余焱方 ，劉鑒毅 , ，馮廣朋 , ，趙 峰 , ，孫雪娜 ，王 妤, ，鄒 雄, ，黃曉榮 , ，李 琪 ，孫艷秋 ，鄭文明

（1. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心，上海 201306； 2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090； 3. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海與長江口漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測實驗站，上海 200090）

水環(huán)境鹽度的急劇變化會引起魚體內(nèi)環(huán)境失衡，不僅會造成組織器官損壞、滲透條件功能喪失，還會影響其存活和生長[1-2]。廣鹽性硬骨魚類通過調(diào)節(jié)鰓絲上皮中氯細胞的數(shù)量、分布等來適應(yīng)外界水環(huán)境的鹽度變化，氯細胞在魚類滲透壓調(diào)節(jié)中起到重要的作用。研究表明，氯細胞不僅可以在高滲條件下分泌和吸收鈉離子 (Na+)、鉀離子 (K+)，還可在低滲條件下向外界分泌氯離子 (Cl?)，具有離子的雙向轉(zhuǎn)運功能[3-4]。在不同鹽度海水環(huán)境下鰓氯細胞主要發(fā)揮離子吸收和離子分泌的作用，其數(shù)量和形態(tài)大小會因外界鹽度變化而發(fā)生相應(yīng)改變[5]。為了適應(yīng)外界環(huán)境鹽度驟變，鰓氯細胞發(fā)生形態(tài)結(jié)構(gòu)的相應(yīng)改變，不同亞型之間通過可逆性的轉(zhuǎn)變進行滲透調(diào)節(jié)，以維持內(nèi)外環(huán)境穩(wěn)定[6]。

金錢魚 (Scatophagus argus)，也稱金鼓魚，屬于鱸形目，廣泛分布于印度-太平洋水域，屬于廣鹽性亞熱帶硬骨魚類，在滲透調(diào)節(jié)方面具有很強的適應(yīng)性[7]。目前有關(guān)金錢魚滲透調(diào)節(jié)方面的研究報道主要涉及鹽度相關(guān)基因的克隆與表達[8]、滲透基因的表達分析[9-10]、抗氧化作用的相關(guān)研究[11]，而鹽度對金錢魚組織學(xué)的影響研究較少。本實驗采用普通光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡，觀察金錢魚幼魚在鹽度驟變后的不同時間內(nèi)，鰓線粒體豐富細胞(Mitochondria-rich cells, MRCs)的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，比較分析鰓線粒體豐富細胞在鹽度適應(yīng)過程中的變化規(guī)律，為闡明魚類鰓的結(jié)構(gòu)特征與其鹽度適應(yīng)調(diào)節(jié)關(guān)系提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗魚

實驗于中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所福鼎基地進行，選擇人工繁殖后健康的金錢魚幼體，體長為 (4.68±0.09) cm，體質(zhì)量為 (6.31±0.25) g，暫養(yǎng)于基地水槽中，周期30 d。

1.2 實驗設(shè)計與樣品采集

實驗暫養(yǎng)期間，以當(dāng)?shù)刈匀缓Ｋ}度為對照組(20 鹽度組)，溫度為 (22±0.5) ℃，pH 7.8～8.1，溶解氧質(zhì)量濃度大于6.5 mg·dm?3，氨氮質(zhì)量濃度(0.10±0.02) mg·L?1。24 h 連續(xù)充氣，每天換水1/3，并于早晚各喂食1次，投喂飼料為魚體質(zhì)量的1%，喂食1 h 后吸污。實驗以20鹽度組為對照組，暫養(yǎng)1周后直接投入5鹽度組和35鹽度組的水體中，每組設(shè)3個平行，每個平行30尾魚，飼養(yǎng)于2個直徑80 cm、高72 cm的塑料水槽中。實驗開始后于第3、第6、第12、第24、第48和第96小時分別取樣，對照組于實驗結(jié)束時取樣。從各水槽內(nèi)隨機選取3尾幼魚，取左側(cè)第二鰓弓鰓絲，取樣期間不喂食，實驗期間無死亡。

光鏡樣品用波恩溶液保存，固定24 h，經(jīng)流水沖洗，在Lecia TP 1 020脫水機下進行乙醇梯度脫水 (脫水梯度0%、80%、95%、100%)，石蠟包埋，Lecia RM 2 135切片機超薄切片，厚度為4～5 μm。蘇木精-伊紅進行染色，中性樹膠封片，Axio Scope·A1型光學(xué)顯微鏡觀察并拍照。電鏡樣品用戊二醛固定，4 ℃下固定1周，0.1 mol·L?1的PBS室溫沖洗3次，1%鋨酸溶液固定l h，進行梯度乙醇脫水 (30%、50%、70%、80%、90%、100%)，分離鰓弓中部的鰓絲，Epon 812滲透和包埋，ULTRACUTE超薄切片機切片，采用醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染的常規(guī)電鏡切片染色，日立 (JSM 5 610)透射電鏡觀察、拍照。

1.3 實驗數(shù)據(jù)測量與統(tǒng)計分析

將光學(xué)顯微鏡拍照所得照片用Imager proplus 6.0軟件經(jīng)校準(zhǔn)后，對金錢魚鰓線粒體豐富細胞長徑與短徑、次級鰓小片直徑進行測量 (用GL 表示)隨機選取測量6組數(shù)據(jù)，然后取平均值。

2 結(jié)果

2.1 鹽度驟變金錢魚幼魚鰓的顯微結(jié)構(gòu)變化

切片經(jīng)HE染色后，各種細胞的細胞質(zhì)呈淺紅色，細胞核呈藍色 (圖1、圖2)。低鹽脅迫第3小時其線粒體豐富細胞長徑 [(9.517±1.390) μm]和短徑 [(7.150±1.448) μm]顯著大于對照組長徑 [(7.317±0.986) μm]和短徑 [(5.067±0.467) μm] (P＜0.05)，脅迫24 h后線粒體豐富細胞長徑和短徑與對照組均存在顯著差異 (P＜0.05)。脅迫第3小時次級鰓小片直徑[(12.783±1.603) μm]較對照組 [(10.567±1.217) μm]差異顯著(P＜0.05)，6 h后鰓小片直徑均小于對照組。

圖1 5鹽度組脅迫金錢魚鰓的顯微結(jié)構(gòu)圖a. 5鹽度組3 h鰓絲整體圖；b. 5鹽度組3 h鰓絲部分放大圖；c. 5鹽度組6 h鰓絲部分放大圖；d. 5鹽度組12 h鰓絲部分放大圖；e. 5鹽度組24 h鰓絲部分放大圖；f. 對照組 (20鹽度) 鰓絲； g. 5鹽度組96 h鰓絲部分放大圖；MRCs. 線粒體豐富細胞；MC. 黏液細胞；BC. 血細胞；GL. 表示次級鰓小片直徑；pl. 初級鰓小片；sl. 次級鰓小片；ecm. 在細胞外軟骨質(zhì)中；后圖同此Figure 1 Microscopic structure of S. argus gills at salinity of 5a. Whole picture of gill filament at salinity of 5 and at 3rd hour; b. Enlarged view of gill filament at salinity of 5 and at 3rd hour ; c. Enlarged view of gill filament at salinity of 5 and at 6th hour; d. Enlarged view of gill filament at salinity of 5 and at 12th hour; e. Enlarged view of gill filament at salinity of 5 and at 24th hour; f. Gill filament at salinity of 20 (Control group); g. Enlarged view of gill filament at salinity of 5 and at 96th hour;MRCs. Mitochondrion-rich cells; MC. Mucus cell; BC. Blood cell; GL. Secondary gill lamella diameter; pl. Primary gill lamella;sl. Secondary gill lamella; ecm. In extracellular cartilaginous bone. The same below.

圖2 35鹽度組脅迫金錢魚鰓的顯微結(jié)構(gòu)圖a. 35鹽度組3 h鰓絲部分放大圖；b. 35鹽度組6 h鰓絲部分放大圖；c. 35鹽度組12 h鰓絲部分放大圖；d. 35鹽度組24 h鰓絲部分放大圖；e. 35鹽度組96 h鰓絲部分放大圖；f. 對照組 (20鹽度) 鰓絲部分放大圖Figure 2 Microscopic structure of S. argus gills at salinity of 35a. Enlarged view of gill filament at salinity of 35 and at 3rd hour; b. Enlarged view of gill filament at salinity of 35 and at 6th hour; c. Enlarged view of gill filament at salinity of 35 and at 12th hour; d. Enlarged view of gill filament at salinity of 35 and at 24th hour; e. Enlarged view of gill filament at salinity of 35 and at 96th hour; f. Control group, enlarged view of gill filament at salinity of 20

高鹽脅迫第3小時次級鰓小片直徑 [(21.333±2.510) μm]顯著大于對照組 [(10.567±1.217) μm] (P＜0.05)，第12小時金錢魚鰓的線粒體豐富細胞長徑[(6.267±0.723) μm]和短徑 [(3.850±0.638) μm]顯著小于對照組長徑 [(7.317±0.986) μm]和短徑 [(5.067±0.467) μm] (P＜0.05)，第 24和第 48小時與對照組差異不顯著，第96小時短徑 [(5.967±0.588) μm]與對照組短徑 [(5.067±0.467) μm]差異較顯著 (P＜0.05，表 1，表 2)。

表1 不同鹽度下金錢魚鰓線粒體豐富細胞長徑、短徑變化Table 1 Changes of long and short diameters of MRCs in S. argus gill at different salinities

表2 不同鹽度下金錢魚次級鰓小片直徑的變化Table 2 Changes in diameter of secondary gill lamella of of S. argus at different salinities

2.1.1 5鹽度組急性脅迫下金錢魚幼魚鰓的顯微結(jié)構(gòu)變化 脅迫第3小時初級鰓小片基部、次級鰓小片上均分布有線粒體豐富細胞，但主要存在于次級鰓小片上。鰓絲部分膨大，次級鰓小片增生。黏液細胞主要在初級鰓小片基部，數(shù)量較少，細胞外軟骨質(zhì)中間隔增大 (圖1-a、1-b)。第6小時線粒體豐富細胞數(shù)量明顯增加，初級鰓小片基部膨大，次級鰓小片直徑縮短 (圖1-c)。第12小時線粒體豐富細胞數(shù)量減少，血細胞數(shù)量增加，并向次級鰓小片頂端蔓延 (圖1-d)。第24小時線粒體豐富細胞數(shù)量變化差異不大，從次級鰓小片基部往頂端延伸，頂端線粒體豐富細胞數(shù)量的增加使得次級鰓小片呈膨脹狀態(tài)，但鰓絲可見整體形狀，處于主動調(diào)節(jié)階段(圖1-e)。第96小時鰓絲發(fā)生顯著變化，呈細長狀，線粒體豐富細胞主要分布在初級鰓小片上，與對照組 (圖1-f) 形態(tài)差異不大，此時經(jīng)過主動調(diào)節(jié)后開始適應(yīng)外界環(huán)境，達到新的平衡 (圖1-g)。

2.1.2 35鹽度組急性脅迫下金錢魚幼魚鰓的顯微結(jié)構(gòu)變化 第3小時鰓絲著色較淺，次級鰓小片增生，鰓絲整體形狀呈溶解狀，細胞出現(xiàn)脫落、壞死，線粒體豐富細胞數(shù)量較少 (圖2-a)。第6小時線粒體豐富細胞數(shù)量增加，主要分布在次級鰓小片基部，軟骨細胞數(shù)量增加，黏液細胞主要分布在初級鰓小片上 (圖2-b)。第12小時線粒體豐富細胞主要分布在初級鰓小片上，數(shù)量顯著減少，血細胞數(shù)量增加，存在于細胞外軟骨質(zhì)中，排列分布在初級鰓小片上，并向次級鰓小片頂端蔓延。鰓小片形態(tài)完整，此時最接近對照組 (圖2-c、2-f)。第24小時鰓絲整體著色加深，線粒體豐富細胞主要分布在次級鰓小片基部，數(shù)量增加 (圖2-d)。第96小時細胞著色顯著加深，線粒體豐富細胞顯著增加，主要分布在次級鰓小片上，黏液細胞緊密分布在初級鰓小片上，鰓絲形態(tài)與對照組相似 (圖2-e、2-f)。

2.2 鹽度驟變金錢魚幼魚鰓的透射電鏡觀察結(jié)果

透射電鏡下金錢魚幼魚鰓線粒體豐富細胞一般為圓形或橢圓形，根據(jù)不同鹽度下線粒體豐富細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)不同，且頂端開口方式多樣，故分為：1) Ⅰ型線粒體豐富細胞，細胞的體積較大，一般為橢圓形，胞核形狀不規(guī)則，內(nèi)脊發(fā)達，頂端開口處于關(guān)閉或開放狀態(tài)；2) Ⅱ型線粒體豐富細胞，細胞數(shù)量較多，大多為圓形，胞核規(guī)則呈圓形，具有多個頂端開口。細胞內(nèi)存在大量線粒體以及豐富的網(wǎng)管系統(tǒng)，微細小管系統(tǒng)相互交錯形成大小不一的珠泡狀結(jié)構(gòu)。線粒體形態(tài)多樣，包括彎曲形、圓形和橢圓形，主要有2種形態(tài)：1) a型線粒體，形狀粗短，著色較淺；2) b型線粒體，著色較深，呈小的顆粒狀。

2.2.1 5鹽度組急性脅迫下金錢魚幼魚鰓的透射電鏡觀察結(jié)果 低鹽脅迫下金錢魚幼魚鰓線粒體豐富細胞呈2種形態(tài)，第3小時觀察發(fā)現(xiàn)為Ⅰ型線粒體豐富細胞，頂端開口處于關(guān)閉狀態(tài)或形成頂隱小窩 (圖3-b、3-e、3-f)。胞質(zhì)內(nèi)具有大量的線粒體，示a型線粒體。第6小時可觀察到線粒體豐富細胞周圍具有發(fā)達的網(wǎng)管結(jié)構(gòu)，與周圍輔助細胞形成緊密連接，細胞內(nèi)線粒體數(shù)量較多 (圖3-c)。第12小時線粒體豐富細胞具有頂端開口，向內(nèi)凹陷形成頂隱小窩，有光泡結(jié)構(gòu)(圖3-d)。第24小時細胞內(nèi)的線粒體數(shù)量較少，呈散狀分布，多為粗短形，細胞之間連接緊密 (圖3-e)。第48小時出現(xiàn)細胞核色素沉積反應(yīng)，透射電鏡下觀察到大部分線粒體豐富細胞的細胞核發(fā)生色素沉積 (圖3-f)。第96小時為Ⅱ型線粒體豐富細胞，細胞之間緊密連接，胞核形狀多為圓形，細胞內(nèi)線粒體數(shù)量較少，為b型線粒體，細胞開放直接與外界相接觸，胞內(nèi)具有形狀大小不一的珠泡結(jié)構(gòu)，具發(fā)達的微細小管系統(tǒng)(圖3-g)。20鹽度組 (對照組)，線粒體豐富細胞一般呈圓形，胞核體積較大，形狀規(guī)則，胞質(zhì)內(nèi)具有大量的線粒體，主要為a型線粒體，胞質(zhì)間可見光泡結(jié)構(gòu) (圖 3-i)。

圖3 5鹽度組脅迫對金錢魚鰓超微結(jié)構(gòu)的影響a. 5鹽度組3 h后鰓小片的超微結(jié)構(gòu)； b. 5鹽度組3 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖，示Ⅰ型線粒體豐富細胞；c. 5鹽度組6 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖；d. 5鹽度組12 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖；e. 5鹽度組24 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖；f. 5鹽度組48 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖；g. 5鹽度組96 h后鰓的線粒體豐富細胞超微結(jié)構(gòu)圖，示Ⅱ型線粒體豐富細胞結(jié)構(gòu)；Ao. 頂端開口；Ap. 頂端小窩；MRCs. 線粒體豐富細胞；M. 線粒體；M1. a型線粒體；M2. b型線粒體；N. 細胞核；tn. 管網(wǎng)結(jié)構(gòu)；lv. 光泡；JC. 緊密連接；N1. 形成色素的細胞核；h. 示a型線粒體；i. 對照組(20鹽度組) 鰓超微結(jié)構(gòu)整體圖；Ts. 微細小管系統(tǒng)；后圖同此Figure 3 Effects of salinity 5 stress on ultrastructure of gill of S. argusa. Ultrastructure structure of gill lamella at salinity of 5 and at 3rd hour; b. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and at 3rd hour, showing Type I mitochondrionrich cells; c. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and a 6th hour; d. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and at 12th hour; e. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and at 24th hour; f. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and at 48th hour; g. Ultrastructure structure of MRCs of gill lamella at salinity of 5 and at 96th hour, showing Type II mitochondrion-rich cells; Ao. Apical opening; Ap. Apical crypt; MRCs. Mitochondrion-rich cells;M1. Type a Mitochondrion; M2. Type b mitochondrion; N. Nucleus; tn. Tubular network; lv. Light vesicles; JC. Junctional complex;N1. Chromogenic nucleus; h. Showing Type a mitochondrion; i. Control group (salinity of 20),whole picture of gill ultrastructure; Ts. Microtubule system; the same below.

2.2.2 35鹽度組急性脅迫下金錢魚幼魚鰓的透射電鏡觀察結(jié)果 高鹽環(huán)境下線粒體豐富細胞體積膨大，呈分散溶解狀態(tài)，示Ⅱ型線粒體豐富細胞，與5鹽度組相比，細胞內(nèi)線粒體數(shù)量顯著增多，胞核形狀較規(guī)則，多為圓形，具有頂端開口，頂膜內(nèi)凹形成頂隱小窩，凹陷程度較5鹽度組深，且細胞之間多相鄰分布 (圖4-d)，頂膜表面具有大量微絨毛 (圖4-f)。第3小時線粒體豐富細胞分布不緊密，且細胞為開放狀態(tài)直接與外界相接觸，細胞內(nèi)的線粒體數(shù)量較少，a型線粒體和b型線粒體數(shù)量較均勻，細胞中孔洞結(jié)構(gòu)較多，微細小管系統(tǒng)發(fā)達(圖4-b)。第6小時可觀察到明顯的微脊結(jié)構(gòu) (圖4-c)。第12小時可觀察到頂隱小窩，且開口較深 (圖4-d)。第24小時線粒體豐富細胞沒有明顯的邊界，其細胞核出現(xiàn)色素沉積，胞核形狀開始改變，變成橢圓形 (圖4-e)。第48小時胞核明顯變小且出現(xiàn)色素沉積反應(yīng)，頂膜開口處可觀察到大量微絨毛 (圖4-f)。第96小時線粒體豐富細胞兩兩相鄰，2種形態(tài)的線粒體均存在且數(shù)量也明顯增加 (圖4-g)。

對照組即為20鹽度組，線粒體豐富細胞體積大，且多相鄰分布，細胞內(nèi)線粒體數(shù)量較多，分布密集，微細小管系統(tǒng)發(fā)達，微脊結(jié)構(gòu)明顯 (圖4-h)。細胞之間緊密連接，胞核形狀較為規(guī)則，多為卵圓形 (圖 4-i)。

3 討論

鰓上皮主要包括鰓絲上皮和鰓小片上皮，鰓與外界環(huán)境進行氣體交換主要在鰓小片上皮進行[12]。魚類鰓上的線粒體豐富細胞大約只占鰓部細胞比例的8%左右，卻在滲透調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用[13-15]。魚鰓內(nèi)的線粒體豐富細胞在外界水環(huán)境鹽度發(fā)生變化時，主要通過細胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能的變化，以及各亞型之間發(fā)生可逆性轉(zhuǎn)變的結(jié)構(gòu)修改來適應(yīng)外界環(huán)境滲透壓變化，以維持自身的生存[8]。

3.1 鹽度驟變鰓的顯微結(jié)構(gòu)

本實驗將自然海水中馴養(yǎng)的金錢魚幼魚直接投入5鹽度組脅迫3 h，線粒體豐富細胞長徑和短徑顯著大于對照組，此時，線粒體豐富細胞體積增大，6 h后線粒體豐富細胞數(shù)量才顯著增加，鰓小片發(fā)生膨脹、增生，以及部分細胞脫落[16]，原因可能是外界環(huán)境滲透壓低于魚體內(nèi)滲透壓，通過線粒體豐富細胞體積的變化來適應(yīng)外界的鹽度變化，魚體也可能通過增加排尿量排出體內(nèi)多余的水分保持鹽分[17]。吳勇等[18]將細鱗魚刺 (Terapon jarbua) 幼魚投入鹽度5條件下，經(jīng)24 h的自身滲透壓調(diào)節(jié)后，其含水量基本恢復(fù)至原狀即滲透壓恢復(fù)平衡，本研究5鹽度組24 h后鰓絲形態(tài)較完整，此時可能處于滲透調(diào)節(jié)的主動修復(fù)階段。第96小時鰓絲與對照組差異不大，但是次級鰓小片明顯變長、變細，說明金錢魚幼魚通過鰓絲變長、變細，增大與水體的接觸面積，從而主動向水體中釋放離子，以此適應(yīng)低鹽環(huán)境。

高鹽脅迫3 h次級鰓小片直徑顯著增大，且鰓小片出現(xiàn)膨脹、增生、部分細胞脫落的現(xiàn)象，這與咸?？ɡ佐~ (Chalcalburnus chalcoides aralensis)[19]和大鱗鲃 (Barbus capito)[20]的研究結(jié)果相似。6 h后線粒體豐富細胞數(shù)量顯著增加，說明高滲環(huán)境下，金錢魚幼魚主要通過增加線粒體豐富細胞的面積和密度來適應(yīng)外界環(huán)境的鹽度變化[21]。李佳佳[22]將暗紋東方鲀 (Takifugu obscurus) 對于鹽度變化的適應(yīng)過程主要分為3個階段：1) 反應(yīng)階段，鹽度突變初期，隨著鹽度升高，暗紋東方鲀吞飲海水，血漿滲透壓迅速上升，刺激魚機體滲透調(diào)節(jié)生理機制發(fā)生改變；2) 主動調(diào)節(jié)階段，幼魚逐漸適應(yīng)鹽度突變后開始進行主動調(diào)節(jié)，伴隨著鰓絲和腎臟酶活性的升高，血漿離子和滲透壓開始回落；3) 適應(yīng)階段，經(jīng)過對鹽度突變的反應(yīng)和主動調(diào)節(jié)過程，幼魚開始適應(yīng)外界環(huán)境，其內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)逐漸趨向新的平衡。本實驗在鹽度突變24 h內(nèi)觀察比較對照組鰓絲變化，判斷此階段是金錢魚幼魚對外界環(huán)境反應(yīng)后開始主動調(diào)節(jié)階段，而后期在進行了一系列調(diào)節(jié)反應(yīng)后，開始適應(yīng)并趨向新的平衡。

3.2 鹽度驟變鰓的超微結(jié)構(gòu)

進入低鹽環(huán)境后，為適應(yīng)環(huán)境突變，分化出Ⅰ型線粒體豐富細胞、a型線粒體，可能是為了增大與外界環(huán)境的反應(yīng)面積，從而吸收水中的離子以維持內(nèi)外滲透壓平衡，為離子吸收型線粒體豐富細胞，但是隨著時間的延長，開始慢慢適應(yīng)低鹽環(huán)境，線粒體豐富細胞發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，分化出Ⅱ型線粒體豐富細胞、b型線粒體，有利于向外界分泌離子，為離子分泌型線粒體豐富細胞。此時，經(jīng)過適應(yīng)階段后，主要是由離子分泌型線粒體豐富細胞維持內(nèi)外滲透壓平衡。

吳貝貝[23]應(yīng)用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，高滲環(huán)境下，魚鰓的線粒體豐富細胞頂膜凹陷形成頂隱窩，細胞數(shù)量增加。本實驗在高鹽環(huán)境下由透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)線粒體豐富細胞具有頂端開口，且開口較深，內(nèi)凹形成頂隱小窩，細胞數(shù)量顯著增加，頂膜與外界環(huán)境接觸，促進離子分泌來適應(yīng)外界鹽度的改變[24-29]。高鹽環(huán)境下線粒體豐富細胞體積增大，細胞見溶解狀態(tài)[30]。但在高鹽環(huán)境下主要是Ⅱ型線粒體豐富細胞，細胞內(nèi)的線粒體數(shù)量較多，稱a型線粒體和b型線粒體，但主要是b型線粒體，可能由于在急性高滲脅迫環(huán)境下，魚體急需向外界分泌離子，從而增加了細胞與外界的接觸面積，通過線粒體形態(tài)的改變，促進離子分泌。隨著時間延長，經(jīng)過適應(yīng)反應(yīng)后，2種線粒體形態(tài)細胞共同存在以維持內(nèi)外滲透壓平衡，這可能與金錢魚本身生存的自然海水環(huán)境相關(guān)。

4 小結(jié)

顯微結(jié)果表明鹽度驟變24 h金錢魚幼魚鰓處于主動調(diào)節(jié)階段，透射電鏡結(jié)果表明鹽度驟變金錢魚幼魚能分化出海水和淡水2種適應(yīng)性線粒體豐富細胞。不管鹽度驟升還是驟降，金錢魚幼魚均會產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)機制，通過鰓上線粒體豐富細胞體積、數(shù)量、形狀結(jié)構(gòu)的變化，以及細胞內(nèi)線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化進行適應(yīng)性調(diào)節(jié)，不僅在滲透調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，維持自身的生存，也很好地說明了金錢魚是一種廣鹽性魚類，具有很強的耐鹽性。