狼毒大戟根中的萜類(lèi)成分研究△

陳虎，歷明輝，陶平德，陳黎

湖北醫(yī)藥學(xué)院 附屬太和醫(yī)院 藥學(xué)部，湖北 十堰 442000

狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.為大戟科大戟屬多年生草本植物，主產(chǎn)于我國(guó)西北、東北及內(nèi)蒙古等地，為傳統(tǒng)的外用藥物。其藥理活性主要有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗結(jié)核、降血糖、殺蟲(chóng)等[1-5]。狼毒大戟化學(xué)成分結(jié)構(gòu)豐富多樣，文獻(xiàn)對(duì)狼毒大戟中結(jié)構(gòu)新穎的化學(xué)成分研究主要集中在萜類(lèi)[1，3-7]。為了分離得到結(jié)構(gòu)新穎的萜類(lèi)化合物，在前期研究基礎(chǔ)上[8]，本研究選取了狼毒大戟的根進(jìn)行了進(jìn)一步深入研究，從80%丙酮提取物中分離鑒定了7個(gè)化合物，包括5個(gè)二萜類(lèi)化合物和2個(gè)三萜類(lèi)化合物，分別鑒定為7-羰基脫氫松香酸(7-oxodehydroabietic acid，1)、trogopteroid F(2)、陶塔二酚(totaradiol，3)、18-羥基彌羅松酚(18-hydroxy-8，11，13-abietatrien-12-ol，4)、19-羥基彌羅松酚(19-hydroxy-8，11，13-abietatrien-12-ol，5)、環(huán)木波羅-22-烯-3β，25-二醇(cycloart-22-ene-3β，25-diol，6)和羽扇豆醇(lupeol，7)。除了化合物6和7，其余化合物均為首次從狼毒大戟中分離得到。

1 材料

1.1 藥材

狼毒大戟為2016年9月采摘于湖北十堰市武當(dāng)山，由湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院葉方教授鑒定為狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.，樣本現(xiàn)保存在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院武當(dāng)藥物研究所(標(biāo)本號(hào)為20160925)。

1.2 儀器與試劑

AM-400型核磁共振波譜儀(Bruker公司)；P2000型旋光儀(JASCO公司)；HP-845型紫外可見(jiàn)光譜儀(Hewlett-Packard公司)；1100型半制備液相(Agilent公司)；氘代試劑(J&K Chemical Ltd.公司)；Cambridge Isotope Laboratories，Inc.半制備型液相色譜，色譜柱為YMC(RP-C18，250 mm×10 mm，5 μm)；正相柱色譜硅膠(100目、200～300目，青島海洋化工廠)；色譜純甲醇及分析純甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán))。

2 提取與分離

干燥的狼毒大戟根4 kg，粉碎，在室溫條件下反復(fù)用80%丙酮冷浸提取4次，真空濃縮得總浸膏140 g。將總浸膏用2 L溫水混懸，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物真空濃縮后得到乙酸乙酯部位45 g。將乙酸乙酯部位用正相硅膠柱，二氯甲烷-丙酮(1∶0→1∶1)梯度洗脫，分成6個(gè)組分A～F。B組分用ODS柱(甲醇-水，3∶7→10∶0)梯度洗脫，分為5個(gè)亞組分B1～B5。B3亞組分又經(jīng)凝膠柱、正相硅膠柱(二氯甲烷-丙酮，8∶2→1∶1)及半制備HPLC(甲醇-水，1∶9→10∶0)分離純化得到化合物6(7.2 mg)、7(4.8 mg)。C組分用RP-C18柱(甲醇-水，3∶7→9∶1)梯度洗脫，分為3個(gè)亞組分C1～C3。C2亞組分又經(jīng)正相硅膠柱及半制備HPLC(甲醇-水，4∶6)分離純化得到化合物4(10.5 mg)。C3亞組分經(jīng)半制備HPLC(甲醇-水，1∶1)分離純化得到化合物5(8.2 mg)。D組分依次用ODS柱(甲醇-水，3∶7→7∶3)、正相硅膠柱(甲醇-水，6∶4→1∶9)和半制備HPLC(甲醇-水，6∶4)分離得到化合物2(10.3 mg)。E組分反復(fù)用RP-C18色譜柱(甲醇-水，3∶7→9∶1)、正相硅膠柱及半制備HPLC(甲醇-水，65∶35)分離純化得到化合物1(7.6 mg)和3(12.1 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定形粉末，分子式為C20H26O3，ESI-MSmz：315.20[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.26(6H，d，J=6.9 Hz，H-16，17)，1.27(3H，s，H-20)，1.34(3H，s，H-19)，7.41(1H，d，J=8.2 Hz，H-11)，7.50(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-12)，7.80(1H，d，J=2.1 Hz，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：38.7(C-1)，19.8(C-2)，38.2(C-3)，47.8(C-4)，45.8(C-5)，39.2(C-6)，201.2(C-7)，131.9(C-8)，155.4(C-9)，38.9(C-10)，125.4(C-11)，134.4(C-12)，148.5(C-13)，125.8(C-14)，35.1(C-15)，24.5(C-16，17)，181.7(C-18)，17.0(C-19)，24.1(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物1為7-羰基脫氫松香酸。

化合物2：白色無(wú)定形粉末，分子式為C20H30O2，ESI-MSmz：303.23[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.02(3H，s，H-18)，1.15(3H，s，H-20)，1.17(3H，d，J=1.5 Hz，H-16)，1.19(3H，d，J=1.5 Hz，H-17)，1.34(1H，m，H-1α)，1.40(1H，dd，J=12.7，1.7 Hz，H-5)，2.32(1H，dt，J=12.8，3.8 Hz，H-1β)，2.72(2H，m，H-7)，3.18(1H，m，H-15)，3.42(1H，d，J=11.0 Hz，H-19a)，3.84(1H，d，J=11.0 Hz，H-19b)，6.35(1H，s，H-14)，6.98(1H，s，H-11)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：40.8(C-1)，20.3(C-2)，36.7(C-3)，40.1(C-4)，53.6(C-5)，20.6(C-6)，32.1(C-7)，133.8(C-8)，142.5(C-9)，38.8(C-10)，123.2(C-11)，134.1(C-12)，153.2(C-13)，115.7(C-14)，28.4(C-15)，23.4(C-16)，23.6(C-17)，27.8(C-18)，65.2(C-19)，26.7(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物2為trogopteroid F。

化合物3：白色無(wú)定形粉末，分子式為C20H30O2，ESI-MSmz：325.21[M+Na]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.87(3H，s，H-19)，1.07(3H，s，H-18)，1.16(3H，s，H-20)，1.31(3H，d，J=7.0 Hz，H-16)，1.32(3H，d，J=7.0 Hz，H-17)，1.21(1H，dd，J=12.3，1.5 Hz，H-5)，1.42(1H，dd，J=13.0，4.3 Hz，H-1α)，2.28(1H，dt，J=13.0，3.3 Hz，H-1β)，2.67(1H，ddd，J=16.8，11.3，7.4 Hz，H-7α)，2.95(1H，dd，J=16.8，5.9 Hz，H-7β)，3.23(2H，m，H-3，15)，6.52(1H，d，J=8.6 Hz，H-12)，6.91(1H，d，J=8.6 Hz，H-11)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：39.5(C-1)，29.2(C-2)，79.7(C-3)，40.1(C-4)，51.2(C-5)，20.7(C-6)，30.5(C-7)，134.3(C-8)，142.5(C-9)，38.6(C-10)，124.1(C-11)，115.5(C-12)，155.3(C-13)，132.3(C-14)，30.0(C-15)，20.7(C-16)，20.7(C-17)，28.9(C-18)，16.3(C-19)，25.9(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物3為陶塔二酚。

化合物4：無(wú)色針晶(甲醇)，分子式為C20H28O2，ESI-MSmz：301.22[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.86(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-20)，1.21(3H，d，J=7.2 Hz，H-16)，1.23(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，1.37(1H，m，H-1α)，1.38(2H，m，H-3)，1.62(1H，dd，J=11.9，1.8 Hz，H-5)，1.62～1.82(4H，m，H-2，6)，2.17(1H，dt，J=12.7，3.4 Hz，H-1β)，2.81(2H，m，H-7)，3.10(1H，m，H-15)，3.20(1H，d，J=10.9 Hz，H-18a)，3.45(1H，d，J=10.9 Hz，H-18b)，6.62(1H，s，H-11)，6.80(1H，s，H-14)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：38.6(C-1)，18.8(C-2)，35.2(C-3)，37.4(C-4)，44.2(C-5)，19.3(C-6)，29.7(C-7)，127.4(C-8)，148.7(C-9)，38.2(C-10)，111.3(C-11)，150.7(C-12)，131.8(C-13)，126.7(C-14)，27.1(C-15)，22.7(C-16)，23.1(C-17)，72.5(C-18)，17.6(C-19)，25.5(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定為化合物4為18-羥基彌羅松酚。

化合物5：白色無(wú)定形粉末，分子式為C20H28O2，ESI-MSmz：301.22[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.01(3H，s，H-18)，1.14(3H，s，H-20)，1.15(3H，d，J=7.2 Hz，H-16)，1.16(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，1.36(1H，m，H-1α)，1.40(1H，dd，J=12.7，1.7 Hz，H-5)，2.23(1H，dt，J=12.3，3.4 Hz，H-1β)，2.70(1H，ddd，J=16.4，11.6，6.9 Hz，H-7α)，2.80(1H，ddd，J=16.4，5.8，1.0 Hz，H-7β)，3.17(1H，m，H-15)，3.43(1H，d，J=11.1 Hz，H-19a)，3.84(1H，d，J=11.1 Hz，H-19b)，6.65(1H，s，H-11)，6.74(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：40.4(C-1)，20.4(C-2)，36.3(C-3)，40.5(C-4)，53.3(C-5)，20.8(C-6)，31.8(C-7)，126.9(C-8)，149.3(C-9)，38.9(C-10)，112.0(C-11)，153.4(C-12)，133.7(C-13)，127.3(C-14)，28.0(C-15)，23.5(C-16)，23.4(C-17)，27.8(C-18)，65.2(C-19)，26.6(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物5為19-羥基彌羅松酚。

化合物6：無(wú)色針晶(甲醇)，分子式為C30H50O2，ESI-MSmz：443.39[M+H]+；1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.59(1H，m，H-22)，5.58(1H，m，H-23)，3.31(1H，m，H-3)，1.25(3H，s，H-27)，1.23(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-30)，0.95(3H，s，H-18)，0.92(3H，s，H-29)，0.90(3H，s，H-28)，0.81(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，0.55(1H，d，J=5.0 Hz，H-19a)，0.35(1H，d，J=5.0 Hz，H-19b)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：26.5(C-1)，30.5(C-2)，79.3(C-3)，40.5(C-4)，47.3(C-5)，21.1(C-6)，28.1(C-7)，47.9(C-8)，20.2(C-9)，26.1(C-10)，26.0(C-11)，35.6(C-12)，45.3(C-13)，48.8(C-14)，32.7(C-15)，32.1(C-16)，52.0(C-17)，18.1(C-18)，29.8(C-19)，36.4(C-20)，18.3(C-21)，125.6(C-22)，139.4(C-23)，39.0(C-24)，70.8(C-25)，30.1(C-26)，30.0(C-27)，19.4(C-28)，14.1(C-29)，25.4(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故鑒定化合物6為環(huán)木波羅-22-烯-3β，25-二醇。

化合物7：白色粉末，分子式為C30H50O，ESI-MSm/z：427.39[M+H]+；1H-NMR(CDCI3，400 MHz)δ：0.77(3H，s，H-24)，0.80(3H，s，H-28)，0.85(3H，s，H-25)，0.93(3H，s，H-27)，0.95(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-30)，3.20(1H，dd，J=11.4，4.8 Hz，H-3)，4.58(1H，m，Ha-29)，4.70(1H，m，Hb-29)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：38.8(C-1)，27.5(C-2)，79.1(C-3)，39.0(C-4)，55.4(C-5)，18.4(C-6)，34.2(C-7)，40.8(C-8)，50.4(C-9)，37.3(C-10)，21.0(C-11)，25.0(C-12)，38.0(C-13)，42.7(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，43.1(C-17)，48.4(C-18)，48.0(C-19)，151.1(C-20)，29.8(C-21)，40.1(C-22)，28.0(C-23)，15.3(C-24)，16.2(C-25)，16.0(C-26)，14.5(C-27)，18.1(C-28)，109.5(C-29)，19.3(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物7為羽扇豆醇。

4 結(jié)論

狼毒大戟中化合物的結(jié)構(gòu)類(lèi)型豐富多樣，文獻(xiàn)對(duì)其中萜類(lèi)化合物的報(bào)道相對(duì)較多，為該植物的研究熱點(diǎn)。但新結(jié)構(gòu)類(lèi)型的萜類(lèi)主要集中在其地上部位，根部的研究相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)從狼毒大戟根80%丙酮提取物中分離鑒定了7個(gè)萜類(lèi)化合物，包括5個(gè)二萜類(lèi)化合物和2個(gè)三萜類(lèi)化合物，除了化合物6和7，其余化合物均為首次從狼毒大戟的根中分離得到。本實(shí)驗(yàn)為狼毒大戟化學(xué)成分的研究及開(kāi)發(fā)利用提供了參考。