茵陳-梔子五種配比對(duì)綠原酸和梔子苷含量的影響

韓琪琪，胥彤彤，王銳男，李向輝，馬 霞，2，劉永錄，郭振環(huán)，2

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 450046；2.河南省康星藥業(yè)股份有限公司 451464)

茵陳味苦辛，氣微寒；歸脾、胃、肝、膽經(jīng)。具有清熱、祛濕、退黃疸的功效[1]，臨床上常用于黃疸及濕瘡的治療，其主要成分有黃酮類、有機(jī)酸類、綠原酸、香豆素等及其代謝產(chǎn)物[2]。梔子氣微，味苦性寒；歸肝、肺、胃、心、三焦經(jīng)，具有瀉火除煩、清熱解毒、祛濕涼血的功效[3]，是臨床治療濕熱黃疸及濕熱淋證的常用藥物。

茵陳與梔子是常用的中藥藥對(duì)，在茵陳蒿湯、茵陳梔子湯、茵陳梔子大棗湯等方劑中均有配伍使用?，F(xiàn)代研究茵陳蒿湯較多[4,5]，對(duì)茵陳和梔子單味藥的研究也不少[6,7]，對(duì)于茵陳梔子藥對(duì)不同配比及不同提取方法對(duì)綠原酸及梔子苷成分含量的變化尚未見(jiàn)報(bào)道。為研究茵陳與梔子配伍后主要成分的變化以揭示其配伍的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，本試驗(yàn)通過(guò)茵陳與梔子不同配伍比例、不同提取方法對(duì)綠原酸與梔子苷含量的影響，以篩選出茵陳梔子藥對(duì)的最佳配伍比例與提取方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥材與對(duì)照品

茵陳、梔子均購(gòu)自鄭州瑞龍制藥股份有限公司。經(jīng)鑒定茵陳為菊科牛至屬植物茵陳蒿的干燥地上部分。梔子為茜草科雙子葉植物山梔的成熟果實(shí)。綠原酸對(duì)照品(批號(hào)MUST-19106464)、梔子苷對(duì)照品(批號(hào)MUST-19102310)均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司。

1.2 主要儀器與試劑

電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；高效液相色譜儀(Agilent Technologies)。色譜級(jí)甲醇、乙腈均購(gòu)自天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司。

1.3 茵陳與梔子配伍樣品的制備

1.3.1 水煎法

分別取茵陳、梔子及不同配比的茵陳-梔子(1∶1，1∶2，2∶1，3∶1，1∶3)放入不銹鋼鍋中加水浸泡30 min，加熱煎煮40 min后過(guò)濾，二次煎煮20 min后過(guò)濾。分別合并兩次煎液，濃縮至每1 ml相當(dāng)于原藥材1 g,4 ℃放置備用。

1.3.2 水煎醇沉法

分別取部分1.3.1制備的單味藥及各配伍比例下濃縮液，加入乙醇使乙醇終含量為70%。放置48 h后抽濾，得到沉淀和上清液。將沉淀在60 ℃的溫度下干燥備用。上清液回收乙醇至每1 mL相當(dāng)于原藥材1 g備用。

1.4 含量測(cè)定

1.4.1 綠原酸的含量測(cè)定

1.4.1.1 綠原酸的色譜條件

色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠的C18柱；流動(dòng)相為乙腈20%-0.1%磷酸溶液80%；檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。

1.4.1.2 綠原酸對(duì)照品溶液的制備

精密稱取適量的綠原酸對(duì)照品，加甲醇配制成每1 mL含綠原酸70μg的對(duì)照品溶液備用。

1.4.1.3 供試品溶液的制備

分別取1.3.1制備的各煎液1 ml及1.3.2制備的水煎醇沉上清液1 ml加入5 mL甲醇超聲30 min；將1.3.2干燥后的各水煎醇沉沉淀1 g加入5 mL甲醇超聲30 min。吸取1 mL的上清液放入5 mL的容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.4.2 梔子苷的含量測(cè)定

1.4.2.1 梔子苷的色譜條件

色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠的C18柱；流動(dòng)相為乙腈15%-0.1%磷酸溶液85%；檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。

1.4.2.2 梔子苷對(duì)照品溶液的制備

精密稱取適量的梔子苷對(duì)照品，加甲醇配制成每1 mL含梔子苷30 μg的對(duì)照品溶液備用。

1.4.2.3 供試品溶液的制備

同1.4.1.3。

2 結(jié)果

2.1 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

在水煎提取法的藥液中，茵陳-梔子配伍后的水煎液綠原酸含量比茵陳單味藥水煎液中的綠原酸折算后的理論含量高。其中，茵陳-梔子2∶1配伍比例下的水煎液綠原酸的含量最高。

在水煎醇沉提取法中，茵陳-梔子配伍后的水煎醇沉沉淀和上清液中綠原酸含量高于茵陳單味藥水煎醇沉沉淀與上清液的綠原酸折算后的理論含量。以茵陳-梔子配伍比例為2∶1水煎醇沉沉淀的綠原酸含量最高。茵陳-梔子配伍比例為2∶1時(shí)，上清液中綠原酸含量最高。

表1 各樣品中綠原酸含量 μg/mL

2.2 梔子苷含量測(cè)定結(jié)果

在水煎提取法的藥液中，茵陳-梔子配伍后的水煎液梔子苷含量比梔子單味藥水煎液中的梔子苷折算后的理論含量高。其中，以茵陳-梔子1∶3配伍后的水煎液中的梔子苷含量最高。

在水煎醇沉提取法中，茵陳-梔子配伍后的水煎醇沉沉淀的梔子苷含量全部低于梔子單味藥水煎醇沉沉淀的梔子苷折算后的理論含量；上清液中的梔子苷含量全部高于梔子單味藥水煎醇沉上清液中的梔子苷折算后的理論含量，以茵陳-梔子1∶3配伍的水煎液中梔子苷含量最高。

表2 各樣品中梔子苷含量 μg/mL

3 討論

茵陳-梔子藥對(duì)水煎液中的綠原酸含量高于茵陳單味藥煎煮所提取的綠原酸折算后的理論含量。水煎醇沉提取法中，沉淀和上清液中的綠原酸含量也高于茵陳單味藥所提取的綠原酸折算后的理論含量。韓晉等[8]研究了方藥配伍對(duì)茵陳蒿湯中綠原酸溶出率的影響，得出全方水煎有利于綠原酸溶出的結(jié)論。本試驗(yàn)與該研究結(jié)果一致。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，茵陳-梔子藥對(duì)水煎液中的梔子苷含量均高于梔子單味藥所提取的梔子苷折算后的理論含量。袁海龍等[9]在研究方藥配伍對(duì)茵陳蒿湯中梔子苷溶出率的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)全方水煎后有利于梔子苷的溶出。此與本試驗(yàn)結(jié)果相似。本試驗(yàn)中，茵陳-梔子藥對(duì)水煎醇沉提取的沉淀中梔子苷含量低于梔子單味藥所提取的梔子苷折算后的理論含量，這可能與梔子苷易溶于水相關(guān)。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在同一比例下，水煎醇沉提取法的上清液中綠原酸和梔子苷含量為最高；其次為水煎法。

茵陳-梔子各配伍比例的綠原酸及梔子苷含量較單味藥折算后的理論含量提高。選取的茵陳-梔子五個(gè)配伍比例中，水煎液與水煎醇沉沉淀及上清液中均以茵陳-梔子2∶1配伍比例提取的綠原酸含量最高，而以茵陳-梔子1∶3配伍比例提取的梔子苷含量最高。因此臨床運(yùn)用茵陳-梔子藥對(duì)時(shí)，當(dāng)主要發(fā)揮綠原酸的藥理作用時(shí)，可以選取茵陳-梔子2∶1的配伍比例；主要發(fā)揮梔子苷的藥理作用時(shí)，可以選取茵陳-梔子1∶3的配伍比例。