孫亞美 程曉波 侯繼祥 張 丹 趙博冊 林佳亮 李 煒 沈麗霞吳翠栓 張 強

1.北京德立福瑞醫(yī)藥科技有限公司，北京，102100，中國

2.河北北方學(xué)院，張家口，075000，中國

3.北京大學(xué)，北京，100000，中國

蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）是常見的腦血管疾病，屬于神經(jīng)科中常見的多發(fā)疾病之一［1-2］。SAH 病理生理學(xué)復(fù)雜，病情進展快，并發(fā)癥多，臨床轉(zhuǎn)歸復(fù)雜，死亡率高［3］。腦血管痙攣（cerebral vasospasm，CVS）是蛛網(wǎng)膜下腔出血的嚴重并發(fā)癥之一［4-5］，也是SAH 致死、致殘的主要病因［6-7］，所以防治CVS 是改善蛛網(wǎng)膜下腔出血預(yù)后的關(guān)鍵。

尼莫地平屬于1，4-二氫吡啶類的鈣離子拮抗劑［8］，能有效地預(yù)防和治療蛛網(wǎng)膜下腔出血引起的CVS［9］，是SAH 緩解和預(yù)后的最佳藥物之一［10］，在臨床上被廣泛應(yīng)用并取得了良好的臨床療效［11］。尼莫地平注射液由德國拜耳公司率先研發(fā)成功，由于其注射劑型起效快，在臨床上的應(yīng)用更為廣泛。但是現(xiàn)有市售尼莫地平注射液（尼膜同）存在一定的不足：處方中含有大量的乙醇作為助溶劑，乙醇直接入血管，會造成血管刺激性及注射疼痛，患者順應(yīng)性低［12-13］。另外，乙醇與頭孢菌素類或硝基咪唑類等藥物聯(lián)用時會導(dǎo)致雙硫侖樣的不良反應(yīng)［14］。所以研發(fā)無乙醇型的尼莫地平注射液臨床意義重大。

本文通過自組裝技術(shù)成功制備了不含乙醇的注射用尼莫地平注射液，為了評價尼莫地平注射液（無乙醇型）的安全性，對比研究了尼莫地平注射液（無乙醇型）和市售尼莫地平注射液對家兔的血管刺激性反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

24 只大耳家兔（SPF 級），體質(zhì)量（2～3）kg，北京金牧陽實驗動物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司。

1.2 試劑與藥物

供試品：尼莫地平注射液（無乙醇型），批號：2020121701，濃度：10 mg·mL-1，購自北京德立福瑞醫(yī)藥科技有限公司；供試品制劑配制：用100 mL 的5%葡萄糖注射液稀釋混勻，稀釋為0.2 mg·mL-1的濃度；對照品：市售尼莫地平注射液（商品名：尼膜同?，規(guī)格：50 mL·10 mg-1，產(chǎn)品批號：BXJC7A1，購自拜耳醫(yī)藥保健有限公司；對照品試劑配制：給藥前將其用5%葡萄糖注射液稀釋至尼莫地平濃度為0.2 mg·mL-1；陰性對照品：5%葡萄糖注射液，批號：E19040801，購自山東華魯制藥有限公司；空白制劑，批號：2020121601，購自北京德立福瑞醫(yī)藥科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 給藥方案

將家兔隨機分為4 組，每組6 只。四組分別為市售尼莫地平注射液組（A 組）、尼莫地平注射液（無乙醇型）組（B 組）、空白制劑組（C 組）和5%葡萄糖注射液組（D 組），具體見表Tab.1。

Tab.1 Experimental design of vascular irritation in rabbits

兔子體質(zhì)量在2～3 kg 之間，分別用兔架固定，剪去耳緣的兔毛，酒精消毒，將市售尼莫地平注射液、本發(fā)明的尼莫地平注射液（無乙醇型）、空白制劑、5% 葡萄糖注射液分別通過耳緣靜脈滴注對家兔給藥，每只兔子均從右耳緣靜脈緩慢注射給藥。尼莫地平家兔給藥劑量為0.47 mg·kg-1。每天給藥1 次，連續(xù)給藥7 天，每天給藥前和最后一次給藥后48 h，目測觀察。在最后一次目測觀察后將動物安樂死，剪取注射部位及附近處兔耳，HE 染色，進行局部組織病理學(xué)檢查。

1.3.2 檢測指標(biāo)

1.3.2.1 目測觀察指標(biāo) 觀察家兔狀況是否良好、家兔耳緣靜脈血管是否擴張、周圍組織是否充血、水腫。

1.3.2.2 病理學(xué)觀察指標(biāo) 末次給藥后48 h，剖檢觀察各組動物給藥側(cè)兔耳，血管壁是否紅腫、變性、變黑，是否有血栓形成、管壁增生、炎癥細胞浸潤、內(nèi)皮細胞變性壞死、周圍組織水腫等病理改變。

按Tab.2 中所示的“血管剖檢評分標(biāo)準(zhǔn)”對每只動物進行評分。

Tab.2 Vascular autopsy scoring criteria

將同組中的動物的評分求平均值，按照Tab.3 標(biāo)準(zhǔn)確定刺激等級。

Tab.3 Stimulus levels

2 結(jié)果

2.1 目測觀察結(jié)果

實驗期間，各組家兔飲食飲水，行為活動、體溫、呼吸、皮毛、口、鼻、眼和糞便等一般狀況良好，均未見異常。所有動物耳部于給藥前未見明顯異常。

2.2 組織病理學(xué)顯微照片

組織病理學(xué)結(jié)果表明，市售尼莫地平注射液組（A組，F(xiàn)ig.2）動物全耳嚴重水腫，血管擴張，局部出血嚴重，表皮可見一處明顯的化膿壞死灶，血管周疏松水腫的結(jié)締組織間可見大量嗜中性粒細胞、淋巴細胞等炎性細胞浸潤；尼莫地平注射液（無乙醇型）組（B 組，F(xiàn)ig.3）動物給藥側(cè)兔耳整體完好，只有少量的輕度充血和腫脹，未見其他明顯異常?？瞻字苿┙M（C 組，F(xiàn)ig.4）動物給藥側(cè)兔耳少量充血，血管壁及管周輕微水腫；5%葡萄糖注射液組（D 組，F(xiàn)ig.5）的動物兔耳表皮完整，可見完好的毛囊及皮脂腺結(jié)構(gòu)，5%葡萄糖注射液滴注給藥對兔耳基本沒有刺激性。

Fig.1 Normal rabbit ears

Fig.2 Nimodipine injection group

Fig.3 Nimodipine injection（ethanol-free type）group

Fig.4 Control group

Fig.5 5% glucose injection group

各組動物刺激等級結(jié)果見Tab.4。由結(jié)果可知，自制的不含乙醇的尼莫地平注射液對血管的刺激性顯著小于市售含有乙醇的尼莫地平注射液，具有極為明顯的優(yōu)勢，刺激性明顯減小。

Tab.4 Vascular irritation results

4 討論

血管刺激性試驗是用于評估注射劑安全的重要指標(biāo)。尼莫地平難溶于水，原研制劑（尼膜同?）處方中加入了大量具有毒副作用的助溶劑乙醇，臨床應(yīng)用過程出現(xiàn)較多的不良反應(yīng)，患者順應(yīng)性差。乙醇直接入血管，會產(chǎn)生強烈的血管刺激及注射疼痛，且反復(fù)多次的注射其靜脈炎發(fā)生率可達90%，同時還可引起不同程度的組織水腫［13］，進而導(dǎo)致患者順應(yīng)性低。乙醇入血管還會引起體內(nèi)血清胱抑素C（serum cystatin C，Cys C）、高半胱氨酸（homocysteine，Hcy）和氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）濃度增高，引發(fā)一系列心血管疾?。?5］。乙醇與頭孢菌素類和硝基咪唑類等藥物聯(lián)用時極可能導(dǎo)致雙硫侖樣不良反應(yīng)的發(fā)生。乙醇對蛙心還具有負性肌力的作用［16］。此外，乙醇還可引起女性中樞神經(jīng)遞質(zhì)異常釋放，影響女性生殖、生育功能及其子代易發(fā)生先天畸形［17］。乙醇對人體的部分系統(tǒng)和器官也有一定的損害。而在本次動物實驗結(jié)果中也清楚表明市售尼莫地平注射液有明顯的血管刺激性反應(yīng)，兔耳血管潰爛不堪。

尼莫地平注射液（無乙醇型）幾乎沒有血管刺激性，說明該制劑靜脈注射安全性良好。與市售尼莫地平注射液相比，尼莫地平注射液（無乙醇型）去掉了處方中的乙醇可以減少血管刺激性，消除雙硫侖不良反應(yīng)的風(fēng)險，提高患者的順應(yīng)性，可明顯改善現(xiàn)有市售尼莫地平注射液臨床應(yīng)用中存在的乙醇帶來的刺激性、過敏性等問題，可向患者提供一個安全、有效的尼莫地平新型制劑，更好地保障患者的用藥權(quán)益。

動物實驗結(jié)果清楚的表明含乙醇的尼莫地平注射液刺激性遠遠大于不含乙醇的尼莫地平注射液的刺激性，由此推廣到現(xiàn)有市售含乙醇的注射液在臨床應(yīng)用上同樣會出現(xiàn)類似的問題，所以開發(fā)對應(yīng)的不含乙醇的制劑，逐步降低藥源性不良反應(yīng)的發(fā)生率，更好地保障患者的用藥權(quán)益意義重大。無乙醇的創(chuàng)新制劑將會是未來發(fā)展的一個趨勢。