情志刺激加速小鼠動(dòng)脈硬化進(jìn)展與SDF-1/CXCR4失衡的相關(guān)性研究*

黃曾艷， 黃曼萍， 彭春麗， 劉永源， 李春燕， 梁東輝

（1南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東廣州510405；3南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院，廣東廣州510280；4茂名市人民醫(yī)院，廣東茂名525000）

易損動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）斑塊進(jìn)展和破裂引起的血小板聚集和血栓形成是導(dǎo)致急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）等急性心腦血管事件的病理學(xué)基礎(chǔ)［1］。近年來(lái)，臨床就診的ACS 患者中精神心理問(wèn)題突出，忽視對(duì)精神心理因素的干預(yù)可導(dǎo)致ACS 患者的治療依從性、臨床預(yù)后和生活質(zhì)量顯著下降［2］。因此，重視精神心理問(wèn)題并給予早期防治，有助于穩(wěn)定AS 斑塊，防止ACS的發(fā)生和發(fā)展，減少發(fā)病率與病死率。

研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）被認(rèn)為是冠心病的易感基因［3］，血漿SDF-1 水平是預(yù)測(cè)心肌梗死病人發(fā)生死亡、再梗和心衰等事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［4］。CXC 趨化因子受體4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）是目前研究較多的趨化因子，可特異性地結(jié)合SDF-1并互相形成生物信號(hào)關(guān)聯(lián)，廣泛參與AS 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

本研究以SDF-1 和CXCR4 與情志刺激小鼠AS病變進(jìn)展的相關(guān)性為出發(fā)點(diǎn)，通過(guò)慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）的方法干預(yù)載脂蛋白E 基因敲除（apolipoprotein E gene knockout，ApoE-/-）小鼠，從而復(fù)制ApoE-/-小鼠 CUMS情志刺激模型［5］，觀察AS斑塊組織病理學(xué)形態(tài)，同時(shí)檢測(cè)SDF-1和CXCR4在血漿、血小板、主動(dòng)脈和海馬中的表達(dá)，觀察情志刺激與AS 斑塊易損性的相關(guān)性，為SDF-1/CXCR4 介導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化病變下游信號(hào)通路的研究奠定基礎(chǔ)。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

從常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購(gòu)進(jìn)30 只雄性ApoE-/-小鼠和10 只具有相同遺傳背景的野生型C57BL/6J 小鼠，SPF 級(jí)，8 周齡，體質(zhì)量為（22±1）g，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（蘇）2011-0003。

2 主要試劑及儀器

小鼠SDF-1 和CXCR4 ELISA 試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；鼠抗SDF-1 多克隆抗體和鼠抗CXCR4 單克隆抗體（Abcam）；抗GAPDH 抗體（北京全式金生物技術(shù)有限公司）；聚合HRP 標(biāo)記的IgG Ⅱ抗（武漢博士德生物科技有限公司）；DAB 顯色液（廣州賽國(guó)生物公司）；BCA 蛋白定量試劑盒（廣州碧云天生物技術(shù)研究所）。RM2235 切片機(jī)（Leica）；TS100-F 型熒光倒置顯微鏡（Nikon）；MK3 酶標(biāo)定量測(cè)定儀（Thermo）；SDS 電泳系統(tǒng)（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）。

3 方法

3.1 分組及造模 30 只8 周齡雄性ApoE-/-小鼠，造模前給予基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，按照數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照（normal control）組、高脂（high fat）組和CUMS 情志刺激模型組（CUMS 組），每組各10只，另取10只同周齡近交系C57BL/6J小鼠設(shè)為空白對(duì)照（blank control）組。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境相同（飼養(yǎng)條件SPF 級(jí)，室溫22℃～24℃，相對(duì)濕度為50%，光照時(shí)段為7：00～19：00），自由飲水?？瞻讓?duì)照組和正常對(duì)照組小鼠給予普通飼料喂養(yǎng)；高脂組小鼠全程給予含脂肪21%和膽固醇0.15%的西方膳食飼料（60Co γ 射線(xiàn)滅菌，北京科澳協(xié)力有限公司）喂養(yǎng)，無(wú)其他干預(yù)；CUMS 情志刺激模型組小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，加用CUMS 方法干預(yù)12周，從而復(fù)制ApoE-/-小鼠 CUMS 情志刺激模型［5］。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行13周。

3.2 CUMS情志刺激造模 本研究采用國(guó)際公認(rèn)的CUMS 方法復(fù)制ApoE-/-小鼠情志刺激模型［5］，具體方法如下：（1）傾斜鼠籠：讓小鼠保持在傾斜45°的鼠籠6 h；（2）濕潤(rùn)環(huán)境：用水將墊料弄濕（避免加水過(guò)多產(chǎn)生大水池），將小鼠放置在此潮濕環(huán)境6 h；（3）快速燈光交換+白噪音：將小鼠置于暗箱中，自動(dòng)定時(shí)器每隔7 min 交換明暗燈光，同時(shí)結(jié)合白噪音（110 db）刺激小鼠，持續(xù)2 h；（4）整晚照明：小鼠從7：00 pm-7：00 am 被置于明亮燈光室過(guò)夜；（5）孤立后群居：每只小鼠單獨(dú)放置在一個(gè)籠子持續(xù)4 h 后，再將10 只小鼠共同放置在1 個(gè)籠子里持續(xù)2 h（觀察小鼠，如果發(fā)生斗毆?jiǎng)t人為分開(kāi)）；（6）禁食24 h；（7）禁水24 h；（8）夾尾：用重量約800 g的塑料夾夾在距離小鼠尾根1～1.5 cm 處（紗布包住尾巴以免夾傷造成組織傷害），持續(xù)15 min 后，將夾子取下。以上幾種CUMS 干預(yù)方法隨機(jī)安排，相同刺激不連續(xù)加入，使ApoE-/-小鼠不能預(yù)知次日的刺激，避免小鼠因適應(yīng)刺激而影響干預(yù)結(jié)果。每日CUMS 刺激前后觀察各組ApoE-/-小鼠的一般狀況，重點(diǎn)記錄小鼠行為狀態(tài)，如行動(dòng)活躍度、興奮程度、皮膚毛發(fā)、飲食、睡眠等內(nèi)容。

3.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 各組小鼠到達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)點(diǎn)后取材，取材前小鼠禁食禁水12 h，無(wú)菌條件下，依據(jù)每只小鼠體重使用1%戊巴比妥鈉不同劑量腹腔注射麻醉后：（1）經(jīng)摘除眼球取血，選用洗滌法分離純化血漿、血小板；（2）無(wú)菌條件下解剖小鼠，迅速打開(kāi)胸腔和腹腔，從主動(dòng)脈弓處輕輕分離主動(dòng)脈至髂動(dòng)脈分支處；（3）無(wú)菌手術(shù)剪剝除顱骨，于四疊體中部向前傾斜30°剖開(kāi)腦組織，取海馬區(qū)新鮮腦組織；（4）無(wú)菌條件下暴露并取出整條股骨、脛骨，Hanks液反復(fù)沖洗骨髓，收集骨髓細(xì)胞混懸液，離心棄上清后保存?zhèn)溆谩?/p>

3.3.1 血漿SDF-1 和CXCR4 含量的檢測(cè) 嚴(yán)格依照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋、加樣、酶標(biāo)板上蓋、覆膜、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止。終止反應(yīng)15 min 內(nèi)，選擇450 nm 波長(zhǎng)，測(cè)量各孔的吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度創(chuàng)建相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，從而算出小鼠血漿SDF-1 和CXCR4的水平。

3.3.2 冷凍切片油紅O 染色觀察主動(dòng)脈病理?yè)p傷程度 實(shí)驗(yàn)?zāi)┬∈筇幩篮螅鹘M小鼠行主動(dòng)脈冷凍切片油紅O 染色，具體步驟如下：（1）載玻片粘取冷凍切片，切片干燥后入60%異丙醇浸洗10 min；（2）油紅O 工作液染色10 min；（3）60%異丙醇分化3～10 s至間質(zhì)清晰，水洗；（4）Mayer蘇木精復(fù)染1 min，自來(lái)水返藍(lán)；（5）濾紙吸干水分，甘油明膠封片。依據(jù)每個(gè)標(biāo)本連續(xù)切片的染色結(jié)果，選擇AS 斑塊面積最大的切片做病理形態(tài)學(xué)分析。

3.3.3 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)SDF-1 和CXCR4 的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)?zāi)┬∈筇幩篮?，各組小鼠主動(dòng)脈行石蠟切片，烤片，脫蠟至水；3% H2O220 min；PBS 洗 3 min×3 次；0.05% 胰蛋白酶 37℃ 30 min；PBS 洗3 min×3 次；37℃封閉1 h；吸去封閉液，滴加Ⅰ抗（抗 SDF-1 抗體 1∶250 稀釋?zhuān)?CXCR4 抗體 1∶500 稀釋?zhuān)?℃過(guò)夜；37℃復(fù)溫1 h；PBS 洗3 min×3次；滴加聚合HRP 標(biāo)記的抗小鼠IgG Ⅱ抗，室溫孵育1 h；PBS洗3 min×3次；DAB顯色；充分水洗；蘇木素染色1 min；水洗；分化數(shù)秒；氨水返藍(lán)10 min；梯度乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹(shù)膠封片；59℃烤箱過(guò)夜。

顯微鏡下觀察：陽(yáng)性細(xì)胞為抗原呈顆粒狀、或彌漫性棕黃色或棕褐色著色。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析儀分析小鼠主動(dòng)脈陽(yáng)性產(chǎn)物的積分吸光度（integrated absorbance，IA）及 血 管 總 面 積（sum area），IA/sum area 即為平均吸光度（mean absorbance，MA）。

3.3.4 Western blot 檢測(cè)ApoE-/-小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬和骨髓中SDF-1 和CXCR4 的蛋白表達(dá) 各組小鼠分別提取主動(dòng)脈、海馬組織蛋白，提取血小板、骨髓細(xì)胞蛋白，加入細(xì)胞裂解液，低溫機(jī)器勻漿混勻，10 000 r/min 離心 3 min，取上清，根據(jù) BCA 蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定樣品蛋白含量后制樣。分別按照各自計(jì)算的上樣量上樣，進(jìn)行SDS-PAGE，行濕轉(zhuǎn)法蛋白轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉快速封閉30 min。特異性抗體按比例稀釋?zhuān)?SDF-1 抗體1∶250 稀釋?zhuān)笴XCR4 抗體1∶500 稀釋?zhuān)饪冢?℃孵育過(guò)夜；HRP標(biāo)記的Ⅱ抗（1∶1 000 稀釋?zhuān)┦覝胤跤? h。經(jīng)洗滌、顯影、灰度掃描后，用ImageJ 圖像分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行測(cè)定，分別以目的條帶灰度與內(nèi)參照GAPDH灰度的比值表示SDF-1和CXCR4蛋白的表達(dá)水平。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。連續(xù)性變量指標(biāo)組間差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析（oneway ANOVA）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 小鼠行為的變化

ApoE-/-小鼠行為變化的記錄結(jié)果顯示，與其余組比較，情志刺激模型組ApoE-/-小鼠表現(xiàn)出行動(dòng)活躍度、靈活性、興奮度減低，皮膚毛發(fā)光澤度減少，喜歡貼邊、瞇眼、嗜睡和覓食活動(dòng)減少等行為學(xué)異常狀態(tài)。

2 ELISA法檢測(cè)小鼠血漿中SDF-1和CXCR4的表達(dá)水平

空白對(duì)照組血漿中SDF-1 和CXCR4 的水平最低，CUMS 情志刺激模型組最高；與空白對(duì)照組相比，正常對(duì)照組、高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的含量顯著升高（P＜0.05）；與正常對(duì)照組比較，高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1和 CXCR4 的含量顯著升高（P＜0.05）；與高脂組相比，情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的含量顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

3 小鼠主動(dòng)脈的病理形態(tài)觀察

冷凍切片油紅O 染色通過(guò)檢測(cè)含脂泡沫細(xì)胞及其組成的粥樣斑塊判斷主動(dòng)脈的粥樣硬化程度。空白對(duì)照組小鼠的主動(dòng)脈各層排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞形態(tài)良好，少見(jiàn)皺褶、空泡，無(wú)AS病灶，見(jiàn)圖2A；其余3 組小鼠的主動(dòng)脈均存在不同程度的AS 病變，粥樣硬化區(qū)域脂質(zhì)呈鮮紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，間質(zhì)無(wú)色；正常對(duì)照組處于脂紋期，AS 病灶可見(jiàn)少量泡沫細(xì)胞聚集于部分內(nèi)膜下，見(jiàn)圖2B；高脂組和CUMS 情志刺激模型組以粥樣斑塊和復(fù)合斑塊為主要表現(xiàn)，細(xì)胞成分減少，脂質(zhì)成分較豐富，大量泡沫細(xì)胞崩解，纖維及基質(zhì)成分增加，斑塊深部為大量無(wú)定形壞死物質(zhì)，為AS 最具特征性的病變，見(jiàn)圖2C、D；其中CUMS情志刺激組小鼠AS斑塊所占動(dòng)脈管腔面積最大，呈現(xiàn)薄纖維帽、大壞死核、中膜裂隙和大量針狀空隙膽固醇結(jié)晶，脂質(zhì)池較大，不穩(wěn)定斑塊已發(fā)生破裂，見(jiàn)圖2D。

Figure 1.Plasma levels of SDF-1 and CXCR4 in the mice of different groups.Mean±SD. n=10.*P＜0.05 vs blank control group；△P＜0.05 vs normal control group；▲P＜0.05 vs high fat group.圖1 各組小鼠血漿SDF-1和CXCR4水平的比較

Figure 2.Pathological changes of aortas in mice from different groups observed by oil red O staining（×200）.A：blank control group；B：normal control group；C：high fat group；D：CUMS group.圖2 各組小鼠主動(dòng)脈病理學(xué)改變

4 免疫組化法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈組織中SDF-1和CXCR4的蛋白表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示，SDF-1 和CXCR4 主要表達(dá)于小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中。其中SDF-1陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕褐色顆粒，在空白對(duì)照組中表達(dá)微弱，接近陰性；在正常對(duì)照組中表達(dá)較少，著色淺，呈淺棕褐色；在高脂組和CUMS 情志刺激模型組中可見(jiàn)大量陽(yáng)性表達(dá)顆粒，主要表達(dá)于AS 斑塊纖維帽的平滑肌細(xì)胞胞漿中，顏色呈深棕褐色，見(jiàn)圖3A。CXCR4 陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色彌漫性著色，在空白對(duì)照組中表達(dá)較少，著色不連續(xù)，呈淺黃色；在正常對(duì)照組中表達(dá)較空白對(duì)照組強(qiáng)，著色連續(xù)，顏色較深；在高脂組和CUMS 情志刺激模型組中除血管及斑塊纖維帽的平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性外，在斑塊內(nèi)的泡沫細(xì)胞上也有表達(dá)，呈深棕黃色，見(jiàn)圖3B。

比較各組小鼠主動(dòng)脈SDF-1和CXCR4陽(yáng)性產(chǎn)物的MA值顯示：與空白對(duì)照組相比，正常對(duì)照組、高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)顯著升高（P＜0.05）；與正常對(duì)照組比較，高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）；與高脂組相比，CUMS情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖3C、D。

Figure 3.Detection of SDF-1 and CXCR4 expression in aortas of mice by immunohistochemical staining.A and B：the expression of SDF-1 and CXCR4 in aortas was detected by immunohistochemistry；C and D：the MA values of SDF-1 and CXCR4.a：black control group；b：normal control group；C：high fat group；d：CUMS group.Mean±SD. n=10.*P＜0.05 vs blank control group（a）；△P＜0.05 vs normal control group（b）；▲P＜0.05 vs high fat group（c）.圖3 免疫組化法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈SDF-1和CXCR4表達(dá)及MA值的比較

5 情志刺激對(duì)ApoE-/-小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬和骨髓中SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比，正常對(duì)照組、高脂組和CUMS情志刺激模型組小鼠血小板、主動(dòng)脈和海馬SDF-1和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著增高（P＜0.05），骨髓SDF-1和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；與正常對(duì)照組比，高脂組和CUMS 情志刺激模型組小鼠血小板和主動(dòng)脈和海馬SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)顯著增高（P＜0.05），骨髓SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。與高脂組相比，CUMS 情志刺激模型組血小板、主動(dòng)脈和海馬SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），骨髓SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)圖4。

討 論

目前，隨著“生物-心理-社會(huì)醫(yī)學(xué)”模式的發(fā)展，不良情緒如焦慮、抑郁等精神心理因素與ACS 的關(guān)系逐漸受到人們的重視?；趯?duì)ACS 患者精神心理問(wèn)題的長(zhǎng)期觀察研究和臨床實(shí)踐，我們發(fā)現(xiàn)不良的情志刺激是ACS 發(fā)病的重要因素，給予ACS 患者常規(guī)基礎(chǔ)用藥的同時(shí)，重視精神心理治療和中醫(yī)疏肝理氣中藥的運(yùn)用，對(duì)緩解ACS 患者的癥狀和穩(wěn)定病情具有確切的療效［6-8］。本研究采用國(guó)際公認(rèn)的CUMS應(yīng)激方法，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、低強(qiáng)度的環(huán)境干擾、心理干預(yù)ApoE-/-小鼠，造成小鼠緊張、焦慮、抑郁等不良應(yīng)激反應(yīng)及異常的行為學(xué)狀態(tài)，從而有效地復(fù)制了ApoE-/-小鼠情志刺激模型［5］，且油紅 O 染色顯示CUMS組小鼠含脂泡沫細(xì)胞量高，主動(dòng)脈發(fā)生了最嚴(yán)重的AS 病變，說(shuō)明不良的情志刺激加速了小鼠動(dòng)脈硬化進(jìn)展。

Figure 4.The effects of emotional stimulation on SDF-1 and CXCR4 protein expression in the platelets，aortas，hippocampus and bone marrow of mice.Mean±SD. n=10.*P＜0.05 vs blank control group；△P＜0.05 vs normal control group；▲P＜0.05 vs high fat group.圖4 SDF-1和CXCR4蛋白在小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬及骨髓組織中的表達(dá)

SDF-1 又稱(chēng) CXCL12，屬于 CXC 類(lèi)趨化因子亞家族成員，來(lái)源于骨髓微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞，作為造血干/祖細(xì)胞、單核淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的化學(xué)引誘物［9］，它不僅在炎癥及免疫監(jiān)督方面發(fā)揮重要作用，同時(shí)也調(diào)節(jié)著血小板祖細(xì)胞間的相互作用，驅(qū)動(dòng)血小板修復(fù)機(jī)制［10］。在超過(guò)100 000 例患者的全基因組關(guān)聯(lián)研究中發(fā)現(xiàn)，編碼序列位于10q11 的SDF-1基因被認(rèn)為是冠心病的易感基因［3，11］，血漿 SDF-1 水平是預(yù)測(cè)心肌梗死病人發(fā)生死亡、再梗、心衰等事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［4］，與本研究中CUMS情志刺激小鼠骨髓SDF-1水平降低，血漿和血小板SDF-1水平升高結(jié)果一致。

CXCR4 屬于G 蛋白偶聯(lián)趨化因子受體，可與其配體SDF-1 特異性結(jié)合，從而激活下游的信號(hào)分子如聯(lián)絡(luò)黏附激酶、蛋白激酶C、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶和核因子κB 等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［12］。大腦內(nèi)源性的趨化因子系統(tǒng)，包括SDF-1/CXCR4，可作為大腦的第三大系統(tǒng)，與神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽系統(tǒng)一起協(xié)同調(diào)節(jié)大腦功能［13］。海馬屬于邊緣系統(tǒng)重要結(jié)構(gòu)之一，參與心理應(yīng)激的神經(jīng)內(nèi)分泌和情緒調(diào)節(jié)，與抑郁等不良情緒的發(fā)生有因果關(guān)系［14］。作為AS 的始動(dòng)環(huán)節(jié)，SDF-1 可上調(diào)CXCR4 表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞黏附、聚集至內(nèi)皮損傷部位，并進(jìn)一步遷移入內(nèi)膜下形成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞又可攝取氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL），形成在AS 發(fā)生過(guò)程中起關(guān)鍵作用的泡沫細(xì)胞；SDF-1/CXCR4 也可引起ox-LDL 介導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生異常遷移與增殖，并抑制其凋亡，加速AS 的發(fā)生、發(fā)展，與本研究中CUMS 情志刺激干預(yù)的ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈和海馬中SDF-1和CXCR4水平升高的結(jié)果一致。

鑒于AS 病變與血漿、血小板、骨髓和海馬中SDF-1/CXCR4 表達(dá)的相關(guān)性，本研究對(duì)ApoE-/-小鼠采取CUMS結(jié)合高脂飲食喂養(yǎng)建立AS易損斑塊動(dòng)物模型，以SDF-1/CXCR4的變化為主要觀察靶點(diǎn)，研究表明情志刺激狀態(tài)下，CUMS 小鼠血漿、血小板、主動(dòng)脈和海馬中SDF-1 和CXCR4 的水平增加，骨髓中SDF-1 和CXCR4 的水平降低，與冷凍切片油紅O 染色顯示CUMS 小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化程度最重的病理結(jié)果一致，由此可見(jiàn)CUMS 情志刺激引起了SDF-1/CXCR4 表達(dá)失衡，并且加速了AS 進(jìn)展，也進(jìn)一步證實(shí)了情志刺激是引起AS 斑塊不穩(wěn)定和破裂的重要因素之一。