莫嘉浩，許洪彬，李菁，李金生，綦向軍，鐘崇

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的左金丸治療肝癌機(jī)制探討

莫嘉浩1，許洪彬1，李菁2，李金生3，綦向軍4，鐘崇5

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；5.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405

運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究左金丸治療原發(fā)性肝癌的作用機(jī)制。通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)（TCMSP）獲取左金丸的化合物及靶點(diǎn)，以口服生物利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18為閾值進(jìn)行化合物篩選，將靶點(diǎn)輸入U(xiǎn)niprot獲取靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因Symbol；從人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards：The Human Gene Database）獲取原發(fā)性肝癌的疾病基因，并篩選出與左金丸靶點(diǎn)基因的交集基因；運(yùn)用Cytoscape3.7.1軟件繪制活性成分-靶點(diǎn)、疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)（基因）網(wǎng)絡(luò)圖；運(yùn)用String構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，運(yùn)用g:Profiler數(shù)據(jù)分析平臺(tái)進(jìn)行GO富集及KEGG通路富集分析；聯(lián)合主要化合物、交集基因與通路分析結(jié)果，繪制成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖。篩選得到左金丸化合物41種、交集基因111個(gè)，剔除不含交集基因（靶點(diǎn)）的化學(xué)成分后得到化合物31種，槲皮素、黃連素、吳茱萸堿等為左金丸的主要活性成分，AKT1、TP53、HSP90AA1等為主要作用靶點(diǎn)。GO富集分析共獲得條目136條，涉及細(xì)胞因子受體結(jié)合、核受體結(jié)合、調(diào)控序列特異性DNA結(jié)合等多個(gè)生物過程，KEGG富集分析得到165條通路。左金丸通過多靶點(diǎn)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路、乙型肝炎通路、IL-17信號(hào)通路等治療原發(fā)性肝癌。經(jīng)生物信息學(xué)的基因芯片驗(yàn)證，結(jié)果基本相符。

左金丸；原發(fā)性肝癌；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；信號(hào)通路

原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）指發(fā)生于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤[1]，全球病死率居惡性腫瘤第三位[2]。2015年報(bào)道，我國肝癌發(fā)病率為466.1/10萬，病死率為422.1/10萬[3]。因其具有發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速、復(fù)發(fā)快、預(yù)后差等特點(diǎn)[4]，故防治是臨床研究重點(diǎn)。

左金丸出自《丹溪心法》，由黃連、吳茱萸組成，主要用于肝火犯胃之嘔吐、脅痛等。藥理學(xué)研究表明，其水煎液可通過阻斷AP-1等通路有效抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖，也可通過誘導(dǎo)線粒體凋亡以抗癌[5-6]。有miRNA網(wǎng)絡(luò)機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，黃連、吳茱萸的主要有效成分黃連素與吳茱萸堿聯(lián)用具有抗癌作用[7]。目前雖已確認(rèn)黃連素和吳茱萸堿分別為黃連、吳茱萸的抗腫瘤活性成分[8]，但中藥成分復(fù)雜，靶點(diǎn)眾多，尚需進(jìn)一步分析?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，左金丸作用靶點(diǎn)可能涉及癌癥、肝病、代謝、炎癥等，與癌癥尤為相關(guān)[8]，但針對(duì)特定疾病的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究仍欠缺。本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的多成分、多靶點(diǎn)、多通路分析方法，全面闡釋左金丸治療肝癌的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 左金丸化合物與靶點(diǎn)獲取

運(yùn)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，http://lsp. nwu.edu.cn/tcmsp.php）分別查找黃連、吳茱萸，獲取相應(yīng)的化合物。以口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（drug likeness，DL）≥0.18為條件進(jìn)行化合物篩選，以提高數(shù)據(jù)的真實(shí)可靠性[10-13]。運(yùn)用TCMSP查找所得化合物對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息，將結(jié)果輸入U(xiǎn)niprot（http://www.uniprot.org/），獲取靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因Symbol。

1.2 肝癌疾病基因獲取

以“hepatocellular carcinomas”“l(fā)iver cancer”“hepatoma”“hepatic cancer”“hepatic carcinoma”為關(guān)鍵詞，從人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards：The Human Gene Database，https://www.genecards.org/）獲取肝癌的疾病基因，與左金丸的靶點(diǎn)基因?qū)Ρ群蠛Y選出二者的交集基因。GeneCards數(shù)據(jù)庫集合已得到實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證、組學(xué)檢測驗(yàn)證的基因與疾病關(guān)系信息，具有全面性、權(quán)威性，并通過GIFtS算法對(duì)基因-疾病的相關(guān)度進(jìn)行排序[14]，其Relevance score有助于從特定疾病對(duì)應(yīng)的諸多靶點(diǎn)中篩選出相關(guān)度更高的靶點(diǎn)[15]。設(shè)置Relevance score≥10，提取高關(guān)聯(lián)度靶點(diǎn)基因。

1.3 活性成分-靶點(diǎn)、疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)（基因）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

獲取交集基因后，對(duì)化合物進(jìn)行反向篩選，剔除靶點(diǎn)基因中不含交集基因的化合物，運(yùn)用Cytoscape3.7.1軟件繪制活性成分-靶點(diǎn)、疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)（基因）網(wǎng)絡(luò)圖，并采用該軟件的network analyzer模塊進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析。

1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將所得交集基因輸入String數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（https://string-db.org/）進(jìn)行蛋白相互作用（protein- protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)分析，分析模式設(shè)定為“Multiple proteins”，物種限定為“Homo sapiens”。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)讀后，設(shè)置置信度≥0.99，并隱藏孤立蛋白，最后輸出PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析

運(yùn)用g:Profiler數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（https://biit.cs.ut.ee/ gprofiler/gost）進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，將物種限定為“Homo sapiens”，采用g:SCS算法進(jìn)行值的校正。g:SCS算法是g:Profile團(tuán)隊(duì)開發(fā)的用于計(jì)算GO和KEGG富集分析所得值的多重測試校正方法，與Bonferroni及False Discovery Rate等校正方法相比，該算法考慮到每個(gè)生物體術(shù)語注釋下的潛在基因集合結(jié)構(gòu)，提供了一個(gè)更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)拈撝礫7]，篩選校正后＜0.05的富集結(jié)果。運(yùn)用Excel2010進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化，R軟件繪制靶點(diǎn)-通路干預(yù)機(jī)制圖。

1.6 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

結(jié)合主要成分、核心靶點(diǎn)與KEGG分析所得通路，運(yùn)用Cytoscape3.7.1軟件繪制成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，分析其整體關(guān)聯(lián)。

1.7 肝癌基因樣本獲取

為進(jìn)一步驗(yàn)證基因的準(zhǔn)確性，以“hepatocellular carcinomas”“l(fā)iver cancer”“hepatoma”“hepatic cancer”為關(guān)鍵詞，檢索美國國立生物技術(shù)信息中心（NCBI）的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/），篩選有關(guān)人類肝癌基因的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。然后使用R軟件（3.6.1）中的affy軟件包（1.62.0），將mRNA的原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成可識(shí)別格式，通過Robust-Multi-Array（RMA）方法進(jìn)行背景矯正和標(biāo)準(zhǔn)化處理，最終得到標(biāo)準(zhǔn)化后的表達(dá)值矩陣，用于后續(xù)的差異表達(dá)分析。

1.8 篩選并驗(yàn)證差異表達(dá)基因

利用R軟件中l(wèi)imma函數(shù)包篩選肝癌樣品中的差異表達(dá)mRNAs。篩選閾值為＜0.05和|log2FC|＞0.5，繪制火山圖，并在樣品中進(jìn)行差異表達(dá)mRNAs的雙向聚類分析。將差異基因與左金丸基因取交集，再與研究結(jié)果的肝癌-左金丸交集基因結(jié)果對(duì)比，驗(yàn)證準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

2.1 左金丸化學(xué)成分及靶點(diǎn)

以O(shè)B≥30%、DL≥0.18為篩選條件，共獲得左金丸活性成分44種，其中黃連14種、吳茱萸30種，去除重復(fù)成分后共41種。轉(zhuǎn)換后得到靶點(diǎn)基因黃連287個(gè)、吳茱萸330個(gè)，去除重復(fù)后得到靶點(diǎn)基因187個(gè)。從GeneCards數(shù)據(jù)庫獲得肝癌疾病基因共8567種，高關(guān)聯(lián)度靶點(diǎn)基因1196個(gè)。對(duì)疾病靶點(diǎn)和左金丸靶點(diǎn)經(jīng)人工校對(duì)后取交集，獲得基因111個(gè)，剔除不含交集基因（靶點(diǎn)）的化學(xué)成分，得到相關(guān)化學(xué)成分31種，其中黃連7種、吳茱萸22種，二者共有成分2種，見表1。

2.2 可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.2.1 活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

采用Cytoscape3.7.1軟件對(duì)左金丸中具有靶點(diǎn)的化合物及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)構(gòu)建可視化網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見圖1。該網(wǎng)絡(luò)共142個(gè)點(diǎn)，包括化合物31個(gè)、靶點(diǎn)基因111個(gè)，其相互作用用連線表示。利用Cytoscape軟件Network Analyzer插件中的Visualize Parameters對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行處理，節(jié)點(diǎn)大小代表Degree的大小，邊的粗細(xì)代表Edge Betweenness的大小。其中5個(gè)靶點(diǎn)基因Degree＞20，提示這些靶點(diǎn)基因可能在左金丸中起主要藥效作用。

2.2.2 疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

采用Cytoscape3.7.1軟件繪制左金丸治療肝癌疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)（基因）網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見圖2。

注：黃色代表化合物，紫色代表靶點(diǎn)基因

注：綠色代表交集基因，黃色代表化合物；左下方為Degree＜3的集合，右下方為Degree≥3的集合

2.3 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)

將左金丸治療肝癌的靶點(diǎn)基因?qū)隨tring11.0數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，PPI網(wǎng)絡(luò)見圖3。62個(gè)蛋白存在85條相互作用關(guān)系。將PPI網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape3.7.1軟件并利用cytoHubba插件分析網(wǎng)絡(luò)中基因的重要性，排名前20位的關(guān)鍵基因見表2。

表2 左金丸治療肝癌的關(guān)鍵基因（前20位）

2.4 GO功能富集分析

GO功能富集分析共獲得符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的條目136條，對(duì)富集基因數(shù)前20位的條目進(jìn)行可視化，以條形的長度代表相應(yīng)條目所富集基因數(shù)，結(jié)果見圖4。

2.5 KEGG通路富集分析

對(duì)左金丸治療肝癌的111個(gè)基因進(jìn)行KEGG通路富集分析，值排序前10位的通路見表3，前20位通路富集氣泡圖見圖5。此外，對(duì)KEGG結(jié)果進(jìn)行預(yù)讀后發(fā)現(xiàn)，與肝癌密切相關(guān)的通路有PI3K-Akt信號(hào)通路、乙型肝炎通路、丙型肝炎通路，運(yùn)用R軟件加載Bioconductor包對(duì)PI3K-Akt信號(hào)通路、乙型肝炎通路、IL-17信號(hào)通路進(jìn)行靶點(diǎn)-通路機(jī)制分析，以紅色標(biāo)記代表左金丸可能進(jìn)行干預(yù)的潛在靶點(diǎn)，結(jié)果見圖6～圖8。

表3 左金丸治療肝癌基因KEGG通路富集（前10位）

圖4 左金丸治療肝癌基因GO功能富集條形圖（前20位）

圖5 左金丸治療肝癌基因KEGG通路富集氣泡圖（前20位）

圖6 左金丸治療肝癌乙型肝炎通路分析

圖7 左金丸治療肝癌IL-17信號(hào)通路分析

圖8 左金丸治療肝癌PI3K-Akt信號(hào)通路分析

2.6 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

通過文獻(xiàn)檢索與閱讀，在前20位的KEGG通路中篩選出可能與肝癌相關(guān)的通路，并將其與左金丸的活性成分、作用靶點(diǎn)結(jié)合，構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路多維網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見圖9。

注：黃色代表藥物，藍(lán)色代表與肝癌相關(guān)的活性成分，綠色代表潛在靶點(diǎn)，紫色代表與肝癌相關(guān)通路

2.7 肝癌基因樣本

符合條件的基因表達(dá)數(shù)據(jù)集為GSE54238，包括10個(gè)正常樣本和13個(gè)肝癌樣本，檢測平臺(tái)為GPL16955（Arraystar human lncRNA microarray V1-100309）。

2.8 差異表達(dá)基因驗(yàn)證

篩選后得到差異表達(dá)的mRNAs共2382個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)1182個(gè)，表達(dá)下調(diào)1200個(gè)，組間差異火山圖見圖10。差異基因與左金丸基因取交集后得到29個(gè)交集基因，與“2.1”項(xiàng)下交集基因?qū)Ρ?，?8個(gè)基因重疊，包括AKT1、AR、CCNA2、CCNB1、CDK2、CTSD、CYP3A4、E2F1、EGFR、FOS、HSP90AA1、KDR、NR1I2、ODC1、PON1、RXRA、STAT1、TP53。經(jīng)對(duì)比驗(yàn)證，該18個(gè)基因?yàn)樽蠼鹜?肝癌關(guān)鍵基因，亦位于前述PPI網(wǎng)絡(luò)圖中核心位置。

圖10 肝癌差異表達(dá)mRNA火山圖

3 討論

左金丸有瀉肝火、開痞結(jié)之功，其中黃連燥濕瀉火解毒，吳茱萸溫中散寒止痛，二者相配，寒熱并用，辛開苦降，使肝火得清，胃氣得降，濕邪得化。

本研究借助TCMSP平臺(tái)，篩選得到左金丸活性成分41種，藥物靶點(diǎn)基因187個(gè)；將其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)與肝癌的疾病靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比，獲得交集基因111個(gè)，篩選得到潛在化合物31種，其中部分化合物的有效性及作用機(jī)制已被證實(shí)。黃連、吳茱萸均富含檞皮素和黃連素。槲皮素是一種強(qiáng)大的自由基清除劑，能抑制人體內(nèi)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721的增殖[16]，國外研究發(fā)現(xiàn)其可調(diào)節(jié)TP53以抑制肝癌細(xì)胞增殖[17]，與本研究PPI網(wǎng)絡(luò)所得關(guān)鍵基因靶點(diǎn)結(jié)果一致。黃連素主要通過AMP-活化蛋白激酶促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡[18]，一項(xiàng)關(guān)于黃連素干預(yù)肝癌細(xì)胞的研究顯示，黃連素可通過上調(diào)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）選擇性促進(jìn)肝癌細(xì)胞自噬性死亡，并發(fā)現(xiàn)AFT6很可能是黃連素的新靶點(diǎn)[19]。黃連中OB值最高的化合物巴馬汀可通過抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子反應(yīng)以減輕小鼠肝損傷程度[20]，體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)其具有抗癌活性[21]。吳茱萸中OB值最高的吳茱萸堿可通過促進(jìn)腫瘤壞死因子（TNF-α）的生成和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期變化而發(fā)揮抗癌作用[22]，TNF是Degree≥3的重要基因靶點(diǎn)之一。吳茱萸主要活性成分吳茱萸堿、吳茱萸次堿、羥基吳茱萸堿等均屬于生物堿類化合物，具有抗腫瘤作用[23]。上述化合物多數(shù)具有較高的度值，位于左金丸治療肝癌疾病-中藥-化合物-交集靶點(diǎn)（基因）網(wǎng)絡(luò)的核心，提示這些化合物對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因可能在左金丸抗肝癌過程中起主要作用。

活性成分與交集靶點(diǎn)基因PPI網(wǎng)絡(luò)可確定核心治療靶點(diǎn)。AKT1、TP53、CDKN1A、HSP90AA1等是左金丸治療肝癌的核心靶點(diǎn)。AKT是PI3K-Akt信號(hào)通路的重要橋梁點(diǎn)[24]，而PI3K-Akt信號(hào)通路被越來越多的研究證明在肝癌的發(fā)生和發(fā)展中起關(guān)鍵作用[25-27]，也是本研究KEGG通路富集結(jié)果中計(jì)數(shù)最多的通路。有研究顯示，TP53突變在HBV感染導(dǎo)致的肝癌中有重要意義[28]，其HBV致癌通路也是本研究的KEGG通路富集結(jié)果之一。CDKN1A編碼一種蛋白依賴性的激酶抑制劑，編碼的蛋白可阻滯細(xì)胞周期于G1期，CDKN1A表達(dá)受抑癌蛋白p53的嚴(yán)格控制，有研究發(fā)現(xiàn)其可聯(lián)合端粒酶以抑制腫瘤增殖[29]。HSP90AA1居于PPI網(wǎng)絡(luò)中心區(qū)域，有研究發(fā)現(xiàn)其在中重度抑郁組肝癌患者中呈現(xiàn)高表達(dá)[30]，且與肝癌患者的腫瘤臨床分期存在一定相關(guān)性[31]。

本研究經(jīng)PPI網(wǎng)絡(luò)確定核心靶點(diǎn)后，進(jìn)行GO功能富集分析以探討其具體的功能作用，結(jié)果主要集中在細(xì)胞因子受體結(jié)合、核受體結(jié)合、調(diào)控序列特異性DNA結(jié)合等過程。此外，泛素樣蛋白連接酶結(jié)合（ubiquitin-like protein ligase binding，adj＝3.68×10-9）、血紅素結(jié)合（heme binding，adj＝4.55×10-9）等亦為重要的生物過程，參與抑制癌細(xì)胞增殖，預(yù)防肝臟癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移進(jìn)展[32-33]。

本研究通過KEGG通路富集分析追蹤左金丸治療肝癌的代謝通路，并作成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)分析整體聯(lián)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，左金丸主要作用于PI3K-Akt信號(hào)通路、乙型肝炎通路、IL-17信號(hào)通路、丙型肝炎通路。PI3K-Akt信號(hào)通路參與細(xì)胞的生長、存活、增殖、凋亡等過程，對(duì)多種癌癥具有重要的調(diào)控作用[34]，其以AKT靶點(diǎn)為樞紐，抑制PI3K-Akt信號(hào)通路中AKT表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞遷移和侵襲[35]，而AKT在左金丸治療肝癌PPI網(wǎng)絡(luò)中有重要地位。在乙型肝炎通路圖中可見左金丸對(duì)其中的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移通路（HCC invasion and metastasis）、肝癌發(fā)展通路（HCC development）等進(jìn)行調(diào)節(jié)，靶點(diǎn)基本占據(jù)通路的重要節(jié)點(diǎn)。IL-17是一種與固有性及適應(yīng)性免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞因子，IL-17升高與肝癌的發(fā)生、發(fā)展呈正相關(guān)[36]，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明IL-17可通過拮抗γ-干擾素促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長[37]。左金丸治療肝癌IL-17信號(hào)通路圖中，左金丸的作用靶點(diǎn)基本覆蓋IL-17通路各段，可見，IL-17的調(diào)節(jié)與肝癌的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，有助于驗(yàn)證相關(guān)臨床研究[37]。成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖顯示，槲皮素（MOL000098，quercetin）的化合物-藥物、化合物-靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)度最高，與潛在核心化合物挖掘結(jié)果相符，可進(jìn)一步證實(shí)其為左金丸治療肝癌的核心活性成分。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)合文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，槲皮素、黃連素、吳茱萸堿為左金丸的主要活性成分，經(jīng)基因芯片驗(yàn)證，核心靶點(diǎn)以AKT1、TP53、HSP90AA1等為主，涉及細(xì)胞因子受體結(jié)合、核受體結(jié)合、調(diào)控序列特異性DNA結(jié)合等多個(gè)生物過程，并通過調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路、乙型肝炎通路、IL-17信號(hào)通路發(fā)揮抗癌作用。本研究對(duì)闡明左金丸治療肝癌及預(yù)防其轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制具有借鑒意義，但結(jié)論仍待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)和臨床研究驗(yàn)證。

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Discussion on Mechanism ofPills in Treatment of Hepatocellular Carcinoma Based on Network Pharmacology

MO Jiahao1, XU Hongbin1, LI Jing2, LI Jinsheng3, QI Xiangjun4, ZHONG Chong5

To study the mechanism ofPills in the treatment of hepatocellular carcinoma based on network pharmacology.The compounds and targets ofPills were obtained by Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP). The compounds were screened by oral bioavailability (OB) ≥30% and drug-like (DL) ≥0.18 as thresholds, and the targets were input into Uniprot to obtain the gene Symbol. The disease target genes of hepatocellular carcinoma were obtained from GeneCards: The Human Gene Database, and intersection genes of target genes ofPills were screened. Cytoscape3.7.1 software was used to draw network diagrams of active ingredient-target and disease-TCM-compound-intersection target (gene). The protein-protein interaction relationship network was constructed by String. GO enrichment and KEGG pathway enrichment were analyzed by g:Profiler data analysis platform. Combined with the analysis resultsof major compounds, intersection genes and pathways, the component-target-pathway network diagram was drawn.Totally 41 compounds and 111 intersection genes ofPills were obtained and chemical components without intersection genes (targets) were removed, and 31 compounds were finally screened. Quercetin, berberine, evodia rutaecarpa alkali were the main active ingredients ofPills, and AKT1, TP53, HSP90AA1 were the main targets. After GO enrichment analysis, a total of 136 items meeting the screening criteria were obtained, involving multiple biological processes such as cytokines involved in receptor, nuclear receptors, regulatory sequence specific DNA binding, and 165 were obtained by KEGG enrichment analysis.Pills can control PI3K-Akt signal pathway, hepatitis B, and IL-17 signal pathway to treat hepatocellular carcinoma. The results are basically consistent through bioinformatics gene chip verification.

Pills; hepatocellular carcinoma; network pharmacology; pathway

R273.57；R285.5

A

1005-5304(2021)02-0019-09

10.19879/j.cnki.1005-5304.202001256

國家自然科學(xué)基金（81873303）；湖南省自然科學(xué)基金（2016JJ6113）；湖南省衛(wèi)生健康委科研計(jì)劃項(xiàng)目（20200949）；湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)一流學(xué)科開放基金（2018ZYX51）

李菁，E-mail：lilee2711@sina.com

（收稿日期：2020-01-16）

（修回日期：2020-02-05；編輯：陳靜）