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      癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx表達水平及臨床意義

      2021-01-20 01:46:34鄭希院趙志敏薛林霞趙龍斌
      關(guān)鍵詞:癲癇病癲癇重度

      鄭希院,趙志敏,薛林霞,趙龍斌

      癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,主要是由多種原因?qū)е履X細(xì)胞群異常超同步化放電,造成突然性、暫時性及發(fā)作性腦功能紊亂,目前關(guān)于癲癇的發(fā)病機制未完全明確[1]。miR可調(diào)控細(xì)胞生物增殖、代謝、發(fā)育、凋亡、應(yīng)激、代謝等過程,與癲癇發(fā)生與發(fā)展等密切聯(lián)系,其中miR-146a是調(diào)控炎癥反應(yīng)及免疫的調(diào)控因子,在癲癇中發(fā)揮重要作用[2]。腦內(nèi)miR-124含量較多,在成熟及發(fā)育神經(jīng)系統(tǒng)中均有表達,miR-124可能參與調(diào)節(jié)突觸可塑性,且在異常神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)形成中調(diào)節(jié)神經(jīng)再生長及軸突生長[3]。白介素-1(interleukin-1,IL-1)在組織修復(fù)與免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用[4]。雙皮質(zhì)素(double corte x,Dcx)是在多數(shù)樹突末端與軸突末端具有特殊的亞細(xì)胞位置,Dcx在神經(jīng)元移行過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,可調(diào)節(jié)神經(jīng)元發(fā)育[5]。本研究分析癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx表達水平及臨床意義。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 選取2017年4月—2018年4月我院收治的癲癇病人90例,男51例,女39例,年齡10~47(28.5±5.5)歲;病程0.5~19(9.7±0.5)年;單純部分性發(fā)作19例,復(fù)雜部分性發(fā)作28例,全身強直陣攣性發(fā)作43例;單次發(fā)作(每個月<4次)36例,頻繁發(fā)作(每個月≥4次)54例;癲癇輕度(2個月發(fā)作1次)18例,中度(1個月發(fā)作<4次)29例,重度(1個月發(fā)作>4次)43例。另選取同期在我院進行健康體檢者90名作為正常組,男49名,女41名;年齡8~48(28.2±4.7)歲。兩組研究對象性別、年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

      1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

      1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 癲癇發(fā)作類型及診斷標(biāo)準(zhǔn)符合國際抗癲癇聯(lián)盟的診斷分類標(biāo)準(zhǔn);癲癇診斷根據(jù)病人家族史、體格檢查、現(xiàn)病史、腦電圖、顱腦MRI或CT等相關(guān)檢查結(jié)果,并由神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)醫(yī)師確診;所有癲癇病人或家屬知情并同意加入本研究。

      1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并精神分裂癥、雙相障礙等其他精神疾病史病人;癲癇病人伴有神經(jīng)及其他系統(tǒng)疾病;聽力、視力障礙及失語等病人;近期服用過抗焦慮抑郁情緒及影響認(rèn)知功能藥物的病人。

      1.3 方法

      1.3.1 IL-1水平檢測 采集所有研究對象晨起空腹外周靜脈血5 mL,置于一次性真空無抗凝劑的采血管中。20~25 ℃條件下進行凝血60 min,之后以1 500 r/min離心20 min,分離血清,-80 ℃環(huán)境中保存待檢。IL-1水平采用酶聯(lián)免疫吸附法測定:緩沖液稀釋50 mol/L碳酸鹽包IL-1抗原,之后添加到聚苯乙烯反應(yīng)板孔中,置于24 h溫度4 ℃,次日洗滌劑洗滌3次后,拋干。各孔中加入稀釋液稀釋的待測標(biāo)本0.1 mL,同時加入陽性和陰性對照標(biāo)本,42 ℃放置60 min,將液體移除洗滌3次后,拋干。各孔中加入IL-1酶標(biāo)抗體0.1 mL,43 ℃放置60 min。液體移去,洗滌3次,拋干。在各個孔中加入0.1 mol/L的Na2HPO4與0.05 mol/L枸櫞酸滴液混勻,再加入0.1 mL鄰苯二胺,遮光處理20 min,在各孔中加入2 mol/L H2SO40.05 mL,終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀檢測405,分析IL-1水平。

      1.3.2 miR-146a、miR-124、Dcx水平檢測 按照TRIzol提取細(xì)胞RNA,總RNA濃度測定采用紫外分光光度計,重復(fù)測定3次。按照QIAGEN進行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA:取14 μL RNA,5×RT緩沖液4 μL,2 μL Enzyme mix,42 ℃反應(yīng)60 min,95 ℃反應(yīng)5 min,cDNA合成后-20 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?。使用ABI7500聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀按照說明書將cDNA進行PCR擴增,U6作為內(nèi)參,95 ℃ 15 s進行循環(huán)擴增,95 ℃ 5 s,60 ℃退火加延伸30 s,共40個循環(huán),調(diào)節(jié)基線,miRNA、miR-124、Dcx與內(nèi)參U6的相對表達量以2-△△Ct表示。

      2 結(jié) 果

      2.1 兩組miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 與正常組比較,癲癇組miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表1。

      表1 兩組miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      2.2 不同性別的癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 男性癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量與女性癲癇病人比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

      表2 不同性別的癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      2.3 不同年齡的癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 <18歲癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量與≥18歲癲癇病人比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。

      表3 不同年齡的癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      2.4 不同發(fā)作類型癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 與單純部分性發(fā)作比較,復(fù)雜部分性發(fā)作、全身強直陣攣性發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與復(fù)雜部分性發(fā)作比較,全身強直陣攣性發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表4。

      表4 不同發(fā)作類型癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      2.5 不同發(fā)作頻率癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 與單次發(fā)作比較,頻繁發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平表達升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表5。

      表5 不同發(fā)作頻率癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      2.6 不同發(fā)作程度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較 與輕度癲癇病人比較,中度、重度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與中度癲癇病人比較,重度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表6。

      表6 不同發(fā)作程度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量比較(±s)

      3 討 論

      目前癲癇主要涉及癲癇病程、部位、發(fā)作類型及發(fā)作頻率,包括神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)異常及社會因素等[6]。癲癇病人不僅對發(fā)作癥狀治療與控制,還包括對癲癇病人精神性疾病及合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病管理[7]。有研究顯示,癲癇病人常見的合并癥是抑郁、焦慮與認(rèn)知功能障礙,若降低病人自我管理依從性與對抗癲癇藥物耐受性,病人可能增加意外死亡及自殺風(fēng)險,給家庭與社會帶來沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[8]。癲癇發(fā)病電生理基礎(chǔ)是神經(jīng)元異常放電,導(dǎo)致短暫的大腦功能障礙[9]。癲癇發(fā)作臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,主要是由于異常放電的傳遞方式與起始部位不同,臨床表現(xiàn)為精神障礙、發(fā)作性運動、自主神經(jīng)等[10]。癲癇與炎性因子互相發(fā)展、促進,炎性因子促進癲癇發(fā)作與神經(jīng)細(xì)胞興奮,而癲癇發(fā)作也引起炎癥反應(yīng)[11]。

      miRNA參與細(xì)胞胚胎發(fā)育、增殖、凋亡與分化等重要的過程,與下游靶基因和上游調(diào)控因子之間形成復(fù)雜的調(diào)節(jié)機制。miR-146a在癲癇發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用,其在腦組織與炎癥反應(yīng)密切關(guān)系[12]。miR-124參與軸突生長與神經(jīng)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié),降低α-微管蛋白表達[13-14]。miR-124影響認(rèn)知功能是由于其參與突觸長時程可塑調(diào)節(jié),在癲癇病人中呈高表達,參與癲癇后突觸重塑過程[15]。IL-1是一種促炎細(xì)胞因子,癲癇后通過星形膠質(zhì)細(xì)胞對神經(jīng)元的間接作用或通過對神經(jīng)元的直接作用參與癲癇形成過程,是由于通過加強谷氨酸神經(jīng)傳遞,提示炎癥反應(yīng)對癲癇發(fā)生與發(fā)展發(fā)揮重要作用[16-17]。Dcx在多數(shù)樹突與軸突末端發(fā)揮抑制作用,它影響配體復(fù)合物,提示在神經(jīng)元突起的生長作用[18]。本研究結(jié)果顯示,與正常組比較,癲癇組病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量升高。說明癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx相對表達量更高。

      本研究結(jié)果顯示,與單純部分性發(fā)作比較,復(fù)雜部分性發(fā)作、全身強直陣攣性發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高;與復(fù)雜部分性發(fā)作比較,全身強直陣攣性發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高。說明全身強直陣攣性發(fā)作miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平更高。張淑紅等[19]等研究顯示,在癲癇大鼠模型發(fā)作后,馬海組織miR-146a在星形膠質(zhì)細(xì)胞活化區(qū)域內(nèi)表達量較高,與本研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示,與單次發(fā)作比較,頻繁發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平表達升高。說明頻繁發(fā)作癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平更高。相關(guān)研究表明,炎性遞質(zhì)可調(diào)節(jié)興奮性氨基酸釋放,提高神經(jīng)元細(xì)胞興奮性,促進癲癇發(fā)作[20]。本研究結(jié)果顯示,與輕度比較,中度、重度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高;與中度比較,重度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx水平升高。說明重度癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx表達水平更高。

      綜上所述,癲癇病人miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx呈高表達,其表達水平與發(fā)作頻繁、發(fā)作類型、發(fā)作程度相關(guān),miR-146a、miR-124、IL-1、Dcx在癲癇病人中起到重要的參與作用。

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