周自強(qiáng) 孫芳云

藏藥檢測(cè)技術(shù)教育部工程研究中心，陜西 咸陽(yáng) 712082

佐太，藏名為“仁青歐曲佐珠欽木”[1]，又稱“佐臺(tái)”“佐塔”“甘露精王”等，在藏藥中應(yīng)用廣泛且歷史悠久，為珍寶類藏成藥“仁青常覺”“七十味珍珠丸”“大月晶丸”等藥的核心配伍成分[2]。佐太在藏藥組份中常起提升治療效果、降低毒副作用的功能。由于佐太中含有諸多有毒重金屬物質(zhì)，以至于很多藏藥在臨床的推廣和應(yīng)用上受到限制。為了更好地繼承與發(fā)展這一傳統(tǒng)藏藥，現(xiàn)將其藥物成分、藥效學(xué)研究、藥代動(dòng)力學(xué)研究、毒理學(xué)研究和臨床研究進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)歸納，為基于佐太的藥物研發(fā)提供參考依據(jù)。

1 佐太成分分析

1.1 化學(xué)元素分析 劉曉娜等[3]運(yùn)用LIBS技術(shù)對(duì)佐太進(jìn)行了定性元素分析，并得到它的光譜圖。分析結(jié)果表明，佐太主要由14種元素組成，分別是汞(Hg)、鐵(Fe)、鉀(K)、鈣(Ca)、鈉(Na)、以及含量較少的鉛(Pb)、銀(Ag)、金(Au)等，同時(shí)還在佐太中發(fā)現(xiàn)了硫(S)元素的存在(如表1)。李岑等[4]發(fā)現(xiàn)，佐太中主要存在的元素為汞(Hg)和硫(S)，此外還有氧(O)、鐵(Fe)、鋁(Al)、銅(Cu)、鉀(K)、銀(Ag)、鈣(Ca)、鎂(Mg)等元素。

1.2 微觀結(jié)構(gòu)分析 李岑等[4]采用多種實(shí)驗(yàn)方法對(duì)佐太進(jìn)行微觀結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，在佐太中以正2價(jià)形式存在的汞元素，其配位原子為硫，配位數(shù)是4。佐太的結(jié)晶度在59%左右，且存在空間群為F-43 m216的立方晶系β- HgS、空間群為Fddd70的斜方晶系單質(zhì)硫S8，空間群為P63/ mmc194的六方晶系碳C、空間群為P63/ mmc194的六方晶系鐵Fe1.05 S0.95、空間群為P63/mmc194的六方晶系銅Cu6S6、空間群為F-43 m216的立方晶系Cu1.8 S等。此外，佐太中微粒多在100～600 nm，部分低于100 nm，它們可形成1～20 μm松散不規(guī)則型的顆粒。佐太中不規(guī)則型物質(zhì)占總體的41%左右，因此佐太應(yīng)為古代微納米藥物，此微觀結(jié)構(gòu)的分析對(duì)佐太的認(rèn)識(shí)與發(fā)展具有重要的意義。

1.3 有機(jī)物成分分析 文獻(xiàn)中對(duì)于佐太有機(jī)物成分的報(bào)道比較少見，有研究用石油醚和乙醇各對(duì)佐太做有機(jī)成分提取，液相檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)石油醚可提出極少量的非極性化合物，而醇提物中化合物則相對(duì)較多，對(duì)于佐太中的有機(jī)物的發(fā)現(xiàn)還需要更多的實(shí)驗(yàn)來論證[5]。

表1 “佐太”中元素的特征譜線認(rèn)證結(jié)果

2 藥效學(xué)研究

2.1 佐太的解熱鎮(zhèn)痛作用 蔣婀娜等[6]研究表明佐太可以降低接種傷寒疫苗后產(chǎn)生發(fā)熱現(xiàn)象的新西蘭兔體溫；可以使小鼠的驚厥潛伏期及死亡潛伏期顯著延長(zhǎng)；對(duì)于二甲苯所導(dǎo)致小鼠外耳腫脹，佐太可使其癥狀有效減輕；可顯著提高小鼠的廓清指數(shù)以及吞噬指數(shù)。說明佐太具有解熱、抗驚厥、抗炎和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。

2.2 佐太對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用 He等[7]細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，缺氧使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，外源性5-羥色胺可加重氧化應(yīng)激，在使用佐太后可以減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激現(xiàn)象。此外，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，在斑馬魚體內(nèi)使用佐太可降低缺氧誘導(dǎo)的活性氧(ROS)，并可治愈行為異常。因此，生物缺氧誘導(dǎo)氧化應(yīng)激5-羥色胺水平被發(fā)現(xiàn)異常升高，表明5-羥色胺能調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激，在進(jìn)行佐太給藥后，5-羥色胺含量降低，行為異常得到緩解。研究說明: 佐太可能基于5-羥色胺的代謝來調(diào)節(jié)和緩解氧化應(yīng)激現(xiàn)象(如圖1)。盡管目前佐太的劑量對(duì)細(xì)胞系沒有顯示出毒性，但它們的劑量依賴性仍有待評(píng)估。

2.3 佐太的中樞抑制作用 曾勇等[8]研究發(fā)現(xiàn)佐太具有降低正常小鼠自發(fā)活動(dòng)量的趨勢(shì)、對(duì)鎮(zhèn)靜催眠藥物所致小鼠的睡眠潛伏期有縮短趨勢(shì)，對(duì)其所致睡眠時(shí)間具有延長(zhǎng)的趨勢(shì)、可以增加士的寧所致驚厥誘導(dǎo)時(shí)間且減低驚厥率。說明佐太有一定的中樞抑制作用。

文獻(xiàn)報(bào)道佐太可影響鐘基因的表達(dá)，使神經(jīng)元PAS域蛋白2(Npas2)、腦肌肉Arnt- like蛋白1(Bmal1)在10: 00時(shí)的振幅降低。在時(shí)鐘驅(qū)動(dòng)的靶基因中，佐太增加了PAR- bZip家族成員d- box結(jié)合蛋白(Dbp)的振蕩幅度，降低了核因子白細(xì)胞介素3(Nfil3)[9]，結(jié)果有助于對(duì)佐太的部分藥理和毒理作用機(jī)制作出解釋。

Zhang等[10]發(fā)現(xiàn)佐太具有良好的治療小鼠抑郁樣行為的能力，通過對(duì)小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)、懸尾試驗(yàn)和野外試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)佐太可明顯提高小鼠的運(yùn)動(dòng)能力；在小鼠的蔗糖偏好試驗(yàn)中，佐太顯著增加了小鼠的體重和蔗糖偏好比；佐太可顯著降低HPA軸皮質(zhì)激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和皮質(zhì)酮水平，并使CUMS小鼠血清中5-羥色胺和去甲腎上腺素水平升高。然而，由于佐太中少量汞在鼠的下丘腦和海馬中沉積，這可能對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成潛在的危險(xiǎn)。

3 藥代動(dòng)力學(xué)研究

李向陽(yáng)等[11]研究發(fā)現(xiàn)分別給予大鼠佐太7 d和21 d后，顯示短期內(nèi)佐太中的汞在大鼠體內(nèi)吸收較少，但明顯蓄積于肝腎組織中，維持原劑量持續(xù)給予大鼠佐太，可發(fā)現(xiàn)蓄積于肝臟中的汞含量明顯降低，腎臟中的汞卻顯著增多，說明汞在大鼠肝臟中的蓄積只是暫時(shí)的，最終會(huì)在腎臟產(chǎn)生大量的蓄積; 在對(duì)糞便和尿液的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，只有極少量的汞存在于尿液中，卻有大量的汞存在于糞便中，證明通過糞便排出體外是佐太的一種重要的排泄形式。

4 毒理學(xué)研究

4.1 佐太的肝腎毒性 Zhou等[12]通過評(píng)估佐太對(duì)肝細(xì)胞和斑馬魚的毒性作用發(fā)現(xiàn)佐太可使L-02細(xì)胞、HepG2細(xì)胞和RBL-2 A細(xì)胞的存活率隨劑量和時(shí)間的變化而降低。佐太(0.1 mg/mL)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞收縮、凝集、破碎，增加凋亡細(xì)胞數(shù)量。Caspase-3和 bax的表達(dá)活動(dòng)水平增加，并且bcl-2的表達(dá)水平在HepG2細(xì)胞暴露于佐太(10-4-0.1 mg/mL)24 h后會(huì)減少。此外，佐太(0.2 mg/mL)可誘導(dǎo)幼年的斑馬魚深色肝臟顏色改變和成年斑馬魚肝臟形態(tài)學(xué)改變。佐太(0.2 mg/mL)能提高成年斑馬魚肝臟中CYP1A1、CYP1B1以及MT-1的mRNA水平。結(jié)果顯示，佐太在一定劑量下可有效誘導(dǎo)肝毒性，但其肝毒性可能是通過其它不依賴于HgS的機(jī)制發(fā)生的。

李岑等[13]通過多種長(zhǎng)期試驗(yàn)觀察證實(shí)了傳統(tǒng)藏藥佐太的毒性極低，在其參與臨床配伍的藥物中安全性良好，在臨床劑量用藥下以及臨床服藥周期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)不良作用，但長(zhǎng)時(shí)間大劑量用藥可能會(huì)給腎臟造成一定的毒副作用。朱洪梅等[14]通過小鼠以臨床等效劑量長(zhǎng)期給予藏藥佐太進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示小鼠以臨床等效劑量給藥佐太4.5個(gè)月后，其生長(zhǎng)發(fā)育情況、大體外觀、腦組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)、各種生理生化指標(biāo)均無明顯影響，但可損傷到小鼠肝臟、脾臟以及腎臟等的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，表明不能長(zhǎng)期服用含有佐太成分的藥物。

張國(guó)英等[15]以昆明種小鼠作為研究對(duì)象，連續(xù)給予4.5個(gè)月等效劑量的佐太，停止給藥1.5個(gè)月后，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間將臨床等效劑量的佐太灌胃小鼠后，汞在腎臟和腦組織中會(huì)發(fā)生蓄積，但在停止給藥后幾個(gè)月內(nèi)可逐漸恢復(fù)到正常水平，而汞的蓄積現(xiàn)象并不明顯發(fā)生于血液、肝臟和脾臟等組織器官。

張煒等[16]研究發(fā)現(xiàn)大鼠在給予佐太和佐太制劑之后，血液以及其它重要器官中會(huì)出現(xiàn)汞的蓄積，且呈劑量和時(shí)間依賴性。同時(shí)，對(duì)大鼠各重要組織器官內(nèi)蓄積的汞進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，大鼠體內(nèi)蓄積的汞主要是毒性較小的無機(jī)汞，而具有劇毒的有機(jī)汞則含量較低。表明佐太制劑在服用時(shí)，應(yīng)該考慮以短期、低劑量的形式使用。

Cen等[17]使用x光吸收光譜和基于同步輻射x射線熒光成像研究汞化學(xué)形式和汞特殊分布，分別給予不同分組小鼠以佐太、β-HgS 以及HgCl2一段時(shí)間后，對(duì)腎臟進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。發(fā)現(xiàn)汞主要沉積在腎皮質(zhì)，腎髓質(zhì)的汞含量很低。而腎臟的含汞量最高的是給予HgCl2飼養(yǎng)的老鼠，其次是給予β-HgS飼養(yǎng)的老鼠，腎臟含汞量最低的是給予佐太飼養(yǎng)的小鼠。這些發(fā)現(xiàn)闡明了汞元素在小鼠體內(nèi)的毒性差異與其化學(xué)性質(zhì)、空間分布密切相關(guān)。

4.2 佐太的細(xì)胞毒性 耿盧婧等[18]研究發(fā)現(xiàn)佐太、β- HgS對(duì)神經(jīng)細(xì)胞株 PC12細(xì)胞的毒性遠(yuǎn)小于HgCl2，佐太、β- HgS可能會(huì)引起促凋亡基因Bax、Bak及死亡受體Fas/ FasL通路信號(hào)傳導(dǎo)阻滯，這可為研究佐太等含汞藥物的藥理活性、毒理作用提供新思路。

朱婷等[19]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)佐太濃度在0.125 g/ L的時(shí)候人胚腎細(xì)胞的增殖速度顯著，通過對(duì)凋亡相關(guān)因子caspase-3在基因水平和蛋白水平下的檢測(cè)也證實(shí)了在這兩個(gè)濃度下caspase-3不表達(dá)或是表達(dá)量明顯降低，表明佐太可以限制 caspase-3表達(dá)來促進(jìn)人胚腎細(xì)胞增殖，并且存在劑量效應(yīng)關(guān)系。由于佐太中含有高劑量的汞化合物可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，基于對(duì)人體用藥安全健康方面的考慮，佐太的使用程度對(duì)細(xì)胞的毒性作用還需要更多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來驗(yàn)證。

綜上，佐太以及其制劑安全性高，在正常劑量和正常服藥周期內(nèi)服用對(duì)機(jī)體不會(huì)產(chǎn)生明顯的毒副作用，但長(zhǎng)時(shí)間服用后，會(huì)對(duì)腎功能造成一定的損傷，表明佐太及其制劑不適用于長(zhǎng)療程大劑量服用。

5 臨床研究進(jìn)展

目前，將佐太獨(dú)自用于臨床治療的病例未見文獻(xiàn)報(bào)道。佐太主要被當(dāng)作復(fù)方佐劑成分，與多種藥物配伍，以增強(qiáng)藥物療效，并減低毒性[20-21]。含有佐太的復(fù)方制劑在臨床上應(yīng)用很廣泛，在消化性潰瘍的治療中常用藏藥大月晶丸，大月晶丸的應(yīng)用對(duì)于消化性潰瘍患者可以保證治療有效性[22]。萎縮性胃炎等消化系統(tǒng)疾病用仁青常覺有顯著療效[23]。對(duì)慢性萎縮性胃炎患者予以仁青常覺、帕朱丸兩種藏藥聯(lián)合使用，其藥物療效顯著優(yōu)于西藥聯(lián)合用藥[24]。對(duì)于腦出血患者，腦卒中、阿爾茲海默癥等腦血管疾病及其后遺癥用七十味珍珠丸治療，可明顯提升臨床治療效果[25-27]。藏藥七十味松石丸常用治療于乙型肝炎及肝硬化等肝臟疾病[28]。佐太在藏藥體系中發(fā)揮重要的治療及輔助作用。

藏醫(yī)藥學(xué)是千百年來藏族人民對(duì)自然、健康和生命的求索，同時(shí)又是藏民族戰(zhàn)勝各種疾病的經(jīng)驗(yàn)匯聚，其理論體系的完整性、治愈疾病的有效性、施治藥物的獨(dú)特性是藏醫(yī)藥學(xué)得以傳承下來和繼續(xù)發(fā)展的根本所在[29]。千百年臨床實(shí)踐證明，藏醫(yī)藥具有簡(jiǎn)、便、廉、驗(yàn)的鮮明特點(diǎn)，在治療心腦血管、肝炎、高原病等某些疑難疾病時(shí)作用獨(dú)特、療效確切，在民族地區(qū)尤其是高海拔地區(qū)的防病治病中發(fā)揮了不可替代的作用，受到了世界醫(yī)藥行業(yè)的關(guān)注。2018年國(guó)家中醫(yī)藥管理局將藏醫(yī)藥防治肝纖維化、腦中風(fēng)后遺癥選入重大專項(xiàng)課題指南。

但當(dāng)前藏藥的開發(fā)研制、生產(chǎn)加工以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定等方面仍然存在著很多困難，其中備受人們關(guān)注的是藏藥中含有的重金屬成分[30]。從西醫(yī)的觀點(diǎn)來看，重金屬是對(duì)機(jī)體有毒的物質(zhì)，同時(shí)也是西藥在質(zhì)量控制中的重要指標(biāo)之一。佐太中的重金屬在炮制時(shí)會(huì)通過很多的特殊工藝進(jìn)行去毒處理，但這些重金屬在藏藥中所起的作用仍需要更深入的科學(xué)驗(yàn)證來解釋。因此對(duì)佐太進(jìn)行更深入的化學(xué)成分研究、藥效學(xué)研究、藥代動(dòng)力學(xué)研究以及毒理學(xué)研究是必不可少的。以期對(duì)佐太的有效性和安全性做出進(jìn)一步的闡釋，從而對(duì)促進(jìn)藏藥規(guī)范的生產(chǎn)具有重要而深遠(yuǎn)的意義。