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      β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對肝癌細(xì)胞體外增殖能力的影響

      2021-03-02 06:01:22李燦燁張嘉嘉龐裕昌劉靖
      生物化工 2021年1期
      關(guān)鍵詞:淫羊藿苷包合物

      李燦燁,張嘉嘉,龐裕昌,劉靖

      (佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院,廣東佛山 528000)

      淫羊藿苷(Icariin,ICA)是一種黃酮苷類化合物,在藥理作用上不僅具有抗炎抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等活性,在治療骨質(zhì)疏松、精神類疾病如阿爾茲海默病、帕金森以及在風(fēng)濕病、腦缺血和動脈粥樣硬化等多種疾病方面也具有很好的療效。

      近年來,多項研究已證明淫羊藿苷對肝腫瘤有一定的抑制效果,且具有一定的劑量依賴性[1]。但是淫羊藿苷立體空間較大,在水中的溶解度低、溶出速度慢,生物利用度低[2],其應(yīng)用受到了極大的限制。近年來,研究人員致力于研究提高淫羊藿苷生物利用度的方法。

      β-環(huán)糊精(β-CD)作為一種圓筒狀有機(jī)物,具有良好的水溶性,增溶效果好,不僅能夠有效地將淫羊藿苷進(jìn)行包合并運輸[3],而且對細(xì)胞無毒性[4]。本實驗將β-環(huán)糊精與淫羊藿苷以99∶1的質(zhì)量比制備生成β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物,將其和淫羊藿苷分別作用于SMMC-S7721和Hep-G2肝癌細(xì)胞,比較研究β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對SMMC-7721細(xì)胞和Hep-G2細(xì)胞體外增殖的影響。

      1 材料與方法

      1.1 試驗材料

      1.1.1 細(xì)胞株及培養(yǎng)

      實驗所用SMMC-7721細(xì)胞株和Hep-G2細(xì)胞株為中山大學(xué)陶亮課題組所贈。細(xì)胞在含10%胎牛血清、1%的青霉素-鏈霉素溶液的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)。

      1.1.2 試劑

      青霉素-鏈霉素溶液,批號J190007,Gibco公司;RPMI-1640培養(yǎng)基,批號C11995500BT,Gibco公司;胎牛血清,批號1928700,BI公司;胰蛋白酶,批號2062475,Gibco公司;二甲基亞砜,廣州永津生物科技有限公司;CCK-8試劑盒,批號PH687,同仁化學(xué)研究所;淫羊藿苷,薩恩化學(xué)技術(shù)有限公司;β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物,佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院丁毅力課題組制作。

      1.1.3 儀器

      KosterCAM KMC-500倒置熒光顯微鏡,Carl Zeiss;Thermo 3111/8038二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱,Thermo Fisher Scientific公司;MK3&4MK2酶標(biāo)儀,Bio Tek公司;超凈工作臺,蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;IC 1000自動細(xì)胞計數(shù)儀,上海睿鈺生物科技有限公司;TDZ5-WS高速離心機(jī),艾本德中國有限公司;HWS-12恒溫水浴鍋,上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

      1.2 實驗方法

      1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

      配置含10%胎牛血清、1%的青霉素-鏈霉素溶液的RPMI-1640培養(yǎng)液,將SMMC-7721細(xì)胞和Hep-G2細(xì)胞分別轉(zhuǎn)移至裝有5 mL培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中,置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),2 d更換一次培養(yǎng)液,并每天記錄細(xì)胞的生長狀況。

      1.2.2 酶標(biāo)儀法

      檢測淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對肝癌細(xì)胞體外增殖的抑制作用:收集對數(shù)生長期生長狀況良好的SMMC-7721細(xì)胞和Hep-G2細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化處理后,用含有10%胎牛血清和1%雙抗的培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞懸液,配制成濃度為1×105cell/mL的兩種細(xì)胞懸液,分別接種在96孔板中,每孔接種100 μL細(xì)胞懸液。培養(yǎng)24 h后,β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物組每板分別加入100 μL不同濃度的β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物,使各組包合物終濃度分別為 25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL,每個濃度5個復(fù)孔;淫羊藿苷組分別加入100 μL不同濃度淫羊藿苷,使其終濃度為 25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL,每個濃度5個復(fù)孔,同一96孔板上設(shè)置空白組(培養(yǎng)基組)和對照組(純細(xì)胞組),放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后,每孔加入20 μL CCK-8,孵育3 h,波長為450 nm條件下測定各孔吸光度(OD)值,根據(jù)公式(1)計算細(xì)胞增殖抑制率。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

      采用SPSS Statistics 25統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果以(±s)表示。不同濃度藥物組、空白組和對照組比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響

      不同濃度的ICA和ICA包合物對Hep-G2細(xì)胞的增殖作用見表1。如表1所示,在藥物作用24 h時,對照組與不同濃度的淫羊藿苷藥物組、β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),表明不同濃度的淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物均對SMMC-7721細(xì)胞具有一定的抑制作用,呈劑量依賴性。同濃度β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物組淫羊藿苷含量是淫羊藿苷組的1%,但對SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用明顯,表明β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物能夠有效提高淫羊藿苷抑制SMMC-7721增殖的能力。

      表1 不同濃度的ICA和ICA包合物對SMMC-7721細(xì)胞的增殖作用

      2.2 淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對Hep-G2細(xì)胞增殖的影響

      不同濃度的ICA和ICA包合物對Hep-G2細(xì)胞的增殖作用見表2。如表2所示,在藥物作用24 h時,正常對照組與不同濃度的淫羊藿苷藥物組、β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);表明不同濃度的淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物均對Hep-G2細(xì)胞均具有一定的抑制作用,且呈劑量依賴性。同濃度β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物組淫羊藿苷含量是淫羊藿苷組的1%,但對Hep-G2細(xì)胞的抑制作用高于淫羊藿苷組,表明β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物能夠明顯提高淫羊藿苷抑制Hep-G2增殖的能力。

      表2 不同濃度的ICA和ICA包合物對Hep-G2細(xì)胞的增殖作用

      肝癌全球發(fā)病率高,死亡率高[5],是我國常見的一種惡性腫瘤[6]。淫羊藿苷是從淫羊藿屬植物莖葉中提取的黃酮類有效成分,作為一種具有極其廣泛的藥理作用的中藥單體,具有良好的開發(fā)前景。淫羊藿苷對腦缺血和缺氧癥狀有保護(hù)作用[7],可用于治療帕金森病和阿爾茲海默癥等[8-9],可幫助骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,改善骨質(zhì)疏松[10];治療乳腺疾病[11],抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。但由于淫羊藿苷水溶性不佳,生物利用度低,限制了其在臨床與基礎(chǔ)研究里的應(yīng)用價值,因此提高淫羊藿苷的水溶性是當(dāng)前研究的熱點。β-環(huán)糊精是一種優(yōu)秀的藥物包合材料,結(jié)構(gòu)中存在特定的疏水空腔,可以與膽固醇和磷脂等細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)通過主-客體相互作用,促進(jìn)脂質(zhì)的外流并且調(diào)節(jié)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)[12]。它能夠促進(jìn)藥物吸收的同時還可以減輕藥物對機(jī)體的刺激,同時還作為緩釋和靶向制劑的載體[13]。同時β-環(huán)糊精不僅對藥物具有良好的增溶效果,它在提高生物利用度的同時還能減低藥物的毒性,而且其安全性已被廣泛認(rèn)可[14]。

      3 結(jié)語

      本實驗顯示,不同劑量的淫羊藿苷和β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物對SMMC-7721細(xì)胞和Hep-G2細(xì)胞均具有一定的增殖抑制作用,特別是對Hep-G2細(xì)胞。含藥量較少的包合物組抑制效果明顯,表明β-環(huán)糊精淫羊藿苷包合物能夠提高淫羊藿苷藥物對這兩種肝癌細(xì)胞的抑制作用,具有較為廣闊的開發(fā)前景。

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