試驗(yàn)平行2 次），分別按L9（34）正交表的安排進(jìn)行烘干、粉碎、混勻，備用。

2.3氯化兩面針堿含量測定

2.3.1色譜條件 色譜柱：Waters bridge phengl C18（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）；流動(dòng)相：乙睛-0.2%磷酸溶液-三乙胺（20∶80∶1）；檢測波長：328 nm；流速1.0 ml/min；柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：10 μl；理論塔板數(shù)按氯化兩面針堿計(jì)不低于2 500。

2.3.2對照品溶液的配制 精密稱取氯化兩面針堿對照品2.5 mg，加70%甲醇溶解后定容于50 ml容量瓶中，搖勻，即得質(zhì)量濃度為50 μg/ml 對照品溶液儲備液。再精密量取對照品溶液儲備液1 ml，加70%甲醇溶解并定容至10 ml，搖勻，即得濃度為5 μg/ml對照品溶液。

2.3.3供試品溶液的配制 取瑤藥止痛散約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇20 ml 超聲處理30 min，過濾，濾渣和濾紙?jiān)偌?0%甲醇20 ml 超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液置同一量瓶中，加適量70%甲醇洗滌3 次，洗液并入50 ml 容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3.4陰性對照品溶液的配制 稱取毛兩面針之外的藥材，按照供試品制備方法，制備缺毛兩面針的陰性對照溶液。

2.3.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取質(zhì)量濃度為50 μg/ml 的對照 品 儲備液0.25 ml、0.5 ml、1 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml 置10 ml 量瓶中，加入70%甲醇稀釋至刻度，搖勻。從中分別精密吸取10 μl注入高效液相色譜儀，以氯化兩面針堿質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y＝55 065.1X+5 178.40，r＝0.999 6（n＝6），線性范圍為1.25～12.5 μg/ml。

2.3.6含量測定 精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品各10 μl，注入高效液相色譜儀中測定，據(jù)峰面積計(jì)算，即得，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4正交試驗(yàn)方案安排與結(jié)果 正交試驗(yàn)方案安排與結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 正交試驗(yàn)方案安排與結(jié)果 （n=2）

表3 方差分析結(jié)果

由表2 極差R 值可知，RA>RB>RC，影響因素大小順序?yàn)锳>B>C，即烘烤溫度>烘烤時(shí)間>粉碎細(xì)度。由表3方差分析結(jié)果可知，A因素烘烤溫度有顯著性差異（P<0.05），應(yīng)取A3，而其它兩個(gè)因素?zé)o顯著性差異。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，最終確定本方的最佳制備工藝條件為A3B2C2，即原方藥材于烘箱中80 ℃干燥3 h，粉碎成100目。

2.5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為進(jìn)一步確定此工藝的合理性，按照正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝條件A3B2C2進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，即80 ℃烘烤3 h，粉碎成100目，制備3批（20190607、20190608、20190609）樣品，并測定氯化兩面針堿含量的含量。結(jié)果3 批樣品中氯化兩面針堿的含量分別為100.12 μg/g、100.71 μg/g、101.75 μg/g，平均含量為100.86 μg/g，高于正交試驗(yàn)中各工藝的結(jié)果，表明該工藝條件可行，進(jìn)一步確定此工藝為最佳制備工藝。

3 討 論

瑤藥止痛散為外用散劑，由毛兩面針、洋金花、草烏、山烏龜、莪術(shù)等10 味藥材烘干后粉碎入藥，藥材飲片的烘干、粉碎工藝設(shè)計(jì)好壞直接影響制劑質(zhì)量，本文通過參考文獻(xiàn)［5-6］，以烘烤溫度、粉碎細(xì)度和烘烤時(shí)間為考察因素，以氯化兩面針堿為考察指標(biāo)，優(yōu)選最佳制備工藝。中藥飲片干燥可分為“自然干燥”和“人工干燥”，人工干燥的溫度應(yīng)視藥物性質(zhì)靈活掌握，一般藥材以不超過80 ℃為宜，含揮發(fā)性成分的藥材以不超過50 ℃為宜［7］，因此本文選取40 ℃、60 ℃、80 ℃為3個(gè)因素水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。

毛兩面針為方中主藥，氯化兩面針堿是毛兩面針的主要活性成分之一，且其含量測定方法的專屬性良好，含量測定方法比較成熟［8-9］，故作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。流動(dòng)相經(jīng)篩選比較，選用乙腈-0.2%磷酸溶液-三乙胺（20∶80∶1）作為流動(dòng)相，測定結(jié)果顯示精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，按試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果制備瑤藥止痛散，結(jié)果制劑中氯化兩面針堿含量較高，再次驗(yàn)證最佳工藝為：烘干溫度80 ℃，烘干3 h，粉碎成100目。該工藝可為瑤藥止痛散的工業(yè)生產(chǎn)提供參考依據(jù)。