白芍不同采收期質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)

王斌 林欽賢 梁偉龍 康志英 王其豐 張華勇

摘要?[目的]考察安徽亳州白芍不同采收期有效成分含量的動(dòng)態(tài)變化，結(jié)合藥材質(zhì)量、產(chǎn)量和商品性狀等因素綜合考慮，確定其最佳采收期。[方法]采集亳州地區(qū)不同采收期的白芍藥材，測(cè)定其浸出物、沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，綜合評(píng)價(jià)白芍藥材質(zhì)量。[結(jié)果]白芍的有效成分含量隨著生長(zhǎng)時(shí)間顯著變化，以5年生所含的有效成分含量最高，而同一年份中以9—10月所含的有效成分含量較高。[結(jié)論]綜合種植成本、經(jīng)濟(jì)效益、藥材質(zhì)量和產(chǎn)量考慮，亳州地區(qū)白芍應(yīng)以4年生9—10月份采收為宜。

關(guān)鍵詞?白芍;采收期;有效成分;含量測(cè)定;質(zhì)量評(píng)價(jià);亳州

中圖分類(lèi)號(hào)?R282.4;S567.2?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A?文章編號(hào)?0517-6611（2021）03-0185-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.03.049

Abstract?[Objective]To?study?the?dynamic?changes?of?active?components?in?different?harvesting?time?of?Paeoniae?radix?alba?in?Bozhou?City?of?Anhui?Province.?The?best?harvesting?time?was?determined?based?on?the?factors?of?quality，?yield?and?commodity?character.?[Method]The?contents?of?extracts，?gallic?acid，?catechin，?albiflorin，?paeoniflorin?and?benzoyl?paeoniflorin?were?determined?by?collecting?the?medicinal?materials?of?Paeoniae?radix?alba?from?different?harvesting?time?in?Bozhou?area?and?the?quality?was?evaluated?comprehensively.?[Result]The?active?components?contents?of?Paeoniae?radix?alba?changed?significantly?with?growth?time.?The?content?in?five?years?old?was?the?highest，?while?the?content?in?the?same?year?was?higher?from?September?to?October.?[Conclusion]Considering?planting?costs，?economic?benefits，?medicinal?material?quality?and?yield?comprehensively，Paeoniae?radix?alba?in?Bozhou?area?should?be?harvested?for?four?years?old?from?September?to?October.

Key?words?Paeoniae?radix?alba;Harvesting?time;Active?components;Content?determination;Quality?evaluation;Bozhou

白芍始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，為毛茛科植物芍藥（Paeonia?lactiflora?Pall.）的干燥根，味苦、酸，微寒，歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)的功效[2]。白芍主產(chǎn)于浙江安陽(yáng)、磐安（杭白芍）、安徽亳州（亳白芍）及四川中江、渠縣、廣安（川白芍），其中以安徽亳州產(chǎn)量大、質(zhì)量好，是白芍道地藥材主產(chǎn)區(qū)[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，白芍具有止痛、抗炎、保肝等藥理作用，中醫(yī)臨床上用于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病，療效確切[4]。

白芍總苷（total?glucosides?of?paeony，TGP）為白芍中提取的主要有效成分，主要含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等萜苷類(lèi)化合物，其中以芍藥苷最為典型，含量占芍藥總苷中總苷量的90%以上，此外還含有沒(méi)食子酸、苯甲酸、兒茶素等[5]?；诖?，該試驗(yàn)采集亳州地區(qū)不同采收月份、不同生長(zhǎng)年限的白芍藥材，測(cè)定其浸出物、沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，結(jié)合多個(gè)有效成分含量綜合評(píng)價(jià)不同采收期的白芍藥材質(zhì)量，以確定白芍的最佳采收期。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?儀器。DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;HWS-26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;TC-500型電熱套（海寧市新華醫(yī)療器械廠）;XS-204型萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）;MX5型百萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）;KQ-500DA型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;DIONEX?Ultimate?3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾（中國(guó)）科技有限公司）。

1.1.2?試劑。沒(méi)食子酸（110831-201605，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度90.8%）;兒茶素（110877-201604，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度99.2%）;芍藥內(nèi)酯苷（MUST-16051601，成都曼斯特生物科技有限公司，純度99.09%）;芍藥苷（110736-201539，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度96.4%）;苯甲酰芍藥苷（MUST-16061803，成都曼斯特生物科技有限公司，純度99.28%）;甲醇（HPLC，Merck），磷酸（HPLC，阿拉?。状?、乙醇等均為分析純，超純水。

1.1.3?試材。白芍藥材來(lái)自安徽省亳州市譙城區(qū)魏崗鎮(zhèn)高樓村白芍種植基地，經(jīng)廣州市香雪制藥股份有限公司康志英制藥高級(jí)工程師鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia?lactiflora?Pall.）的干燥根。

1.2?方法

1.2.1?樣品處理。

1.2.1.1?不同采收月份樣品。種子法繁殖的白芍植株，2017年3—12月定期采挖，每月按照梅花點(diǎn)法取樣，分別于固定的地塊每個(gè)點(diǎn)取樣6株，平均一株重量約0.35?kg，共30株。

1.2.1.2?不同生長(zhǎng)年限樣品。種子法繁殖的白芍植株，2017年10月采挖，1～5年生，每生長(zhǎng)年限各30株。

1.2.1.3?樣品處理。分別將以上的樣品抖凈泥土，測(cè)量鮮根重。白芍鮮品按《中國(guó)藥典》2015年版[2]白芍項(xiàng)下方法進(jìn)行加工：洗凈，除去頭尾和細(xì)根，置沸水中煮后除去外皮，經(jīng)曬干或烘干至水分合格，稱(chēng)干重，粉碎過(guò)2號(hào)、4號(hào)篩。

1.2.2?浸出物含量測(cè)定。

1.2.2.1?水溶性浸出物。按《中國(guó)藥典》2015年版（通則2201）水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定。

1.2.2.2?醇溶性浸出物。按《中國(guó)藥典》2015年版（通則2201）醇溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用75%乙醇作溶劑。

1.2.3?含量測(cè)定。

1.2.3.1?色譜條件。依利特Sino?Chrom?ODS-BP（4.6?mm?×?250?mm，5?μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）、0.1%磷酸（B），按照表1的洗脫程序進(jìn)行洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)：230?nm;流速：1.0?mL/min;柱溫：30?℃;進(jìn)樣量：10?μL。

1.2.3.2?對(duì)照品溶液制備。分別精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸等5種對(duì)照品適量，加50%甲醇配制成含沒(méi)食子酸0.005?mg/mL、兒茶素0.01?mg/mL、苯甲酰芍藥苷0.005?mg/mL、芍藥苷0.1?mg/mL、芍藥內(nèi)酯苷0.04?m/mL的混合對(duì)照品溶液。

1.2.3.3?供試品溶液制備。取白芍粉末（過(guò)四號(hào)篩）0.1?g，精密稱(chēng)定，置于50?mL容量瓶中，加入50%乙醇約35?mL，超聲處理（功率240?W，頻率45?kHz）30?min，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.3.4?線性關(guān)系考察。將“1.2.3.2”的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣1、3、5、7、10、15?μL檢測(cè)，在“1.2.3.1”色譜條件下進(jìn)行分析，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。

1.2.3.5?穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取“1.2.3.3”的供試品溶液10?μL，分別于0、2、4、6、8、12、24?h在“1.2.3.1”色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定各成分峰面積。

1.2.3.6?精密度試驗(yàn)。取“1.2.3.2”的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.2.3.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各成分峰面積的RSD。

1.2.3.7?重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批藥材，按“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液6份，按“1.2.3.1”色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定各成分峰面積。

1.2.3.8?加樣回收試驗(yàn)。精密稱(chēng)取已知含量的白芍粉末共6份，每份0.05?g，分別精密添加與5個(gè)成分含量等量的對(duì)照品，按照“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液，在“1.2.3.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率。

1.2.3.9?樣品含量的測(cè)定。分別取不同生長(zhǎng)年限、不同采收月份的白芍樣品，按“1.2.3.3”方法制備供試品溶液，再按“1.2.3.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行操作3次，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品含量。

1.2.4?不同采收月份白芍物質(zhì)的積累動(dòng)態(tài)。用電子天平測(cè)定不同采收月份白芍的根鮮重、根干重，計(jì)算藥材折干率。

1.2.5?不同生長(zhǎng)年限白芍物質(zhì)的積累動(dòng)態(tài)。分別用電子天平、游標(biāo)卡尺測(cè)定不同生長(zhǎng)年限白芍的根鮮重、根干重、藥材長(zhǎng)短、直徑等，計(jì)算藥材的折干率。

2?結(jié)果與分析

2.1?色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

從對(duì)照品溶液與樣品溶液的液相色譜圖（圖1）可以看出，相同分析條件下，樣品溶液與對(duì)照品溶液中對(duì)應(yīng)的分析時(shí)間下均有5個(gè)色譜峰出現(xiàn)，經(jīng)計(jì)算樣品與其他各成分峰的分離度>1.5，理論板數(shù)按芍藥苷（峰4）計(jì)算不低于2?000，符合要求。

2.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制?以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)回歸處理，得各成分的回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3?穩(wěn)定性試驗(yàn)?按照“1.2.3.5”方法進(jìn)行操作，測(cè)定各成分峰面積。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷5個(gè)成分峰面積的RSD均小于2.0%，說(shuō)明供試品溶液在室溫下24?h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4?精密度試驗(yàn)?按照“1.2.3.6”方法進(jìn)行操作，重復(fù)進(jìn)樣6次，定量測(cè)定沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷5個(gè)成分的含量，計(jì)算其RSD分別為1.2%、1.4%、0.8%、0.4%、1.5%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5?重復(fù)性試驗(yàn)?按照“1.2.3.7”方法進(jìn)行操作，測(cè)定沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷的含量分別為0.103%、0.459%、1.303%、2.607%、0.126%，RSD分別為1.3%、1.1%、0.7%、0.6%、0.9%，符合規(guī)定。

2.6?加樣回收率試驗(yàn)

按照“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液，在“1.2.3.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果符合規(guī)定，見(jiàn)表3。

2.7?不同采收月份白芍物質(zhì)的積累動(dòng)態(tài)

測(cè)定不同采收月份的白芍生長(zhǎng)量，結(jié)合每公頃種植白芍45?000～60?000株，以3?500株計(jì)算白芍的產(chǎn)量，產(chǎn)量（kg/hm2）=單株藥材干重×3?500×15，結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可以看出，9—10月白芍藥材根部干物質(zhì)積累量達(dá)到最高峰，平均為0.187?kg/株，產(chǎn)量也較高，此時(shí)白芍藥材粉性足、商品性狀良好、經(jīng)濟(jì)附加值高，可以作為最佳采收期。

2.8?不同采收月份白芍各成分含量的測(cè)定

從表5可以看出，5個(gè)成分含量總和以4月份含量為最高，4月份之后含量開(kāi)始下降，9—10月份含量變化較為平穩(wěn)，12月份含量回升，水溶性浸出物、醇溶性浸出物變化規(guī)律與有效成分含量基本一致。在采收月份內(nèi)，白芍的有效成分含量呈現(xiàn)出波動(dòng)的趨勢(shì)，9—10月份處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，且藥材粉性足、指標(biāo)成分芍藥苷含量較高、折干率較高、產(chǎn)量高，此時(shí)采收較為合理，可作為最佳采收期。

2.9?不同生長(zhǎng)年限白芍物質(zhì)的積累動(dòng)態(tài)

從表6可以看出，白芍2年生干物質(zhì)增加較快，較1年生白芍干重增加了122.9%，3年生、4年生白芍干重比前一年的增加率均在30%以上，5年生白芍干重比前一年的增加率僅為8.1%，與4年生比較產(chǎn)量增加不多。

2.10?不同生長(zhǎng)年限白芍各成分含量的測(cè)定

從表7可以看出，5個(gè)成分含量總和以栽后生長(zhǎng)5年的白芍中含量最高，4年生含量最低，但芍藥苷含量仍高達(dá)1.842%，符合《中國(guó)藥典》芍藥苷不得低于1.6%的規(guī)定。1～2年生白芍的有效成分含量較高，但產(chǎn)量較低，且白芍藥材根細(xì)小、質(zhì)地疏松捏之下陷、性狀不佳，經(jīng)濟(jì)效益差;3年生白芍雖有效成分含量較高，但產(chǎn)量一般，經(jīng)濟(jì)效益較差;5年生白芍雖產(chǎn)量及有效成分含量都較好，但有部分根莖出現(xiàn)木質(zhì)化和空心，降低了藥材品質(zhì)，且比前一年產(chǎn)量增加不多，種植成本過(guò)高。確定最佳采收期需要從藥材的產(chǎn)量與質(zhì)量2個(gè)方面進(jìn)行綜合考慮，當(dāng)產(chǎn)量與質(zhì)量的變化趨勢(shì)不一致時(shí)，就要考慮活性成分的總獲得量[6]。綜合種植成本、經(jīng)濟(jì)效益、藥材質(zhì)量和產(chǎn)量考慮，白芍藥材最佳采收年限應(yīng)為4年，這樣既能保證藥材的質(zhì)量，又有較高的產(chǎn)量。

3?結(jié)論與討論

該研究建立了HPLC法同步測(cè)定白芍藥材中沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性良好，為建立白芍的多成分質(zhì)量控制方法提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)于白芍適宜采收期的研究[7-13]，一般為2～5年、6—10月不等。該試驗(yàn)綜合分析了白芍植株的生長(zhǎng)情況以及白芍中多種有效成分含量累積、浸出物的變化情況，確定白芍以4年生較好，而同一年份中以9—10月較好，此時(shí)采收的白芍藥材形體飽滿、粉性足，質(zhì)量和產(chǎn)量均高，可作為最佳的采收期，這與金傳山等[9]的研究結(jié)果基本一致。

此次試驗(yàn)研究結(jié)果表明，不同采收期白芍的有效成分含量存在差別，結(jié)合白芍藥材有效成分的積累量、種植成本、土地利用率、產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益等因素綜合考慮，亳州地區(qū)白芍應(yīng)在移栽4年后的9—10月晴天采收，此時(shí)收獲的白芍藥材多種有效成分較為穩(wěn)定、粉性足、商品性狀良好、產(chǎn)量高，經(jīng)濟(jì)附加值也高。

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