山丹丹試管苗室內(nèi)移栽的研究

何亞蓉，毛 超，姜文磊，齊向英

(延安大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，陜西 延安 716000)

山丹丹學(xué)名山丹(Liliumpumilum.DC)，為百合科，百合屬多年生草本植物[1]。在延安地區(qū)分布的山丹丹一般株高30～40 cm。花于春末夏初開放，花下垂，花瓣向外反卷，色鮮紅，通常無斑點(diǎn)，具有極高的觀賞價(jià)值[2]。

通過組織培養(yǎng)快繁技術(shù)得到的山丹丹組培苗往往不能直接移栽到大田，室外煉苗或者大棚煉苗受季節(jié)影響比較大，本研究旨在通過對山丹丹組培苗煉苗過程中基質(zhì)的不同配比的研究，培育出移栽成活率高、籽球大、籽球葉片數(shù)多的山丹丹組培苗，為山丹丹組培苗室外移栽打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用材料為延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院組培與育種研究室培養(yǎng)的陜北野生山丹丹試管苗。經(jīng)過按齊向英等[3]篩選1/2MS+IBA 0.5 mg/L培養(yǎng)基培養(yǎng)35 d后準(zhǔn)備移栽。

1.1.1 基質(zhì)材料

草炭：草炭即泥炭，是沼澤發(fā)育過程中的產(chǎn)物。草炭土形成于第四紀(jì)，是沼澤植物的殘?bào)w，在多水的無氧條件下，無法完全分解堆積而成。含有大量水分和未被徹底分解的植物殘?bào)w、腐殖質(zhì)以及一部分礦物質(zhì)。

蛭石：作為一種植物生長劑和土壤調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的保水性能。用于溫室大棚內(nèi)，具有疏松土壤、透氣性好、吸水力強(qiáng)和溫度變化小等特點(diǎn)，有利于作物的生長，還可減少肥料的投入[4]。

珍珠巖：土壤改造，調(diào)節(jié)土壤板結(jié)，防止農(nóng)作物倒伏，控制肥效和肥度，以及作為殺蟲劑和除草劑的稀釋劑和載體。

1.1.2 試驗(yàn)儀器

立式壓力蒸汽滅菌器(LDZX-75KBS，上海申安醫(yī)療器械廠)。凈化工作臺(SW-CJ-1F，蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9053A，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)。生化培養(yǎng)箱(LRH-150，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)。智能人工氣候箱(PRX-150B，寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠)。超聲波清洗機(jī)(SB-5200DT，寧波新芝生物科技有限公司)。

1.2 基質(zhì)配比

根據(jù)草炭、珍珠巖、蛭石體積比的不同試驗(yàn)共設(shè)計(jì)9個(gè)配方，見表1。

表1 不同基質(zhì)配比

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，激素含量為IBA 0.5 mg/L并附加白砂糖20 g/L，瓊脂5.5 g/L，pH均為6.5～6.8。所有培養(yǎng)基均是在1.1 kg/cm2，121℃飽和立式壓力蒸汽滅菌器下滅菌30 min。

接種后先在暗環(huán)境中培養(yǎng)7 d，然后再轉(zhuǎn)移到光照強(qiáng)度為1500～2000 Lx，光照時(shí)間為12 h/d，溫度為(24±2)℃的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。生根培養(yǎng)階段均置于光照為12 h/d，光照強(qiáng)度1500～2000 Lx，培養(yǎng)溫度控制在(24±2)℃，相對濕度60%～75%的條件下光照培養(yǎng)室培養(yǎng)。

1.3.2 生根移栽時(shí)間判斷

在1.3.1的條件下連續(xù)培養(yǎng)，待到所有接種試管苗中有85%以上的單個(gè)籽球根的長度達(dá)到3 cm，生根數(shù)量達(dá)到3條以上時(shí)，準(zhǔn)備開始移栽。

1.3.3 移栽

移栽前需在室溫下打開瓶口，煉苗2～3 d，以使小苗逐漸適應(yīng)外界環(huán)境[5]。將經(jīng)過煉苗處理的山丹丹試管苗小心地從瓶中倒出，用清水洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，以簇生小鱗莖為單位深度3 cm栽植于營養(yǎng)缽中[6，7]，栽種時(shí)將種球扶正，根部用基質(zhì)壓實(shí)，上覆基質(zhì)，深度為掩埋至種球上部，栽后澆水，并噴灑70%百菌清可濕性粉劑800倍稀釋+72%農(nóng)用鏈霉素3000倍稀釋混合液，防治猝倒病及立枯病[8]。

設(shè)計(jì)9種移栽基質(zhì)配方(見表1)，每個(gè)配方處理移栽個(gè)數(shù)為32～55株，置于人工氣候培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，設(shè)置溫度為23℃～25℃，箱內(nèi)濕度為85%，每隔7 d每個(gè)營養(yǎng)缽中加蒸餾水10 mL，觀察葉片生長情況，60 d后統(tǒng)計(jì)成活率，籽球的生長大小以及籽球葉片數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 組培苗的生長情況

2.1.1 組培苗成活率分析

從表2可知，采用處理組合6、7、8三組配方獲得的組培苗成活率最高，都達(dá)到了100%的成活率，而組合1的成活率最低只有90.2%，通過后續(xù)試驗(yàn)中對各因素的分析來確定山丹丹移栽過程中煉苗的最佳基質(zhì)配比。

表2 栽培數(shù)與成活數(shù)對比表

2.1.2 不同配方的籽球生長大小情況

對各配方中的籽球生長大小觀察與測定，結(jié)果見表3。

表3 不同配方的籽球生長大小正交試驗(yàn)

通過直觀分析可以看出RA=0.06，RB=0.04，RC=0.08，故因素的主次為RC>RA>RB即蛭石>草炭>珍珠巖，即蛭石的投加量的變化對山丹丹籽球的生長影響較大，其次是草炭，珍珠巖對山丹丹籽球生長影響最小。從9個(gè)處理組合的直觀分析結(jié)果中得出：第6個(gè)組合和第7個(gè)組合的效果最好，籽球的平均大小都為0.36，但各因子的不同水平對山丹丹籽球生長情況的影響大小是A2>A3>A1，B3>B1>B2，C1>C3>C2，因此最佳組合是A2B3C1，即最佳配方的配比是草炭：珍珠巖：蛭石=2∶3∶1。

2.1.3 不同配方的籽球葉片生長狀況

對各配方中的籽球葉片生長情況進(jìn)行觀察與統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表4。

表4 不同配方的籽球葉片生長個(gè)數(shù)正交試驗(yàn)

從表4直觀分析可以看出RA=0.22，RB=0.16，RC=0.31，故因素的主次為RC>RA>RB即蛭石>草炭>珍珠巖，即蛭石的投加量的變化對山丹丹籽球的生長影響較大，其次是草炭，珍珠巖對山丹丹籽球葉片生長影響最小。從9個(gè)處理組合的直觀分析結(jié)果中得出：第6個(gè)組合的效果最好，籽球的平均葉片個(gè)數(shù)為5.62，但各因子的不同水平對山丹丹籽球葉片的生長情況的影響大小是A2>A3>A1，B3>B2>B1，C1>C2>C3，因此最佳的組合是A2B3C1，即最佳配方的配比是草炭：珍珠巖：蛭石=2∶3∶1。

3 討論與結(jié)論

移栽基質(zhì)的選擇是整個(gè)組培苗煉苗過程中非常重要的一步[9]。移栽基質(zhì)的透氣性、保濕性、酸堿度和營養(yǎng)等因子對誘發(fā)新根及成活起著非常關(guān)鍵的作用。山丹丹組培苗移栽試驗(yàn)結(jié)果表明，常規(guī)的珍珠巖、草炭和蛭石的配比，基質(zhì)的各項(xiàng)指標(biāo)在合適的范圍，植物均可生長，在此次試驗(yàn)中，移栽基質(zhì)采用了9種組合配方，而草炭：珍珠巖：蛭石=2∶3∶1為最佳，移栽成活率達(dá)到100%，組培苗的籽球大小最大可達(dá)0.36 cm，籽球葉片數(shù)多達(dá)5.62個(gè)。從籽球葉片數(shù)和籽球大小的正交表中可以看出，蛭石是影響山丹丹生長的主要因素，草炭次之，珍珠巖對山丹丹的影響最小。蛭石保水性強(qiáng)，透氣性好；珍珠巖保水性差且無營養(yǎng)，易使試管苗缺水、缺營養(yǎng)而死亡，草炭營養(yǎng)豐富作為山丹丹移栽中的基質(zhì)，具有發(fā)根快，緩苗時(shí)間短的特點(diǎn)，草炭+珍珠巖+蛭石的組合既保水又透氣還有營養(yǎng)，最有利于山丹丹的生根，成活率可達(dá)100%。陳麗娜等[10]在研究雜交百合的移栽技術(shù)過程中使用的栽培基質(zhì)也是草炭+蛭石+珍珠巖的混合基質(zhì)培養(yǎng)效果明顯好于單個(gè)基質(zhì)的使用。辛培堯[11]對滇楊組培苗移栽基質(zhì)篩選的研究以及符少萍等[12]對木薯試管苗移栽基質(zhì)篩選的研究中都表明：疏松性、透氣性好的基質(zhì)有利于組培苗成活和生長，這與本研究的結(jié)論一致。

有研究表明[13]，根系長勢較長的組培苗，剛從瓶中移出時(shí)長得較健壯，但會(huì)因此導(dǎo)致其對基質(zhì)的適應(yīng)能力降低，抗逆性變差，從而導(dǎo)致其根系損傷和腐爛。因此，應(yīng)該選擇在植株的根系不太長時(shí)進(jìn)行移栽，這對其適應(yīng)新的環(huán)境較有利，并且較好的生根培養(yǎng)基還可以縮短其生根時(shí)間。