醇類防腐劑對皮膚常駐菌的抑制作用

宋靜

（廣州廣曼生物科技有限公司，廣東廣州 510000）

皮膚微生物在保護(hù)機(jī)體免受病原體入侵、保護(hù)免疫系統(tǒng)和分解自然產(chǎn)物方面發(fā)揮著重要作用[1-3]。皮膚是人體最大的器官，是有益微生物的定植地，是防止病原體入侵的物理屏障。當(dāng)屏障被打破或當(dāng)常駐菌和病原體之間的平衡被打破時，就可能導(dǎo)致皮膚病甚至全身疾病[4-7]。皮膚常駐菌主要有瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、糠秕馬拉色菌和白色念珠菌[8]。

保證化妝品不被微生物污染的常規(guī)策略是添加防腐劑。為解決傳統(tǒng)防腐劑相對刺激性較大的問題，近年來一些更加溫和、安全的自防腐成分開始在化妝品業(yè)內(nèi)替代傳統(tǒng)防腐劑被廣泛使用，如醇類防腐產(chǎn)品。本文以兩種醇類防腐產(chǎn)品為研究對象，探究二者對皮膚常駐細(xì)菌瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌和皮膚常駐真菌糠秕馬拉色菌、白色念珠菌5種菌群的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株與樣品

痤瘡丙酸桿菌（GIM 1243）、表皮葡萄球菌（ATCC12228）、糠秕馬拉色菌（GIM 2.181）、白色念珠菌（ATCC10231）均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，廣東省微生物菌種保藏中心提供；干酪乳桿菌為自提取菌株，提取自養(yǎng)樂多活菌酸奶。

1,2-己二醇（純度≥99.89%）、1,2-戊二醇（純度≥99.87%），廣州廣曼生物科技有限公司。

1.2 試劑與儀器

胰蛋白胨大豆瓊脂、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，美國BD公司；腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基、MC培養(yǎng)基、改良SDA培養(yǎng)基、PBS溶液，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

Thermo恒溫培養(yǎng)箱，賽默飛；壓力蒸汽滅菌器，廈門致微儀器有限公司；生物安全柜，青島海爾；日本三菱C-31厭氧培養(yǎng)盒套裝，三菱瓦斯化學(xué)株式會社。

1.3 菌株的培養(yǎng)與計數(shù)

5種菌株的培養(yǎng)方法如表1所示，均采用平板法進(jìn)行計數(shù)。

1.4 試驗方法

吸取5.0 mL適當(dāng)濃度的1,2-己二醇或1,2-戊二醇水溶液、0.1 mL適當(dāng)濃度的菌懸液和5.0 mL雙料肉湯，加入20.0 mL試管中混勻。細(xì)菌菌懸液終濃度 1.0×106～9.0×106CFU/mL，真菌懸液終濃度1.0×104～9.0×104CFU/mL。1,2-己二醇或 1,2-戊二醇的終濃度為0.5%、1.0%和2.0%。在室溫（37 ℃）放置一定時間（6 h、12 h、24 h）后，每次取1 mL進(jìn)行菌落總數(shù)測定，使用PBS溶液進(jìn)行10倍系列稀釋，并選擇適宜的稀釋度樣液1.0 mL接種傾注相應(yīng)的培養(yǎng)基平板，每個稀釋度接種2個平板，按菌株特性選擇合適的溫度進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。以滅菌PBS溶液作為陰性對照，培養(yǎng)完成后進(jìn)行計數(shù)，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

1.5 抑菌效果評價標(biāo)準(zhǔn)

殺滅對數(shù)值：細(xì)菌數(shù)量減少的對數(shù)值，稱為殺滅對數(shù)值（結(jié)果保留至小數(shù)點后2位）。抑菌效果評價標(biāo)準(zhǔn)見表2。

2 結(jié)果與分析

1,2-己二醇對皮膚常駐菌的抑制作用見表3。由表3可見，0.50%～1.00%的1,2-己二醇在24 h內(nèi)對5種皮膚常駐菌未表現(xiàn)出任何抑制作用，并且不隨作用時間的延長而呈現(xiàn)正相關(guān)規(guī)律；當(dāng)濃度提高到2.00%時，表現(xiàn)出一定的抑制作用，并隨著作用時間的延長而呈現(xiàn)正相關(guān)趨勢，作用24 h最為明顯，尤其對痤瘡丙酸桿菌和白色念珠菌的抑制效果更為顯著。

表3 1,2-己二醇對皮膚常駐菌的抑制作用

1,2-戊二醇對皮膚常駐菌的抑制作用見表4。由表4可見，0.50%～1.00%的1,2-戊二醇在24 h內(nèi)對5種皮膚常駐菌未表現(xiàn)出任何抑制作用，并且不隨作用時間的延長而呈現(xiàn)正相關(guān)趨勢；當(dāng)濃度提高到2.00%時，作用6 h后對痤瘡丙酸桿菌出現(xiàn)明顯的抑制作用，作用24 h對干酪乳桿菌、白色念珠菌、糠秕馬拉色菌表現(xiàn)出抑制效果。

表4 1,2-戊二醇對皮膚常駐菌的抑制作用

目前，在全球市場中，微生物組學(xué)化妝品的開發(fā)主要是通過微生物直接或間接改善皮膚多種炎癥反應(yīng)、敏感肌等問題[9-10]，其中化妝品防腐作用產(chǎn)品備受關(guān)注。本研究使用多種皮膚常駐細(xì)菌和真菌分別測試醇類防腐劑的抑制效果，最大程度地模擬化妝品中防腐作用產(chǎn)品與皮膚常駐菌接觸的方式和時間，通過抑菌評價，真實反映了醇類防腐劑對皮膚微生態(tài)的影響。

3 結(jié)論

0.50%～1.00%的1,2-己二醇和1,2-戊二醇在24 h內(nèi)對皮膚常駐菌瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、白色念珠菌和糠秕馬拉色菌未表現(xiàn)出任何抑制作用；濃度提高到2.00%時，開始呈現(xiàn)出一定的抑制作用，但短時間內(nèi)（≤6 h）影響較小，因此建議在微生態(tài)配方中1,2-己二醇和1,2-戊二醇的單獨使用濃度控制在1.0%以內(nèi)，應(yīng)用到與人體接觸較短時間的產(chǎn)品（如面膜）中可以提高使用濃度或總含量。