密蒙花膠囊對(duì)慢性阻塞性肺疾病模型大鼠氣道重塑的影響

金韜 胡田魁 張建宏

摘要：目的 觀察密蒙花膠囊對(duì)慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠氣道重塑的影響。方法 用煙熏和大鼠氣管內(nèi)注入脂多糖（LPS）的方法建立COPD模型，將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、密蒙花膠囊高、中、低劑量組，共5組。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予0.9%生理鹽水灌胃，各給藥組給予與0.9%生理鹽水同體積的密蒙花膠囊灌胃，4周后進(jìn)行支氣管形態(tài)學(xué)觀察、肺功能測(cè)量。結(jié)果 模型對(duì)照組大鼠支氣管、肺組織改變符合COPD病理表現(xiàn)，與模型組比較，密蒙花膠囊高、中劑量組小支氣管壁及平滑肌層厚度顯著降低，F(xiàn)EV0.3/FVC顯著升高（P<0.01），Re 、Ri顯著降低（P<0.01）。結(jié)論 密蒙花膠囊能夠減緩COPD大鼠氣道重構(gòu)，延緩或阻止COPD疾病的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：慢性阻塞性肺病;密蒙花膠囊;氣道炎癥;氣道重塑

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2021）03-0079-03

慢性阻塞性肺疾?。–hronic obsturctive pulmonary Disease，COPD.簡(jiǎn)稱慢阻肺）是一種以不完全可逆性氣流受阻為特征的漸進(jìn)性疾病，氣流受阻呈進(jìn)行式發(fā)展，多與肺部對(duì)有害顆粒與氣體的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)[1]。慢阻肺是一種嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病，患病人數(shù)多，病死率高，由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)力和生活質(zhì)量。2018年中國(guó)成人肺部健康研究（CPHS）調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)慢阻肺患者人數(shù)9990萬，已成為與高血壓、糖尿病“等量齊觀”的慢性疾病，構(gòu)成我國(guó)重大疾病負(fù)擔(dān)[2]。

目前，治療慢阻肺以排痰，保持氣道通暢為主要治療手段，臨床上以排痰劑（黏液溶解劑）、支氣管舒張劑、糖皮質(zhì)激素等藥物治療及吸氧、機(jī)械通氣等療法為主，雖然在一定程度上延遲疾病的發(fā)展，但不能從根本上改變患者的預(yù)后。由于COPD是多因素導(dǎo)致的復(fù)合疾病，現(xiàn)有單一活性成分的西藥都無法逆轉(zhuǎn)COPD的進(jìn)程，療效不能讓人滿意。因此，從中國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥中開發(fā)，探尋治療COPD的藥物具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

在進(jìn)行民族民間醫(yī)藥調(diào)研中，我們發(fā)現(xiàn)中藥密蒙花（Buddleja officinlis Maxim）對(duì)COPO患者具有較好的治療作用，經(jīng)對(duì)患者疾病診斷，用藥情況進(jìn)行核實(shí)，確認(rèn)密蒙花在改善COPD患者癥狀方面具有顯著的療效，且無密蒙花在慢阻肺疾病治療的文獻(xiàn)報(bào)到。因此立項(xiàng)開展密蒙花治療COPD的藥理實(shí)驗(yàn)，以評(píng)價(jià)該藥治療COPD的療效和治療前景。

1 材料與方法

1.1 試劑與藥物 密蒙花膠囊 本公司自制。香煙：市售紅河牌香煙，焦油量13mg，氣煙堿量1.3mg。脂多糖（LPS）：上海源葉生物有限公司。戊巴比妥鈉：北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器 試驗(yàn)動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)：北京貝蘭博科技有限公司;光學(xué)顯微鏡：上海光學(xué)儀器一廠;輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)：深圳市匯沃科技有限公司。

1.3 分組及方法 健康SD大鼠50只，雄性，體重（200±23）g，購自昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將大鼠隨機(jī)分為組5組，即正常對(duì)照組、模型組及密蒙花膠囊高、中、低計(jì)量組，每組各10只。參照文獻(xiàn)[3]煙熏加LPS造模，于模型復(fù)制的第1、14 d，除正常對(duì)照組外，其余各組用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，打開其頸部，暴露氣管，用1 mL注射器向氣管內(nèi)注入脂多糖（LPS）各0.2mL，（200μg/200mL），在皮膚傷口處滴入青霉素注射液，然后縫合皮膚并用碘酒棉球消毒。第2～13 d，15～28 d每日上午在75L密閉箱內(nèi)熏紅河牌香煙0.5h。給藥，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組灌服0.9%生理鹽水10mL/kg，1次/d;密蒙花膠囊高劑量組灌服密蒙花膠囊（相當(dāng)于臨床成人劑量的10倍）：22.8 g/kg，2.28 g/mL;密蒙花膠囊中劑量組灌服密蒙花膠囊（相當(dāng)于臨床成人劑量的5倍）：11.4 g/kg，1.14 g/mL;密蒙花膠囊低劑量組灌服密蒙花膠囊（相當(dāng)于臨床成人劑量的2.5倍）：5.7 g/kg，0.57 g/mL。5組均連續(xù)灌胃28 d，灌胃結(jié)束第2 d，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量 大鼠處死后，取左肺上葉位置于10%中性福爾馬林溶液中固定。酒精梯度脫水，二甲苯透明標(biāo)本，浸蠟，包埋，切片，HE染色，用圖像分析系統(tǒng)測(cè)量小支氣管管徑、管壁及平滑肌層厚度。

1.4.2 肺功能測(cè)定 以戊巴比妥鈉麻醉大鼠，氣管插管，放入箱內(nèi)，記錄大鼠8個(gè)自主呼吸周期，獲得氣道壓力（P）、容積（V）變化，相應(yīng)計(jì)算得到肺呼氣阻力（Re）、肺吸氣阻力（Ri）。之后，經(jīng)三通管快速向大鼠氣道內(nèi)注入6mL空氣造成大鼠被動(dòng)深呼吸，即可測(cè)定用力肺活量（FVC）、第0.3用力呼氣量（FEV0.3，相應(yīng)于人的FEV1），得出其比值FEV0.3/FVC。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以x2±s表示，多組間比較用方差分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量 隨機(jī)選取支氣管HE切片中較規(guī)整的小支氣管，每個(gè)標(biāo)本選3～6個(gè)支氣管橫切面積，采用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算：管壁總面積（WAt）=氣道外壁所圍面積（Ao）-管壁內(nèi)側(cè)的面積（Ai）;平滑肌層面積（WAsm）=平滑肌層外側(cè)面積（Asmo）-平滑肌層內(nèi)側(cè)面積（Asmi）。以管壁內(nèi)周長(zhǎng)（Pi）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果以單位長(zhǎng)度的管壁面積（WAt/Pi）表示管壁厚度，以單位長(zhǎng)度的平滑肌層面積（WAsm/Pi）表示平滑肌層厚度。結(jié)果模型組大鼠小支氣管壁和平滑肌層較對(duì)照組明顯增厚（P<0.01），并伴有肺氣腫的發(fā)生，說明COPD大鼠存在小氣道組織結(jié)構(gòu)的改變。經(jīng)治療后，密蒙花膠囊高、中劑量組大鼠小支氣管壁及平滑肌層厚度較模型組顯著降低（P<0.01）。支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果見表1。

2.2 肺功能測(cè)量 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠FEV0.3/FVC顯著降低（P<0.01），Re、Ri顯著升高（P<0.01），提示模型大鼠有氣流阻塞。與模型組比較，密蒙花膠囊高、中劑量組大鼠FEV0.3/FVC顯著升高（P<0.01），Re 、Ri顯著降低（P<0.01）。大鼠肺功能測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

本研究以香煙煙熏加氣管注入脂多糖（LPS）建立COPD模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：氣道重塑主要的病理形態(tài)學(xué)改變是以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)沉積[3]，本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠小支氣管壁和平滑肌層較空白對(duì)照組明顯增厚（P<0.01），并伴有肺氣腫的發(fā)生，說明COPD大鼠存在小氣道組織結(jié)構(gòu)的改變。治療組中，密蒙花膠囊高、中劑量組大鼠小支氣管壁及平滑肌層厚度較模型組顯著降低，提示其具有明顯的抑制膠原合成減少氣道周圍膠原沉積，干預(yù)COPD大鼠氣道重塑的作用。

密蒙花為馬錢科植物，又名小錦花、黃飯花、雞骨頭花、染飯花等[5]，主要分布于我國(guó)西南及中南地區(qū)，資源十分豐富。該藥始載于《開寶本草》，為中國(guó)藥典收載品種，主要用于目赤腫痛，多淚羞明，眼生翳膜，肝虛目暗，視物昏花等癥[6]，是傳統(tǒng)中藥材中重要的眼科用藥?，F(xiàn)代研究表明，密蒙花主要化學(xué)成分為刺槐苷、密蒙花苷、密蒙花萜苷A、B梓苷等類化合物[7]，具有抗炎、抗氧化、抑制醛糖還原酶及乙酰膽堿酯酶等作用及潛在預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥的效果[8]。通過本研究證實(shí)，密蒙花對(duì)COPD具有潛在治療作用。鑒于COPD的形成是由多因素參與的、復(fù)雜的慢性病理改變過程，任何針對(duì)單一因素的治療不會(huì)有力地改變COPD病理進(jìn)程，而中藥具有多靶點(diǎn)、多因素、多環(huán)節(jié)的作用特點(diǎn)，使得中藥在治療COPD上具有天然優(yōu)勢(shì)。密蒙花治療COPD值得進(jìn)一步深入研究開發(fā)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007 年修訂版）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2007，30（1）：8-17.

[2]Wang C，Xu J，Yang L，et al.Prevalence and Risk Factors of Chronic Obstructive Pulmonary Disease in China（the China Pulmonary Health[Cph]Study）：A National Cross-Sectional Study.The Lancet，2018，391：1706-17.

[3]宋一平，崔德健，茅培英，等.慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的建立及藥物干預(yù)的影響[J].中華內(nèi)科雜志，2000，39（8）：556-557.

[4]GONZALEZ-AVILA G，BAZAN-PERKINS B，SANDOVAL C，et al.interstitial collagen turnover during airway remodeling in acute and chronic experimental asthma[J].Experimental and Therapeutic Med-icine，2016，12（3）：1419-1427.

[5]郭雷，朱文成，劉超，等.密蒙花化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2012，33（7）：222-225.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：329.

[7]李經(jīng)緯.《中醫(yī)大詞典》[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004.1659.

[8]HAN P，CUI Y J，GUO H Z，et al.Chemical constituents ofBuddleia officinalis and their bioactivities[J].Chin Tradit HerbDrugs（中草藥），2004，35（10）：1086-1090.

（收稿日期：2020-09-10）