◎ 牛偉偉,楊 瑩,郭 舟,徐 程,邱韻心
(襄陽市公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心,湖北 襄陽 441000)
玉米赤酶烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和黃曲霉毒素B1是在小麥、玉米和大麥中常見的4種真菌毒[1]。當(dāng)小麥在田間受到真菌毒素污染時(shí),小麥粉也會(huì)存在一定量的真菌毒素,而小麥粉是我國(guó)主要的糧食加工品,其安全問題與人們的日常飲食息息相關(guān)[2],而目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中檢測(cè)真菌毒素對(duì)儀器條件要求較高,且操作復(fù)雜[3]。本試驗(yàn)采用快速試劑條和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比,旨在研究快速試劑卡大批量篩查小麥粉中4種真菌毒素的可行性。
市面上隨機(jī)抽取22份不同廠家的小麥粉;4種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液、快速檢測(cè)試劑條、免疫親和柱(檢測(cè)試劑盒)。
島津LC-20AT高效液相色譜(帶紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器)、酶標(biāo)儀、離心機(jī)、渦旋儀、氮吹儀、空氣壓力泵、電子天平、微量移液槍、玻璃纖維濾紙。
1.3.1 玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)曲線
取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋,配制成10.26 ng·mL-1,51.30 ng·mL-1、102.6 ng·mL-1、205.2 ng·mL-1和513.0 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.3.2 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)曲線
磷酸鹽緩沖溶液:精確稱取8.00 g氯化鈉、1.20 g磷酸氫二鈉、0.20 g硫酸二氫鉀,用900 mL純水溶解,用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0,用水定容至1 000 mL。
取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋,配制成50 ng·mL-1,100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和400 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.3.3 赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)曲線
清洗緩沖溶液:精確稱取25.0 g氯化鈉5.0 g磷酸氫二鈉,加入0.1 mL吐溫20,用水稀釋至1 L。
取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋,配制成2.85 ng·mL-1、7.125 ng·mL-1、14.25 ng·mL-1、28.5 ng·mL-1和57.0 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.3.4 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線
取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,逐級(jí)稀釋成配制成2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和50 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.4.1 玉米赤霉烯酮
(1)快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉于10 mL離心管中,加入4 mL 70%甲醇-水溶液,渦旋混勻后,離心5 min,取20 μL上清液加入0.3 mL樣品稀釋液,渦動(dòng)備用,吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中,待紫色顆粒完全溶解,室溫放置3 min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出,根據(jù)說明書判定結(jié)果。
(2)高效液相色譜法。熒光檢測(cè)器;色譜柱:C18柱;流動(dòng)相:乙腈-水-甲醇(46∶46∶8);流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)274 nm,發(fā)射波長(zhǎng)440 nm,進(jìn)樣量:50 μL;柱溫:35 ℃。
1.4.2 嘔吐毒素
(1)快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入6 mL 70%甲醇-水溶液,渦旋混勻后離心,取50 μL上清液加入0.35 mL(或0.75 mL)樣品稀釋液混勻備用,吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中,紫色顆粒完全溶解后放置3 min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中,5 min后判讀結(jié)果。
(2)高效液相色譜法。紫外檢測(cè)器;色譜柱:C18柱;流動(dòng)相:甲醇-水(20∶80);流速:0.8 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):218 nm;進(jìn)樣量:50 μL;柱溫:35 ℃。
1.4.3 赭曲霉毒素A
(1)快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入4 mL 50%甲醇-水溶液,渦旋混勻離心取100 μL上清液加入300 μL樣品稀釋液混勻備用,吸取 200μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中,待紫色顆粒完全溶解后放置3 min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出,1 min內(nèi)判讀結(jié)果。
(2)高效液相色譜法。熒光檢測(cè)器;色譜柱:C18柱;流動(dòng)相:乙腈-水-冰乙酸(96∶102∶2);流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)333 nm,發(fā)射波長(zhǎng)460 nm,進(jìn)樣量:50 μL;柱溫:35 ℃。
1.4.4 黃曲霉毒素B1
(1)快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入3 mL 70%甲醇-水溶液,振蕩后離心,取100 μL上清液加入300 μL樣品稀釋液混勻備用,吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中,待紫色顆粒完全溶解后放置3 min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出,1 min內(nèi)判讀結(jié)果。
(2)酶聯(lián)免疫吸附法。稱取20 g小麥粉與三角瓶中,加100 mL 70%甲醇-水,振蕩提取,靜置后過濾,用緩沖液稀釋,按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。用酶標(biāo)儀在450 nm濾鏡及示差濾鏡630 nm下讀取結(jié)果。
若檢測(cè)值低于方法的檢出限,則該項(xiàng)目結(jié)果視為未檢出,各方法的檢出限具體見表1。
表1 4種真菌毒素的檢出限表
兩種檢測(cè)方法結(jié)果具體見表2,22批小麥粉中玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素A和黃曲霉毒素B1的檢測(cè)結(jié)果一致,均為未檢出,其中4批小麥粉用兩種方法均檢出了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,數(shù)據(jù)結(jié)果基本一致。
表2 4種真菌毒素?cái)?shù)據(jù)結(jié)果表(單位:μg·kg-1)
續(xù)表2
用快速檢測(cè)卡和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)小麥粉中4種真菌毒素,通過對(duì)比結(jié)果發(fā)現(xiàn)快速檢測(cè)卡和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果基本一致,而且此操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短,可適用于大批量快速篩查。