甲基紅分光光度法測定頭孢克肟

胡小明，高先明，于 洋，陳泰輝

(1.平頂山學(xué)院 化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，河南 平頂山 467036；2.河南神馬尼龍化工有限責(zé)任公司，河南 平頂山 467000)

0 引言

頭孢克肟屬于第3代頭孢菌素類抗生素，對革蘭氏菌具有廣泛抗性，主要通過阻止細菌細胞壁的合成而具有抗菌性[1]，可以抑制鏈球菌(腸球菌除外)、肺炎球菌、淋球菌、布蘭漢氏菌、大腸桿菌、克雷伯氏菌、沙霉氏菌等引起的細菌感染[2]，主要用于治療尿道、呼吸道感染，膽囊炎、猩紅熱、中耳炎、副鼻竇炎等疾病[3]，藥物不良反應(yīng)較少.

目前，頭孢克肟的測定方法主要有高效液相色譜法[4-5]、間接原子吸收光譜法[6]、近紅外光譜分析法[7-8]、膠束電動毛細管色譜法[9]、紫外可見分光光度法[10]等.荷移分光光度法[11]由于其具有儀器簡單，操作方便的特點，在藥物含量的分析中得到廣泛應(yīng)用.筆者以甲基紅作為電子受體，頭孢克肟作為電子供體，以紫外分光光度法為測試手段，利用頭孢克肟和甲基紅之間的電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，建立了快速測定頭孢克肟含量的電荷轉(zhuǎn)移光度法.

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；723N型可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)；CPA225D型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司).

0.35 g/L頭孢克肟(中國藥品生物制品鑒定所)乙醇溶液：精確稱取頭孢克肟標(biāo)準(zhǔn)品0.087 5 g，用適量無水乙醇全部溶解后轉(zhuǎn)移至250 mL棕色容量瓶中，搖勻，定容；1.0×10-3mol/L甲基紅(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)乙醇溶液：準(zhǔn)確稱取 0.067 3 g甲基紅粉末于燒杯中，用適量無水乙醇溶解后，定容至250 mL容量瓶中.上述溶液均置于4 ℃的冰箱中備用.實驗所用其他試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水.

1.2 實驗方法

準(zhǔn)確移取適量頭孢克肟工作溶液于25 mL容量瓶中，加入1.0×10-3mol/L甲基紅溶液3.0 mL，用反應(yīng)溶劑稀釋至刻度搖勻，于35 ℃條件下反應(yīng)10 min，以試劑空白為參比，用1 cm石英比色皿在波長525 nm處測定反應(yīng)體系的吸光度.

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

按照實驗方法，利用TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，以蒸餾水為參比，在400～700 nm范圍內(nèi)進行光譜掃描，繪制吸收光譜，見圖1.

由圖1可知：頭孢克肟在400～700 nm范圍內(nèi)幾乎沒有吸收；甲基紅的最大吸收波長為434 nm.加入頭孢克肟后，反應(yīng)體系在434 nm處的吸收峰消失，在525 nm處出現(xiàn)新的最大吸收峰.最大吸收波長發(fā)生紅移91 nm，說明甲基紅和頭孢克肟發(fā)生了絡(luò)合反應(yīng)，生成了一種更加穩(wěn)定的新物質(zhì).筆者選取525 nm作為測定波長.

1—頭孢克肟；2—甲基紅；3—荷移絡(luò)合物.

2.2 溶劑的選擇

按照實驗方法配制溶液，選用蒸餾水、甲醇、乙醇、丙酮、乙二醇作為反應(yīng)溶劑，以試劑空白為參比，在525 nm處測定絡(luò)合體系的吸光度，考查反應(yīng)溶劑對體系吸光度的影響，結(jié)果見表1.結(jié)果表明，用蒸餾水作為溶劑時體系的吸光度最大并且穩(wěn)定.故筆者選擇二次蒸餾水作為頭孢克肟-甲基紅溶液反應(yīng)體系的溶劑.

表1 不同溶劑下反應(yīng)體系的吸光度

2.3 甲基紅用量的影響

按照實驗方法配制溶液，以試劑空白為參比，改變甲基紅的用量，考查甲基紅的用量對反應(yīng)體系吸光度的影響，結(jié)果見圖2.結(jié)果表明，當(dāng)甲基紅的用量為3.0 mL時，體系吸光度最大，隨著甲基紅用量的增加，吸光度逐漸下降.主要是由于隨著甲基紅用量的增加，絡(luò)合反應(yīng)終止，背景吸光度增大，反應(yīng)的靈敏度降低.筆者選用甲基紅用量為3.0 mL.

圖2 甲基紅用量的影響

2.4 反應(yīng)溫度與時間的影響

按照實驗方法配制溶液，以試劑空白為參比，改變反應(yīng)溫度，考查反應(yīng)溫度對體系吸光度的影響，結(jié)果見圖3.結(jié)果表明：隨著反應(yīng)溫度的升高，絡(luò)合反應(yīng)體系的吸光度在35 ℃時達到最大，繼續(xù)增加溫度，頭孢克肟的活性下降，體系的吸光度逐漸下降.筆者選取35 ℃作為反應(yīng)溫度.

圖3 反應(yīng)溫度的影響

按照實驗方法配制溶液，以試劑空白為參比，改變反應(yīng)時間，考查反應(yīng)時間對體系吸光度的影響，結(jié)果見圖4.結(jié)果表明，當(dāng)反應(yīng)時間進行到10 min時，吸光度達到最大，隨后2 h內(nèi)吸光度基本保持不變.筆者選擇反應(yīng)時間為10 min.

圖4 反應(yīng)時間的影響

2.5 表面活性劑的影響

按照實驗方法配制溶液，以試劑空白為參比，選用OP-10、聚乙二醇、SDBS、吐溫80、CTMAB作為表面活性劑，考查表面活性劑對反應(yīng)體系吸光度的影響，結(jié)果見表2.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加表面活性劑后吸光度沒有明顯的改變，說明表面活性劑對絡(luò)合反應(yīng)沒有明顯的促進作用.因而筆者選擇不使用表面活性劑.

表2 表面活性劑對體系吸光度的影響

2.6 絡(luò)合物的絡(luò)合比

應(yīng)用等摩爾連續(xù)變化法來測定絡(luò)合物的組成，保持溶液中頭孢克肟和甲基紅的總濃度(C總)不變，連續(xù)改變?nèi)芤褐蓄^孢克肟濃度(C1)和甲基紅濃度(C2)，按實驗方法在525 nm處測定反應(yīng)體系的吸光度，計算反應(yīng)絡(luò)合物的絡(luò)合比，結(jié)果見圖5.由圖5可以看出，該反應(yīng)體系絡(luò)合物的絡(luò)合比為11.

圖5 絡(luò)合物的絡(luò)合比

2.7 工作曲線、檢出限與精密度

在最佳實驗條件下，按照實驗方法配制溶液，以試劑空白為參比，分別改變頭孢克肟工作溶液加入量，測定反應(yīng)體系的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，如圖6所示.結(jié)果表明，頭孢克肟在0.6～20 mg/L范圍內(nèi)符合比爾定律，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為A=0.018 1c+0.052 8(mg/L)，線性相關(guān)系數(shù)r=0.988 6.

圖6 反應(yīng)體系的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

根據(jù)實驗方法，平行測定試劑空白溶液11次，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差，按照3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差計算出本方法的檢出限為0.39 mg/L；根據(jù)實驗方法，平行配制6份頭孢克肟含量為8.0 mg/L的反應(yīng)體系，測定體系的吸光度，計算出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.43 %.

2.8 樣品含量分析

取頭孢克肟片劑5片(標(biāo)示量為100 mg/片),用研缽研碎、混勻并準(zhǔn)確稱量相當(dāng)于原藥100 mg的量，用無水乙醇全部溶解后，過濾，濾液定容在250 mL的容量瓶中，作為樣品溶液.按照實驗方法，準(zhǔn)確移取1 mL的樣品溶液，測定藥物中頭孢克肟的含量.同時用標(biāo)準(zhǔn)加入法，進行回收實驗，結(jié)果如表3所示(RSD=1.43%).

表3 樣品中頭孢克肟的測定結(jié)果

3 結(jié) 論

利用頭孢克肟與甲基紅發(fā)生荷移反應(yīng)的原理，建立了測定藥物中頭孢克肟含量的分光光度法.考查了最佳反應(yīng)條件，測定了藥片中頭孢克肟的含量.實驗結(jié)果令人滿意，建立的測定方法簡單、快捷，可以用于實際樣品中頭孢克肟含量的快速測定.