葛麗萍，顏 皓，韓 峰

(內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

中藥注射劑是我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)重要的組成部分，其藥理藥效以及安全性研究越來(lái)越受到藥學(xué)研究人員的重視。銀杏達(dá)莫注射液為心腦血管擴(kuò)張藥，用于預(yù)防和治療冠心病、血栓栓塞性疾病。考慮到中藥制劑的成分復(fù)雜，尤其一些中藥注射劑，由于含有溶血成分或是雜質(zhì)等，易引起過(guò)敏、溶血等嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩種不同檢測(cè)方法對(duì)其安全性指標(biāo)進(jìn)行考察，為保證中藥注射劑臨床使用安全和制劑質(zhì)量的可控性提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)試劑、動(dòng)物及儀器

1.1 受試檢品：銀杏達(dá)莫注射液

廠(chǎng)家：A制藥股份有限公司，B藥業(yè)股份有限公司，C制藥有限公司

規(guī)格：5mL，10mL

1.2 試劑：氯化鈉注射液，規(guī)格：100mL

廠(chǎng)家：青州堯王制藥有限公司

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：家兔

來(lái)源：北京市海淀區(qū)興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，合格證編號(hào)：SCXK(京)2011-0006。

飼料來(lái)源：北京科澳協(xié)力飼料有限公司，證號(hào)：SCXK(京)2005-0007。

1.4 儀器

UV-2550 紫外分光光度計(jì)(廠(chǎng)家：島津)SKP-01型電熱恒溫培養(yǎng)箱(廠(chǎng)家：湖北黃石市醫(yī)療器械廠(chǎng))DL-5000型離心機(jī)(廠(chǎng)家：菲恰爾)

1.5 實(shí)驗(yàn)環(huán)境：內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)藥檢院藥理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室

使用許可證號(hào)：SYXK(蒙)2011-001

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 體外試管溶血法[1](試管觀(guān)察法)

2.1.1供試品溶液配制：量取5mL銀杏達(dá)莫注射液加入至100mL0.9%氯化鈉注射液中，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2取兔血，放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘，加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量，搖勻，離心15分鐘，除去上清液，沉淀細(xì)胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2～3次，至上清液不顯紅色。將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的混懸液，供試驗(yàn)用。

2.1.3取潔凈試管7只， 1～5號(hào)管為供試品管，6、7號(hào)管分別為陰性、陽(yáng)性對(duì)照管。各管依次加入2%紅細(xì)胞懸液、0.9%氯化鈉溶液、純化水、供試品溶液(見(jiàn)表1)，混勻后，置37℃恒溫箱中溫育，開(kāi)始每隔15分鐘觀(guān)察1次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀(guān)察1次，觀(guān)察3小時(shí)。

表1 試劑加入量

2.1.4結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

若試驗(yàn)中的溶液呈澄明紅色，管底無(wú)細(xì)胞殘留或少量紅細(xì)胞殘留，表明有溶血發(fā)生；如細(xì)胞全部下沉，上清液體無(wú)色澄明，表明無(wú)溶血發(fā)生[1]。

2.1.5試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)94批次銀杏達(dá)莫注射液進(jìn)行溶血檢驗(yàn)，結(jié)論均為合格。

2.2 改進(jìn)的溶血性試驗(yàn)[2](分光光度法)

2.2.1供試品溶液配制：同1.1。

2.2.2同1.2。

2.2.3取潔凈試管12只，進(jìn)行編號(hào)，1～5號(hào)管為供試品管，6～10號(hào)管為供試品對(duì)照管，11、12號(hào)為陰性、陽(yáng)性對(duì)照管。按下表所示依次加入2%紅細(xì)胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或純化水、受試物，混勻后，置37℃恒溫箱中進(jìn)行溫育3小時(shí)。

表2 試劑加入量

2.2.4將上述各管溶液，1100 轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。

2.2.5結(jié)合指導(dǎo)原則，以純化水為空白，選取545nm波長(zhǎng)處檢測(cè)上述各管的吸光度(OD)值。

2.2.6溶血率按照下式進(jìn)行計(jì)算：溶血率=(A供試品試驗(yàn)管-A供試品對(duì)照管-A陰性對(duì)照管)/(A陽(yáng)性對(duì)照管-A陰性對(duì)照管)×100%

2.2.7結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

溶血率>5%表明有溶血發(fā)生。

2.2.8實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)果分析總結(jié)

根據(jù)溶血率判定標(biāo)準(zhǔn)，上述檢測(cè)的64批銀杏達(dá)莫注射液的溶血率均小于5%，全部合格。其中，檢測(cè)A藥業(yè)股份有限公司樣品28批，占檢測(cè)總量43.75%；檢測(cè)B制藥股份有限公司樣品33批，占檢測(cè)總量51.56%；檢測(cè)C制藥有限公司樣品3批，占檢測(cè)總量4.69%。檢測(cè)結(jié)果中溶血率≥1%的樣品共有37批，其中A藥業(yè)股份有限公司樣品占29.73%；B制藥股份有限公司樣品占62.16%；C制藥有限公司樣品占8.57%。

在對(duì)94批銀杏達(dá)莫注射液進(jìn)行完常規(guī)體外試管溶血法(試管觀(guān)察法)檢測(cè)后，并得出全部合格的結(jié)論后，又從其中選取了64批樣品(包括本次抽檢的3個(gè)廠(chǎng)家及其不同規(guī)格的產(chǎn)品)并采取了改進(jìn)的體外溶血性試驗(yàn)法(分光光度法)進(jìn)行驗(yàn)證，使得本次銀杏達(dá)莫注射液的溶血試驗(yàn)檢測(cè)更為準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)更為詳實(shí)。通過(guò)分光光度法檢測(cè)結(jié)果的比較，可以看出，B、C企業(yè)產(chǎn)品的溶血偏高的占比較大，存在一定的安全風(fēng)險(xiǎn)，有必要加強(qiáng)產(chǎn)品質(zhì)量控制。

分光光度法與常規(guī)方法比較，操作比較復(fù)雜，但可以作為常規(guī)方法有效補(bǔ)充，可以更直接準(zhǔn)確地反映制劑對(duì)血細(xì)胞的影響。當(dāng)采用常規(guī)法測(cè)定的結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)，可采用分光光度法作為輔助方法，幫助對(duì)結(jié)果進(jìn)行更為精確的判斷。