張高立，金晶*，呂維娜，陳喆

(1.浙江恒澤生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司，浙江 杭州 311107；2.杭州市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，浙江 杭州 310027)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，俗稱加州鱸魚，原產(chǎn)于美國加利福尼亞州，隸屬于鱸形目太陽魚科,于1893年引入我國，由于生長快，肉多刺少，味道鮮美，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，已成為我國的主要淡水魚養(yǎng)殖品種之一，主要分布在廣東、江蘇、浙江、上海、山東、四川等地區(qū)[1]。大口黑鱸生性兇猛，在運(yùn)輸過程中常因激烈掙扎造成表皮擦傷、掉鱗等現(xiàn)象，同時(shí)應(yīng)激反應(yīng)會(huì)使代謝速率加快，增大氧氣的消耗量及氨氮類物質(zhì)的排放量，導(dǎo)致運(yùn)輸過程中的存活率下降。

研究發(fā)現(xiàn)，在運(yùn)輸過程中可使用麻醉劑來減輕魚類的應(yīng)激反應(yīng)[2]。目前，活魚運(yùn)輸時(shí)常用的麻醉藥物有乙醇、乙醚、MS-222等，但使用這些藥物均存在安全隱患，且麻醉效果不佳。如經(jīng)MS-222麻醉的水產(chǎn)品需21 d的藥物消退期才可以進(jìn)行銷售；丁香酚的揮發(fā)性使其在麻醉過程中的藥效會(huì)逐漸下降[3]。而CO2麻醉技術(shù)是一項(xiàng)使活魚長時(shí)間處于睡眠狀態(tài)以減少運(yùn)輸費(fèi)用的活魚運(yùn)輸新技術(shù)。作為活魚運(yùn)輸?shù)逆?zhèn)靜劑，CO2安全可靠，價(jià)格低廉，無藥物殘留，且能保證魚肉品質(zhì)，具有廣泛的應(yīng)用前途[4]。陳名帥等[5]發(fā)現(xiàn)，使用CO2將魚麻醉后進(jìn)行宰殺可以減輕其應(yīng)激反應(yīng)，提高魚片的品質(zhì)；Guan Weiliang等[6]發(fā)現(xiàn)，高濃度的CO2水溶液能夠麻醉羅非魚，并且顯著延長其在無水條件下的存活時(shí)間。目前，CO2麻醉技術(shù)對(duì)羅非魚[7]、白斑狗魚[8]、大西洋鮭魚[9]等的影響已有研究報(bào)道，但關(guān)于大口黑鱸麻醉研究還鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)以大口黑鱸為研究對(duì)象，采用CO2麻醉技術(shù)，研究不同CO2濃度、水溫、運(yùn)輸包裝方式對(duì)大口黑鱸麻醉保活效果的影響，確定最佳保活運(yùn)輸條件，制定出一套CO2麻醉大口黑鱸?；钸\(yùn)輸工藝，以期為大口黑鱸的?；钸\(yùn)輸提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與裝置

大口黑鱸產(chǎn)自浙江恒澤生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司，選擇體質(zhì)健康、無外傷、鱗片完整有活力的大口黑鱸，規(guī)格為400～450 g，試驗(yàn)前暫停喂料24 h。以下試驗(yàn)均設(shè)置3個(gè)平行組，每個(gè)平行組鱸魚數(shù)量為20尾。

CO2麻醉水經(jīng)由高濃度氣體置換裝置制備，水中CO2濃度(y)變化與機(jī)器通入CO2運(yùn)行時(shí)間(x)呈正比關(guān)系，公式為y=77.182x+70.818(R2=0.981 7)，具體裝置和流程見圖1。其中，麻醉及?；钣盟鶠槌浞制貧夂蟮木?。

圖1 麻醉裝置和流程

試驗(yàn)儀器有溶氧檢測(cè)儀(DO200 A，美國維賽YSI儀器公司)、pH計(jì)(PHS-3C，上海儀電科學(xué)有限公司)、便攜式CO2濃度計(jì)[CGP-31型，迪凱凱(上海)材料貿(mào)易有限公司]，保溫箱(45 cm×30 cm×30 cm)、雙層打包袋(80 cm×40 cm×12絲)，?；钸\(yùn)輸1 kg魚用水量為4 L。高濃度氣體置換裝置[OD-210LE，奧誠寰佳實(shí)業(yè)(上海)有限公司]。

1.2 方法

1.2.1 大口黑鱸麻醉及復(fù)蘇行為特征評(píng)估

本試驗(yàn)在Erikson[10]的基礎(chǔ)上對(duì)試驗(yàn)方法加以修改，將麻醉程度分為A1～A4階段，復(fù)蘇程度分為R1～R4階段。

麻醉程度具體表現(xiàn)行為特征。A1階段產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，呼吸頻率加快；A2階段對(duì)外界刺激反應(yīng)能力降低，鰓蓋張合頻率降低，身體平衡性較好；A3階段除強(qiáng)刺激外，對(duì)外界反應(yīng)能力弱，鰓蓋有規(guī)律地緩慢張合，魚體失去平衡；A4階段完全失去反應(yīng)能力，鰓蓋張合微弱沒有規(guī)律，魚體不再持續(xù)游動(dòng)。

復(fù)蘇程度具體表現(xiàn)行為特征。R1階段開始恢復(fù)鰓蓋張合；R2階段魚體開始游動(dòng)，身體平衡性沒有恢復(fù)；R3階段身體平衡完全恢復(fù)，對(duì)外界反應(yīng)恢復(fù)；R4階段行為完全恢復(fù)正常。

1.2.2 不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸麻醉?；钚Ч挠绊?/p>

在25 ℃水溫，保持氧氣濃度>10 mg·L-1的條件下，將大口黑鱸分別放入CO2濃度為100、200、300、400和500 mg·L-1的麻醉水中浸泡。在麻醉過程中，觀察并記錄鱸魚的行為特征和對(duì)應(yīng)的麻醉時(shí)間。當(dāng)魚進(jìn)入A4階段后，轉(zhuǎn)入相同水溫的清水中(O2濃度>10 mg·L-1)，觀察并記錄大口黑鱸復(fù)蘇情況。

將經(jīng)過5種不同CO2濃度麻醉后進(jìn)入A4麻醉階段的大口黑鱸放入25 ℃清水中進(jìn)行?；钤囼?yàn)，觀察并記錄6、12、18和24 h后鱸魚存活情況，同時(shí)結(jié)合CO2濃度對(duì)大口黑鱸麻醉效果，篩選出最佳CO2濃度。

1.2.3 不同水溫對(duì)大口黑鱸麻醉?；钚Ч挠绊?/p>

制備O2濃度>10 mg·L-1，最優(yōu)CO2濃度的麻醉水，設(shè)計(jì)4個(gè)麻醉試驗(yàn)溫度組15、20、25和30 ℃對(duì)其進(jìn)行麻醉試驗(yàn)。在麻醉過程中，觀察并記錄鱸魚的行為特征和對(duì)應(yīng)的麻醉時(shí)間。

將經(jīng)過4種不同水溫麻醉后進(jìn)入A4麻醉階段的大口黑鱸放入與麻醉水溫相對(duì)應(yīng)的15、20、25和30 ℃清水中進(jìn)行?；钤囼?yàn)，觀察并記錄6、12、18和24 h后鱸魚存活情況，結(jié)合水溫對(duì)大口黑鱸麻醉效果，篩選出最佳水溫。

1.2.4 不同包裝運(yùn)輸方式對(duì)大口黑鱸?；钚Ч挠绊?/p>

將在最優(yōu)CO2濃度、水溫的條件麻醉后進(jìn)入A4麻醉階段的大口黑鱸分別裝入雙層打包袋(一次性補(bǔ)充液氧，封閉打包置于泡沫箱內(nèi))、保溫箱A(持續(xù)補(bǔ)充液氧，關(guān)閉保溫箱)和保溫箱B(持續(xù)用增氧泵曝氣，關(guān)閉保溫箱)中，觀察并記錄6、12、18和24 h后鱸魚存活情況，篩選出最佳包裝運(yùn)輸方式。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸麻醉?；钚Ч挠绊?/h3>

不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸的麻醉效果不同。由表1所示，CO2麻醉大口黑鱸的效果與其濃度有關(guān)，CO2濃度越高，麻醉時(shí)間越短，復(fù)蘇的時(shí)間越長。其中，除了CO2濃度為100 mg·L-1時(shí)不能達(dá)到A4階段麻醉效果外，其他CO2濃度均能對(duì)大口黑鱸進(jìn)行完全麻醉。

表1 不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸麻醉效果

不同CO2濃度麻醉對(duì)大口黑鱸24 h內(nèi)存活率影響不同，如圖2所示，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著CO2濃度升高，?；盥食氏仍黾雍鬁p小的趨勢(shì)。在CO2濃度為100～200 mg·L-1時(shí)，24 h內(nèi)大口黑鱸存活率為100%。而CO2濃度高于300 mg·L-1時(shí)，濃度越高存活率越低，存活時(shí)間越短；濃度為500 mg·L-1時(shí)，24 h后存活率僅為50%。因此，結(jié)合不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸的麻醉效果，選擇最優(yōu)CO2濃度為200 mg·L-1。

圖2 不同CO2濃度對(duì)大口黑鱸?；顣r(shí)間和保活率的影響

2.2 不同水溫對(duì)大口黑鱸麻醉?；钚Ч挠绊?/h3>

在CO2濃度為200 mg·L-1、水溫在15、20、25、30 ℃條件下對(duì)大口黑鱸進(jìn)行麻醉，觀察并記錄麻醉情況和復(fù)蘇情況。表2顯示，水溫在15 ℃和30 ℃時(shí)，大口黑鱸進(jìn)入麻醉狀態(tài)時(shí)間短，到達(dá)A4階段分別為23和19 min；在20 ℃和25 ℃水溫下，到達(dá)A4階段需要30 min左右。復(fù)蘇時(shí)間最短的為20 ℃和30 ℃水溫，其次為25 ℃水溫，15 ℃水溫時(shí)復(fù)蘇時(shí)間最長。

表2 不同水溫對(duì)大口黑鱸麻醉效果

保活水溫對(duì)大口黑鱸存活率影響較大。由圖3可知，在?；钏疁貫?0 ℃下，大口黑鱸存活率最低，6 h內(nèi)就出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，24 h后存活率為0。在15～25 ℃條件下，前6 h大口黑鱸存活率均為100%，其中 25 ℃在12 h左右出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，而15～20 ℃下，大口黑鱸可保持24 h以上，存活率100%。由此可知，?；钏疁貫?5～20 ℃時(shí)的大口黑鱸?；钚Ч罴?。

圖3 不同水溫對(duì)大口黑鱸?；顣r(shí)間和?；盥实挠绊?/p>

2.3 不同包裝運(yùn)輸方式對(duì)大口黑鱸保活效果的影響

試驗(yàn)采用3種包裝方式對(duì)大口黑鱸進(jìn)行?；钸\(yùn)輸試驗(yàn)。由圖4可知，打包袋包裝?；钚Ч畈睿? h內(nèi)存活率僅為65%，12 h后存活率為0。保溫箱?；钚Ч^好。其中，保溫箱A(補(bǔ)充液氧)的?；钚Ч^保溫箱B(氧泵曝氣)好，保溫箱A 24 h以上的存活率為100%。

圖4 不同包裝方式對(duì)大口黑鱸?；顣r(shí)間和?；盥实挠绊?/p>

3 討論

本試驗(yàn)通過大口黑鱸CO2麻醉試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CO2濃度對(duì)大口黑鱸的麻醉效果及存活率具有顯著影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，在一定濃度范圍內(nèi)，CO2濃度越高，麻醉效果越好，但?；顣r(shí)間卻隨著CO2濃度升高呈先增加后減小的趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CO2濃度較低時(shí)，大口黑鱸不能進(jìn)入完全麻醉狀態(tài)，?；顣r(shí)間降低，因此，低濃度CO2麻醉不利于大口黑鱸保活運(yùn)輸。而當(dāng)水中CO2濃度過高時(shí)，pH值會(huì)下降，導(dǎo)致水中化學(xué)物質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)變，對(duì)魚體產(chǎn)生毒害作用。同時(shí)CO2過高會(huì)降低魚的載氧能力，導(dǎo)致魚類供氧不足而死亡[11]。王聰?shù)萚12]研究昆明裂腹魚幼魚對(duì)CO2的耐受性發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CO2含量達(dá)到(16.097±1.952)mg·L-1時(shí)，魚體開始出現(xiàn)麻醉的現(xiàn)象，而最適麻醉濃度為(127.15±2.52)～(175.14±33.11)mg·L-1。因此，選擇適宜的CO2濃度才有利于大口黑鱸的?；钸\(yùn)輸。試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)CO2濃度為200 mg·L-1時(shí)，既能對(duì)大口黑鱸起到較好的麻醉效果，又能保證存活時(shí)間。

水溫對(duì)大口黑鱸麻醉效果和保活時(shí)間也具有較大影響。在一定范圍內(nèi)，隨著麻醉溫度的升高，進(jìn)入麻醉狀態(tài)的時(shí)間呈先上升再下降的趨勢(shì)。李晨虹等[13]通過對(duì)尼羅羅非魚低溫麻醉研究發(fā)現(xiàn)，16 ℃以上不受溫度影響，在降到11.4 ℃過程中，呼吸和游動(dòng)等生理行為減弱，進(jìn)入麻醉的時(shí)間較短。金一春等[8]通過試驗(yàn)表明，CO2麻醉白斑狗魚中，溫度升高則入麻速度變快。本試驗(yàn)水溫在15 ℃和30 ℃時(shí)，大口黑鱸進(jìn)入麻醉狀態(tài)時(shí)間短，在20 ℃和25 ℃下，到達(dá)A4階段較長需30 min。復(fù)蘇時(shí)間最短的為20 ℃和30 ℃水溫下，其次為25 ℃水溫，15 ℃水溫時(shí)復(fù)蘇時(shí)間最長。可能是低溫在一定程度上降低了新陳代謝和CO2的麻醉協(xié)同作用，導(dǎo)致魚體快速進(jìn)入休眠狀態(tài)。而隨著水溫的升高，魚體內(nèi)代謝的速率加快，復(fù)蘇時(shí)間就越短。另外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，水溫在15～20 ℃時(shí)?；钚Ч詈茫?5 ℃?；钚Ч沃?0 ℃的?；钚Ч畈?。有研究表明，水溫較高時(shí)，魚麻醉運(yùn)輸后的復(fù)蘇率和成活率大大降低。?；钸^程中周圍環(huán)境溫度偏高時(shí)，水生生物新陳代謝旺盛，消耗的能量多，對(duì)氧氣的需求量較大，最終會(huì)因缺氧而死亡[14]。因此，水溫控制在15～20 ℃可保證大口黑鱸的麻醉效果，提高大口黑鱸存活率。

包裝運(yùn)輸方式也是大口黑鱸麻醉保活運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵因子。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，打包袋包裝?；顣r(shí)間極短，保溫箱?；顣r(shí)間較長，其中保溫箱充液氧的包裝方式?；钚Ч詈茫；顣r(shí)間達(dá)24 h以上。

綜上所述，在CO2濃度為200 mg·L-1、氧氣濃度保持(10±1)mg·L-1以上、水溫15～20 ℃的條件下，對(duì)大口黑鱸麻醉30 min后，采用保溫箱充液氧運(yùn)輸方式，保溫運(yùn)輸箱中每4 L水裝魚1 kg，可使大口黑鱸?；钸\(yùn)輸時(shí)間超24 h，存活率達(dá)100%。