宋曉婉， 梁 璐

［1漢氏聯(lián)合（天津）干細(xì)胞研究院有限公司，天津301700；2天津百恩生物科技有限公司，天津300318］

間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最廣泛的干細(xì)胞［1］。MSC 具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、損傷修復(fù)、促血管新生及抗纖維化等生物學(xué)特性。目前MSC在肺損傷疾病中的治療研究越來(lái)越多，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明MSC 能夠明顯降低肺部炎癥反應(yīng)，減少肺組織損傷［2］。越來(lái)越多的研究表明MSC 發(fā)揮治療作用的主要機(jī)制是旁分泌作用，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體（mesenchymal stem cell-derived exosomes，MSC-EXOs）作為其主要的旁分泌組分，是其發(fā)揮生物學(xué)功效的關(guān)鍵。本文就MSC-EXOs的生物學(xué)特性及其對(duì)急性肺損傷（acute lung injury，ALI）和其他肺損傷疾病的治療作用和潛在機(jī)制做一綜述。

1 MSC-EXOs的生物學(xué)特性

外泌體是一種胞外脂質(zhì)雙層膜囊泡，直徑為40～100 nm，密度為 1.10～1.18 g/mL，表達(dá)特異膜蛋白CD9、CD63 和 CD81［3］，電鏡下觀察呈典型杯狀形態(tài)。外泌體廣泛存在于各種體液中，如血液、尿液、唾液、腦脊液、乳汁和汗液中，是介導(dǎo)旁分泌效應(yīng)的重要信使［4］。外泌體主要通過(guò)3種方式作用于靶細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)胞間通訊進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)：（1）直接與靶細(xì)胞膜融合，將內(nèi)容物蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA 和siRNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中；（2）通過(guò)胞吞作用被靶細(xì)胞攝取；（3）外泌體辨別并結(jié)合靶細(xì)胞表面上的特異性受體。此外，不同細(xì)胞來(lái)源的外泌體參與不同的生理病理過(guò)程，如處理廢棄蛋白質(zhì)、呈遞抗原、交換遺傳信息、免疫應(yīng)答、組織修復(fù)再生以及代謝，參與血管生成、炎癥、腫瘤轉(zhuǎn)移等。這些功能的發(fā)揮取決于外泌體中的活性組分，尤其是RNA 和蛋白質(zhì)?，F(xiàn)有手段很難獲得純的外泌體成分，多是以外泌體為主的胞外微囊泡。胞外囊泡根據(jù)尺寸大小可分為凋亡小體、微泡和外泌體。除凋亡小體直徑大于1 μm 外，微泡和外泌體都屬于納米級(jí)別，但兩者產(chǎn)生的途徑不同。微泡是由質(zhì)膜脫落產(chǎn)生的，而外泌體的產(chǎn)生則是通過(guò)胞內(nèi)體途徑，即早期內(nèi)體膜凹陷形成具有許多腔內(nèi)囊泡的多泡體，多泡體與質(zhì)膜融合釋放出外泌體，因此外泌體也是從內(nèi)體分泌的唯一一類細(xì)胞外囊泡［5］。

目前，MSC-EXOs 已成研究熱點(diǎn)，MSC-EXOs 攜帶豐富的親本細(xì)胞來(lái)源的蛋白質(zhì)、RNA 等生物活性物質(zhì)，發(fā)揮類似于MSC 的生物學(xué)功能，其運(yùn)輸、保存的條件與蛋白質(zhì)類似，相比MSC 更具成藥優(yōu)勢(shì)。研究表明MSC-EXOs 具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗纖維化、抑制氧化應(yīng)激、增強(qiáng)血管生成等作用。MSC-EXOs富含糖酵解相關(guān)酶，可增加ATP 的產(chǎn)生，減少組織細(xì)胞死亡［6］；MSC-EXOs 含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-10 和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）等細(xì)胞因子，有利于血管生成和免疫調(diào)節(jié)［7］；此外，外泌體中的miRNA 可調(diào)控基因表達(dá)，參與多種生理病理過(guò)程，如外泌體釋放的miR-125b-5p能夠促進(jìn)心肌梗死區(qū)的功能恢復(fù)［8］。

2 MSC-EXOs對(duì)ALI的治療作用及其潛在機(jī)制

ALI 是指肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭肺損傷。根據(jù)發(fā)病原因分為：（1）直接肺損傷因素：嚴(yán)重肺部感染，胃內(nèi)容物吸入，肺挫傷，吸入有毒氣體，淹溺、氧中毒等；（2）間接肺損傷因素：嚴(yán)重感染，嚴(yán)重的非胸部創(chuàng)傷，急性重癥胰腺炎，大量輸血，體外循環(huán)，彌漫性血管內(nèi)凝血等［9］。ALI 發(fā)展至嚴(yán)重階段（氧合指數(shù)＜200）被稱為急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）。ARDS 致死率高且無(wú)特效藥，幸存活下來(lái)也多伴有后遺癥，影響長(zhǎng)期生活質(zhì)量。大量臨床前研究表明MSC-EXO對(duì)ALI引起的肺泡上皮及內(nèi)皮細(xì)胞損傷、肺泡液清除率下降、肺纖維化等具有治療作用。以下就MSC-EXOs 對(duì)ALI 的可能作用機(jī)制進(jìn)行了歸納和總結(jié)。

2.1 免疫調(diào)節(jié)/抗炎特性 炎癥失調(diào)是ALI/ARDS的一個(gè)關(guān)鍵病理學(xué)特征。MSC 對(duì)固有免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)均具有免疫調(diào)節(jié)作用，在ALI 動(dòng)物模型的治療中發(fā)揮抗炎作用［10-12］。

在不同的ALI 動(dòng)物模型中，MSC-EXOs 均能降低炎癥因子表達(dá)水平并改善肺功能［13-16］。MSC-EXOs能抑制B 細(xì)胞增殖分化，并呈劑量依賴關(guān)系［17］。MSC-EXOs 能誘導(dǎo) Th 細(xì)胞向 Th2 細(xì)胞而不是 Th1 細(xì)胞轉(zhuǎn)化，能抑制T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，增加調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平［18］。Del Fattore 等［19］和 Frvaro 等［20］證明，MSC-EXOs 能增加調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞和效應(yīng)性T 細(xì)胞比例，抑制T 細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子如干擾素γ（interferon-γ，IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及 IL-1β，促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子如 TGF-β、IL-10及前列腺素E（2prostaglandin E2，PGE2）表達(dá)。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，MSC-EXOs 能將促炎M1 型巨噬細(xì)胞極化為抗炎M2 型巨噬細(xì)胞。Ti 等［21］的研究表明，經(jīng)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）預(yù)處理的MSC 釋放的外泌體能促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化，進(jìn)一步研究結(jié)果顯示此效應(yīng)機(jī)制是由外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)microRNA let-7b 激活 TLR4/NF-κB/STAT3/AKT 調(diào)節(jié)的信號(hào)通路所介導(dǎo)的。在LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠模型中，MSC 可通過(guò)外泌體介導(dǎo)線粒體轉(zhuǎn)移，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向抗炎表型轉(zhuǎn)化，從而有效緩解肺損傷［22］。在小鼠缺血再灌注肺損傷模型中，MSC-EXOs 能顯著降低M1 型巨噬細(xì)胞相關(guān)因子 IL-8、IL-1β、IL-6 和 TNF-α的表達(dá)，增加M2 型巨噬細(xì)胞免疫抑制細(xì)胞因子IL-10 和 TGF-β 的表達(dá)［23］。近來(lái) Huang 等［24］研究表明，與年輕MSC-EXOs相比，衰老MSC-EXOs不能成功誘導(dǎo)炎癥肺組織中M2型巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生，提示外泌體的功能與其親本細(xì)胞的功能狀態(tài)直接相關(guān)。

2.2 對(duì)肺泡上皮和內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用 MSCEXOs能抑制肺泡上皮的凋亡，起到保護(hù)作用。MSCEXOs 能夠增加內(nèi)毒素?fù)p傷性的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞（alveolar epithelial cells，AECs）內(nèi)ATP 的水平，提高AECs 存活率［25］。Yi 等［26］將 LPS 處理的Ⅱ型 AECs 與過(guò)表達(dá)miR-30b-3p 的MSC-EXOs 共培養(yǎng)，結(jié)果顯示MSC-EXOs 有效抑制AECs 凋亡，促進(jìn)其增殖。除了保護(hù)效應(yīng)外，MSC-EXOs可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥肺組織中蛋白酶/抗蛋白酶平衡來(lái)保護(hù)肺上皮細(xì)胞。Harrell等［27］的研究表明，α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin，AAT）聚集吸附于 MSC-EXOs 表面（AAT 的天然載體），促進(jìn)外泌體的穩(wěn)定及體內(nèi)活性。AAT 是中性粒細(xì)胞源蛋白水解酶的一個(gè)潛在抑制劑，能保護(hù)肺上皮細(xì)胞并發(fā)揮抗炎免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。經(jīng)IL-1β 預(yù)處理的MSC-EXOs，其AAT 基因表達(dá)更高，且與非IL-1β預(yù)處理的MSC-EXOs 相比具有更高的抗彈性蛋白酶活性。

MSC-EXOs 對(duì)肺血管內(nèi)皮也具有保護(hù)作用。Li等［23］證明，MSC-EXOs對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的肺內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用，該作用依賴于外泌體中miR-21-5p 的抗凋亡特性。氣管內(nèi)給予MSC-EXOs 能抑制肺內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)源和外源凋亡途徑，用miR-21-5p拮抗劑對(duì)MSC 進(jìn)行預(yù)處理則完全消除了MSC-EXOs 介導(dǎo)的caspase-3、-8 和-9 抑制效應(yīng)，降低了保護(hù)作用。人第10 號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）和程序性細(xì)胞死亡蛋白4（programmed cell death protein 4，PDCD4）是 miR-21-5p的主要靶點(diǎn)，經(jīng)miR-21-5p 拮抗劑處理的MSC-EXOs治療缺血再灌注損傷小鼠時(shí)，其PTEN 和PDCD4 的表達(dá)沒(méi)有減少，肺內(nèi)皮細(xì)胞持續(xù)凋亡，表明miR-21-5p 抑制PTEN 和PDCD4 表達(dá)進(jìn)而保護(hù)肺內(nèi)皮細(xì)胞是外泌體治療缺血再灌注肺損傷小鼠的作用機(jī)制。

2.3 改善肺泡液清除率 體內(nèi)外研究證明注射MSC 能恢復(fù)LPS 誘導(dǎo)的ALI 及嚴(yán)重性細(xì)菌性肺炎導(dǎo)致的肺泡液清除率下降，部分機(jī)制是MSC 通過(guò)分泌角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子（keratinocyte growth factor，KGF）和血管生成素 1（angiopoietin-1，Ang-1），恢復(fù)Ⅱ型AECs 中關(guān)鍵的鈉離子通道ENaCα，并防止肺上皮肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維形成［28-29］。Li 等［30］也證明 MSC 通過(guò)分泌 KGF 上調(diào) Na+-K+-ATP 酶 α1 亞基的表達(dá)，進(jìn)而恢復(fù)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞肺泡液的轉(zhuǎn)運(yùn)功能。

MSC-EXOs 改善肺泡液清除率的機(jī)制與MSC 相似。MSC-EXOs 通過(guò)將KGF mRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞，恢復(fù)其肺泡液清除率，進(jìn)而對(duì)大腸桿菌感染性肺炎小鼠模型和大腸桿菌感染性損傷的人肺組織的肺泡上皮細(xì)胞起到了保護(hù)作用［25，31］。MSC-EXOs 通過(guò)將Ang-1 mRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞，阻止肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維的形成，進(jìn)而恢復(fù)損傷的人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白通透性［32］。

2.4 抗菌活性 研究表明MSC能分泌抗菌因子，如脂蛋白2 或IL-37，直接參與抗菌；或者通過(guò)調(diào)節(jié)單核/巨噬細(xì)胞來(lái)增加對(duì)細(xì)菌的吞噬作用，進(jìn)而間接參與抗菌。此外，MSC 還可以抑制中性粒細(xì)胞的凋亡，延長(zhǎng)白細(xì)胞存活，增加抗菌活性，減少免疫細(xì)胞向受損肺泡轉(zhuǎn)運(yùn)［33-34］。

MSC-EXOs 可以通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)線粒體至損傷肺泡單核/巨噬細(xì)胞，增加其氧化磷酸化，從而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬作用增強(qiáng)［22］。MSC-EXOs 還可通過(guò)促進(jìn)白三烯B4（leukotriene B4，LTB4）的合成增加肺部浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的吞噬作用和抗菌活性［35］。MSC-EXOs 中的miR-145 能降低肺泡巨噬細(xì)胞中多藥抗性相關(guān)蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1，MRP1）的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致肺泡巨噬細(xì)胞LTB4釋放增加，提高了抗菌活性和細(xì)菌清除率，減輕了小鼠細(xì)菌性肺炎的嚴(yán)重程度［35］。有趣的是，用TLR3 激動(dòng)劑或 IFN-γ 預(yù)處理 MSC 能增強(qiáng) MSC-EXOs的抗菌效應(yīng)［25，36］。

MSC-EXOs 也有助于病毒清除。Qian 等［37］的研究表明，臍帶來(lái)源的MSC-EXOs 能將miRNA（包括let-7f、miR-145、miR-199a 及 miR-221）轉(zhuǎn)運(yùn)至宿主細(xì)胞，進(jìn)而抑制丙型肝炎病毒（hepatitis virus C，HCV）復(fù)制，且與干擾素α 或者特拉普韋聯(lián)合用藥時(shí)能增強(qiáng)其抗HCV能力。

2.5 對(duì)肺纖維化的抑制作用 肺纖維化是肺部嚴(yán)重纖維增生失調(diào)，其特征是成纖維細(xì)胞增殖及大量細(xì)胞外基質(zhì)聚集并伴炎癥損傷、組織結(jié)構(gòu)破壞［38］。在特發(fā)性肺纖維化小鼠模型中，MSC-EXOs可減少膠原沉積和炎癥反應(yīng)，進(jìn)而改善肺纖維化［39］。單純靜脈注射人骨髓來(lái)源MSC-EXOs 顯著地緩解了博來(lái)霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化，MSC-EXOs 治療后，肺組織中Ashcroft 評(píng)分得到改善，膠原沉積減少；其主要作用機(jī)制是通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型和功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的［40］。MSC-EXOs 顯著減少了表達(dá) TGF-β1、精氨酸酶1（arginase-1，ARG-1）和 CD206 的肺泡巨噬細(xì)胞的數(shù)目，提示巨噬細(xì)胞可能是外泌體的主要細(xì)胞靶標(biāo)。給予成纖維細(xì)胞來(lái)源的外泌體治療時(shí)無(wú)抗纖維化療效，表明外泌體的療效與其親本細(xì)胞性質(zhì)有關(guān)。

用MSC來(lái)預(yù)防二氧化硅誘導(dǎo)肺炎小鼠的肺部炎癥和纖維化時(shí)，Phinney 等［41］研究表明 MSC-EXOs 含有大量的miR-451（一種TNF及巨噬細(xì)胞遷移抑制因子），miR-451 可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞Toll 樣受體信號(hào)及相關(guān)細(xì)胞因子分泌。MSC-EXOs 可能通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)miR-451增加其在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)來(lái)抑制TNF的分泌，以此應(yīng)答二氧化硅的刺激。

3 MSC-EXOs對(duì)其他肺損傷疾病的治療作用

動(dòng)脈型肺動(dòng)脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一種進(jìn)行性疾病，其特征是肺動(dòng)脈重塑、肺浸潤(rùn)增加、血管腔橫截面積減少及肺血管阻力增加。前期誘因?qū)е碌拿庖呤д{(diào)、促炎性巨噬細(xì)胞活化和炎癥介質(zhì)升高對(duì)于PAH 的后期發(fā)展至關(guān)重要。研究表明，MSC-EXOs能夠介導(dǎo)促炎性與抗炎性巨噬細(xì)胞之間的平衡，維持了免疫穩(wěn)態(tài)，緩解了PAH的惡性發(fā)展［42］。除了免疫調(diào)節(jié)作用，MSC-EXOs對(duì)線粒體功能也具有保護(hù)作用，進(jìn)而能夠緩解PAH。MSC-EXOs 通過(guò)抑制人組蛋白脫乙酰酶sirtuin-4 的表達(dá)，增加了肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中丙酮酸脫氫酶和谷氨酸脫氫酶的表達(dá)，恢復(fù)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的能量平衡，提高耗氧量，從而改善了疾病相關(guān)的線粒體功能［43］。

在高氧誘導(dǎo)的支氣管肺發(fā)育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）大鼠模型實(shí)驗(yàn)研究中，通過(guò)氣管內(nèi)給予MSC 或MSC-EXOs 來(lái)對(duì)比兩者效果，結(jié)果表明兩者對(duì)BPD 都有緩解作用，且MSC-EXOs 改善肺泡化及肺血管化參數(shù)的效果更好，表明MSCEXOs 是一種有效的治療 BPD 的方法［44］。在新生兒高氧性BPD 模型中，MSC-EXOs 治療改善了肺泡化、纖維化和肺血管重塑的情況，進(jìn)而增強(qiáng)了肺功能。MSC-EXOs能顯著激活骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞，降低了TNF-α、IL-6等巨噬細(xì)胞M1表型標(biāo)志物的表達(dá)水平，提高了Arg1、CD206 等M2 表型標(biāo)志物的表達(dá)。這表明MSC-EXOs 通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫表型，抑制促炎性 M1 表型，增強(qiáng)抗炎 M2 表型從而改善 BPD［45］。在另一項(xiàng)高氧誘導(dǎo)的BPD 小鼠模型研究中，腹腔注射MSC-EXOs 可以減輕肺部炎癥，改善肺泡-毛細(xì)血管滲透性，抑制肺組織形態(tài)學(xué)改變。研究者認(rèn)為MSC-EXOs 中的腫瘤壞死因子刺激基因6（tumor necrosis factor-stimulated gene-6，TSG-6）對(duì)BPD 治療至關(guān)重要。TSG-6沉默的MSC 分泌的MSC-EXOs 不具有治療BPD的效果，證明MSC-EXOs中的TSG-6是治療BPD的關(guān)鍵蛋白［46］。

MSC-EXOs 對(duì)過(guò)敏性氣道炎癥具有修復(fù)作用。在曲霉菌絲提取物誘導(dǎo)的ALI 模型中，MSC-EXOs 減緩了氣道高反應(yīng)性，肺部炎癥，抑制了支氣管肺泡灌洗液中可溶性Th2/Th17 相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)，這表明MSC-EXOs 通過(guò)將Th2/Th17 炎癥反應(yīng)轉(zhuǎn)化為反調(diào)節(jié)性Th1 反應(yīng)，減輕炎癥，緩解了Th2/Th17 介導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性［47］。

4 結(jié)論與展望

綜上所述，大量臨床前研究已證明MSC-EXOs對(duì)各種肺損傷病理進(jìn)程均具有一定治療緩解作用，其作用機(jī)制主要是通過(guò)將生物活性成分，如蛋白因子、miRNA、mRNA 等轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞中發(fā)揮其類似于親本細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)，損傷修復(fù)等治療作用。這為MSC-EXOs 作為一種無(wú)細(xì)胞療法治療肺損傷提供了理論依據(jù)。目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的MSC-EXOs 的組織來(lái)源基本都是小鼠或者大鼠的骨髓［13，41］；人源的MSC-EXOs 的組織來(lái)源主要是骨髓［25，31-32，47］，也有研究者使用的是臍帶［16］或脂肪［24］來(lái)源的。而 MSCEXOs 的培養(yǎng)方法沒(méi)有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，或使用無(wú)血清培養(yǎng)基［15，26，47］，或使用化學(xué)限定培養(yǎng)基［6］，或使用去外泌體血清培養(yǎng)基［24］；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)也各異，過(guò)夜、24 h、48 h或72 h 的報(bào)道均有。MSC-EXOs 對(duì)保存條件要求不高，重懸于PBS 中置于-80 ℃保存是常見(jiàn)的保存方式［15，24，26］。

MSC-EXOs 與 MSC 相比更具治療優(yōu)勢(shì)：（1）降低了干細(xì)胞治療的致瘤風(fēng)險(xiǎn)；（2）可在無(wú)二甲亞砜的情況下凍存于-80 ℃而不失活；（3）體積小，易于在血液系統(tǒng)中循環(huán)，不易造成微血管阻塞。雖然MSC-EXOs在治療應(yīng)用方面很有潛力，但是大都還只停留在臨床前階段，還需要更多的臨床數(shù)據(jù)來(lái)驗(yàn)證其療效。截至到2020 年8 月3 日在clinicaltrial 網(wǎng)站上注冊(cè)的關(guān)于MSC-EXOs的臨床試驗(yàn)有9例，用于治療急性缺血性中風(fēng)、難治性黃斑裂孔、移植物抗宿主病干眼癥及阿茲海默癥等。在MSC-EXOs 向臨床轉(zhuǎn)化的過(guò)程中仍有許多難題亟需解決：（1）亟需建立外泌體質(zhì)量體系標(biāo)準(zhǔn)：不同來(lái)源，不同培養(yǎng)條件，不同預(yù)處理以及細(xì)胞老化等問(wèn)題都會(huì)影響到外泌體的質(zhì)量和效力；（2）亟需規(guī)?；苽涔に嚭图兓夹g(shù)：如何通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)獲得足量的原液，和規(guī)?；姆蛛x提純方法獲得高純度的MSC-EXOs 來(lái)滿足臨床需求，是目前MSC-EXOs 生產(chǎn)制備中亟需解決的問(wèn)題；（3）亟需最適的臨床應(yīng)用方式：目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的給藥方式主要是局部氣管內(nèi)給藥［44］和靜脈給藥［47］，兩種治療方式均有效［25］。治療的效果和MSC-EXOs 的給藥濃度呈正相關(guān)，但如何確定最佳給藥劑量、濃度及給藥途徑還需要更深入的研究。隨著研究的深入和全面，MSC-EXOs作為一種基于干細(xì)胞的無(wú)細(xì)胞治療方法未來(lái)將有可能成為替代干細(xì)胞治療的有效手段，將獲得更長(zhǎng)足的發(fā)展。