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      淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片的安全性評(píng)價(jià)

      2021-02-08 23:35:26馬光宇秦曉培宋林
      醫(yī)學(xué)前沿 2021年19期
      關(guān)鍵詞:安全

      馬光宇 秦曉培 宋林

      摘要 目的:對淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片的食用安全性進(jìn)行毒理學(xué)研究。結(jié)論:淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片急性毒性分級(jí)屬無毒級(jí),無遺傳毒性,最大無損害作用劑量大于3.33g/kg體重,相當(dāng)于人體推薦攝入量的100倍。淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片在本研究劑量范圍內(nèi)是安全的。

      關(guān)鍵詞:淫羊藿;骨碎補(bǔ);鈣;安全

      骨質(zhì)疏松癥是一種骨骼系統(tǒng)疾病,多由骨量減少、骨骼微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞、骨骼脆性增加、易于骨折等原因引起[1]。目前,骨質(zhì)疏松癥成為繼心血管疾病、糖尿病之后的第3種常見多發(fā)的慢性疾病。本品研究一種具有增加骨密度作用的保健食品——是以中藥淫羊藿、骨碎補(bǔ)加鈣制成。本實(shí)驗(yàn)擬對淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步研究其安全性,為組方的安全使用提供依據(jù)。

      1材料與方法

      1.1材料

      1.1.1受試物 ?淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片 ?人體推薦量2g/d,其中含淫羊藿提取物0.3g,骨碎補(bǔ)提取物0.15g,鈣0.42g,酪蛋白磷酸肽0.15g。

      1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ?清潔級(jí)健康小鼠和SD大鼠。

      1.1.3菌株 選用組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌,共四株, 即 TA97a、TA98、TA100、TA102,經(jīng)生物學(xué)鑒定合格。

      1.1.4實(shí)驗(yàn)儀器 ?電子天平,Abacus全自動(dòng)血液分析儀, Li- asys全自動(dòng)生化分析儀,Olympus顯微鏡, 恒溫水浴箱。

      1.2方法

      1.2.1 大、小鼠急性毒性試驗(yàn) ?均按最大耐受量試驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)前隔夜禁食, 不禁水。劑量為20g/kg體重,灌胃量為20ml/kg體重,給藥后觀察2周,判定其最大耐受量(MTD),評(píng)價(jià)其急性毒性強(qiáng)弱。

      1.2.2 遺傳毒性

      1.2.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 小鼠每組10只,雌性各半,受試物設(shè)3個(gè)劑量組,2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及陰性(無菌水)、陽性(環(huán)磷酰胺40mg/kg)對照組。按常規(guī)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

      1.2.2.2 小鼠精子畸形試驗(yàn) ?小鼠每組10只,受試物設(shè)3個(gè)劑量組,2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及陰性(純化水)、陽性(環(huán)磷酰胺40mg/kg)對照組。按常規(guī)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

      1.2.2.3 ?Ames試驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)平板摻入法在加和不加S的條件下進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)設(shè) 5個(gè)劑量, 5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μg/皿、8μg/皿, 另設(shè)空白對照、溶劑對照 (無菌水) 、陽性對照組, 陽性物為9 -氨基吖啶、2.7 -氨基芴、疊氮鈉、2 -乙酰氨基芴、絲裂霉素C。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以各劑量組與陰性對照組平均回變菌落數(shù)的比值(MR)來判斷。

      1.2.3 大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn) 動(dòng)物隨機(jī)分成4組,每組20只,雌雄各半,受試物設(shè)3個(gè)劑量組,1.17g/kg、2.33g/kg、3.33 g/kg,另設(shè)陰性對照組,經(jīng)口給藥,按不同劑量要求將樣品均勻拌入基礎(chǔ)飼料。大鼠2只/籠飼養(yǎng),自由進(jìn)食飲水。連續(xù)觀察30d,每周記錄體重和進(jìn)食量并計(jì)算食物利用率,實(shí)驗(yàn)期末斷頭取血、處死,對每只大鼠進(jìn)行臟器大體觀察,同時(shí)取肝、腎稱重并計(jì)算臟體比,同時(shí)進(jìn)行血象、血生化檢查,并取肝、腎、胃腸進(jìn)行病理組織學(xué)檢查,常規(guī)制片,H-E染色。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      數(shù)據(jù)采用SPS 12.0 forWindows統(tǒng)計(jì)軟件包分析, 采用OneWayANVOA分析, 差異顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。

      2結(jié)果

      2.1 大、小鼠急性毒性試驗(yàn)

      實(shí)驗(yàn)期間, 各大、小鼠均未出現(xiàn)異常癥狀、體征, 也無死亡。淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片對雌、雄性小鼠和雌、雄性大鼠經(jīng)口MTD均大于20.0g/kg體重,屬無毒級(jí)。

      2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

      2.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) ?結(jié)果顯示陽性對照組微核率高達(dá)1.88% - 1.92%,而劑量組的微核率在0.12%-0.16%。與陰性對照組(0.14%-0.16%)相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P>0.05), 提示淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片對小鼠骨髓細(xì)胞染色體無明顯斷裂效應(yīng)。

      2.2.2 小鼠精子畸形試驗(yàn) ?結(jié)果顯示各劑量組的精子畸形率在1.66%-1.80%, 與陰性對照組(1.88%) 相近,而陽性對照組的精子畸形率高達(dá)5.64%,提示淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片對小鼠精子形態(tài)無影響。

      2.2.3 ?Ames試驗(yàn) 淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片各劑量組回變菌落數(shù)與陰性對照組比較均無明顯差異。未見淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片有致突變作用。

      2.3 大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)

      2.3.1 生長發(fā)育 ? 試驗(yàn)期間, 大鼠生長良好,各劑量組大鼠均無異常癥狀和體征,也無死亡。經(jīng)方差分析檢驗(yàn),各劑量組動(dòng)物的體重、進(jìn)食量、食物利用率與陰性對照組比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P>0.05) 。

      2.3.2血常規(guī)及生化檢查 ?各劑量組與陰性對照組比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P>0.05) 。

      2.3.3 病理組織學(xué)檢查 解剖時(shí)大體觀察未見異常, 臟器系數(shù)各劑量組與陰性對照組比較未見明顯差別。鏡下觀察對照組和劑量組動(dòng)物的肝、腎、胃、十二指腸均未見明顯的病理改變。

      3結(jié)論

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片雌雄性大、小鼠經(jīng)口MTD大于 20.0 g/kg體重, 根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn), 屬無毒級(jí);小鼠精子畸形試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性;30d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示大鼠體重、總食物利用率、血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、臟體比以及肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸和卵巢的病理組織學(xué)檢查均未見異常改變。得出淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片的最大無損害作用劑量大于3.33g/kg體重, 相當(dāng)于人體推薦攝入量的100倍。綜上所述, 淫羊藿骨碎補(bǔ)鈣片在本研究劑量范圍內(nèi)是安全的。

      參考文獻(xiàn)

      [1]李祥雨,姜?jiǎng)磐Γ罱▏?,?骨質(zhì)疏松癥中藥防治研究進(jìn)展.中國骨質(zhì)疏松雜志.2018,24(2):270-275.

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