王麗屏, 金顯棟， 畢峻龍， 蘇云順， 楊 聰， 李蛟龍， 亐開興*， 尹革芬*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，昆明 650201；2.云南省草地動物科學研究院，昆明 650212；3.楚雄州動物疫病預(yù)防控制中心，云南 楚雄 675000；4.姚安縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南 姚安 675300；5.玉溪市江川區(qū)雄關(guān)鄉(xiāng)獸醫(yī)站，云南 玉溪 652603)

牛病毒性腹瀉—黏膜病(bovine viral diarrhea，BVD)是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉—黏膜病毒(bovine viral diarrhea-mucosal disease virus，BVDV)感染牛后引起的一種傳染性疾病，牛、羊、鹿、豬等多種動物易感，其中犢牛最易感[1-2]。牛感染后導(dǎo)致發(fā)燒、腹瀉、呼吸系統(tǒng)疾病、生殖功能障礙、生長遲緩、免疫抑制、母畜流產(chǎn)、死胎等臨床表現(xiàn)，可引起急性、亞急性和持續(xù)性感染而終身帶毒，通過分泌物和排泄物不斷向外界排毒，是病毒傳播的主要途徑，也會成為更多動物的持續(xù)感染源[1,3]。目前我國已發(fā)現(xiàn)有20多個省份感染此病，感染范圍還在不斷擴大，養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟損失也不斷擴大，呈現(xiàn)出明顯的增長趨勢[4]，青海省2個不同地區(qū)牦牛BVDV感染率分別為19.6%和23.42%[5]，北京地區(qū)規(guī)?；膛鯞VDV血清抗體平均陽性率為48.2%[6]，2014—2015年西部四省區(qū)散養(yǎng)牛的血清抗體陽性率為33.93%[7]，新疆14家規(guī)?；膛鲅鍣z測BVDV血清抗原和抗體，其抗體陽性率91.38%[8]。因此，可以看出散養(yǎng)和規(guī)模化養(yǎng)殖的牛群中存在著BVDV不同程度感染的情況，并且飼養(yǎng)條件差、飼養(yǎng)密度較大的牛群中陽性率也較高。

隨著肉牛產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)發(fā)生了巨大變化，然而動物疾病突發(fā)變得越來越嚴重，疾病暴發(fā)和流行病暴發(fā)日益增加，伴隨國際貿(mào)易交易頻繁，?；紓魅拘约膊〉臋C率也隨之增加，這嚴重危害了養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，給畜牧業(yè)特別是肉牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。于此，本調(diào)查研究對云南省部分地區(qū)BVDV的流行狀況進行調(diào)查，以期為云南省防治BVD提供理論依據(jù)，助力云南省高原特色牧業(yè)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2019—2020年，采集到云南省4個州10個縣(市)的牛血液樣本總計456份，并進行了血清分離，其中規(guī)模養(yǎng)殖場牛血清樣品份數(shù)165份，散養(yǎng)戶的牛血清樣品數(shù)291份(表1)。在麗江市5個縣共計采集了257份牛血清樣品，其中玉龍縣散養(yǎng)戶牛血清樣品10份、華坪縣散養(yǎng)戶牛血清樣品16份，寧蒗縣散養(yǎng)戶牛血清樣品16份，古城區(qū)散養(yǎng)戶牛血清樣品14份，永勝縣規(guī)模養(yǎng)殖場牛血清樣品70份和散養(yǎng)戶牛血清樣品116份；在大理州共計采集69份牛血清樣品，其中賓川縣規(guī)模養(yǎng)殖場牛血清20份，洱源縣規(guī)模養(yǎng)殖場牛血清15份，漾濞縣散養(yǎng)戶牛血清樣品34份；在玉溪市江川區(qū)共計采集120份牛血清樣品，其中規(guī)模養(yǎng)殖場牛血清樣品60份，散養(yǎng)戶牛血清樣品60份；在文山州丘北縣共采集10份牛血清樣品，均為散養(yǎng)戶牛血清樣品。

表1 采集牛血清樣品情況

采集牛靜脈血，每頭牛采集血液總量不少于1 mL。采血管逐一編號，并認真記錄樣品來源信息。采血后，用離心機4 000 r/min離心10 min，收集血清，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方 法

牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒由北京愛德士元享生物科技有限公司研制生產(chǎn)，批號為M871；牛病毒性腹瀉病毒抗原/血清診斷檢測試劑盒，由北京愛德士元享生物科技有限公司研制生產(chǎn)，批號為P741；操作和結(jié)果判定按照說明書進行。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)BVDV抗體檢測

由表2可見，對云南省4個州的10個縣(市)送檢或采集的456份血清樣品，使用IDEXX牛病毒性腹瀉抗體檢測試劑盒進行了BVD抗體檢測，發(fā)現(xiàn)75份血清樣品檢測為陽性，平均抗體陽性率為16.45%，其中大理州洱源縣血清樣品BVDV抗體陽性率為60%，玉溪市江川區(qū)的血清樣品中檢測到的BVDV抗體陽性率為5%，麗江市華坪縣的血清樣品中未檢測到抗體陽性。

表2 不同地區(qū)BVDV抗體陽性率

2.2 不同地區(qū)的BVDV抗原檢測

由表3可見，對云南省4個州的10個縣(市)送檢或采集的456份血清樣品其中的380份血清樣品使用IDEXX牛病毒性腹瀉抗原檢測試劑盒進行了BVD抗原檢測，發(fā)現(xiàn)2份血清樣品檢測為陽性，平均抗原陽性率為0.53%，其中大理州賓川縣血清樣品中檢測到的BVDV抗原陽性率為7.69%，麗江市寧蒗縣的血清樣品中檢測到的BVDV抗體原性率為4%，其余8個縣(市)的血清樣品中未檢測到抗原陽性。

表3 不同地區(qū)BVDV抗原陽性率

2.3 不同養(yǎng)殖方式的BVDV血清抗體檢測

由表4可見，將456份血清樣品的抗體檢測結(jié)果按不同的養(yǎng)殖方式進行分組，在規(guī)模養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的牛血清樣品(165份)中檢測到抗體陽性數(shù)45份，規(guī)模場的抗體陽性率較高為27.27%，而在散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的牛血清樣品(291份)中散養(yǎng)戶的抗體陽性數(shù)為30份，散養(yǎng)戶的抗體陽性率較低為16.35%。

表4 不同養(yǎng)殖方式的BVDV抗體陽性率

2.4 不同養(yǎng)殖方式的BVDV血清抗原檢測

由表5可見，按不同的養(yǎng)殖方式進行分析統(tǒng)計，在規(guī)模養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的牛血清樣品(87份)中檢測到抗原陽性數(shù)1份，規(guī)模場的抗原陽性率較高為1.15%，而在散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的牛血清樣品(291份)中散養(yǎng)戶的抗原陽性數(shù)為1份，散養(yǎng)戶的抗體陽性率較低為0.34%。

表5 不同養(yǎng)殖方式的BVDV抗原陽性率

3 討 論

BVDV感染在國內(nèi)廣泛傳播，并且具有較高的患病率和遺傳多樣性，在我國奶牛、牦牛、水牛、駱駝、梅花鹿、豬等動物上都有發(fā)現(xiàn)，BVDV通過分泌物和排泄物不斷向外界排毒，成為其他動物的持續(xù)感染源[1,4]，很容易就感染周邊動物，從而在國內(nèi)呈逐步擴大的趨勢，每年對養(yǎng)殖業(yè)造成非常嚴重的經(jīng)濟損失。我國BVDV調(diào)查情況表明，其感染情況較為普遍，西北四省和四川省的黃牛和牦牛中發(fā)現(xiàn)黃牛的陽性率為46.15%，牦牛陽性率為30.08%[9]，西藏林芝不容樂觀，抗體陽性率為78.60%[10]，重慶市牛群的抗體陽性率為22.49%[11]，青海省2個不同的地區(qū)牦牛的感染率分別為19.6%和23.42%[5]，北京市3個區(qū)(縣)31個規(guī)模化奶牛場的平均陽性率為48.2%[6]，新疆13個地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場BVDV陽性檢出率為22.5%～62.5%，平均總陽性率為40.0%[12]，廣西省部分牛養(yǎng)殖場的抗體陽性率為36.52%[13]。本調(diào)查對云南省4個州的10個縣(市)的抗體陽性率在0～60%之間，整體抗體陽性率為16.45%，以大理州洱源縣的最高，達60%，而麗江市玉龍縣的最低為0，可能原因是麗江市玉龍縣的周圍地區(qū)牛群中有不同程度的感染情況，可能由于筆者在采集樣本數(shù)量偏少。

陳銳等對2014—2015年云南省保山市和大理州云龍縣的散養(yǎng)牛調(diào)查BVDV的抗體陽性率為10.0%，西部四省區(qū)的散養(yǎng)牛為33.93%[7]，而本調(diào)查的抗體陽性率為16.45%，處于其中間水平，這可能與樣本采集的時間以及采集地不固定有關(guān)。此外，不同養(yǎng)殖方式下的陽性率差異明顯，規(guī)模場BVDV的整體抗體陽性率27.27%，比散養(yǎng)的10.31%高出17個百分點，這可能是因為規(guī)模化養(yǎng)殖的過程中養(yǎng)殖高度集中、密度較高，增加了接觸和病毒傳播的幾率，同時由于該病沒有明顯的臨床癥狀，往往會容易造成防控上的疏忽[6,9,14-15]，注重規(guī)模場的BVDV防控至關(guān)重要。

BVDV能夠引起宿主產(chǎn)生免疫抑制，降低機體抵抗力，出現(xiàn)持續(xù)性感染[16]，增加了罹患其他動物疫病的幾率。但由于出現(xiàn)明顯的臨床癥狀較少，導(dǎo)致部分牛場對該病防治不夠重視，可能會導(dǎo)致感染率持續(xù)上升。本研究檢測的378份血清樣品中有2份BVDV抗原呈陽性，陽性率為0.53%。對抗原陽性的牛經(jīng)過1個月后重新采樣進行抗原和抗體檢測排查持續(xù)感染牛，結(jié)果顯示2頭牛為持續(xù)感染牛，占牛群的0.53%。持續(xù)感染牛是BVDV的主要傳染源，因此檢測和淘汰持續(xù)感染牛是控制該病的主要途徑。

作為高原特色農(nóng)業(yè)，云南省提出了打造世界一流“綠色食品牌”，其中肉牛產(chǎn)業(yè)正是我們著力打造世界一流“綠色食品牌”的重要組成部分和云南省重點發(fā)展的八大高原特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)。2019年云南省肉牛存欄867.31萬頭，出欄達到356.90萬頭，可是隨著云南省肉牛產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)結(jié)構(gòu)發(fā)生了重大變化，伴隨國際貿(mào)易的頻繁，?；紓魅拘约膊〉臋C率也隨之增加，給肉牛產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，制約了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。下一步筆者將擴大樣本采集的地理涵蓋區(qū)域，并加強對犢牛的監(jiān)測，控制犢牛流行性腹瀉，不斷提高犢牛成活率，提高牛群生產(chǎn)力[17-18]，為進一步摸清云南省BVDV及其混合感染情況，分離地方毒株以揭示其遺傳變異，界定其遺傳分化地位和綜合防制提供理論參考[19-21]。