金標(biāo)法抗-SARS-CoV-2IgM和IgG抗體試劑系統(tǒng)對N和S蛋白檢測有效性研究

李勝濤 曹紅 彭小友 黃紅娟 徐玉娟

摘要：目的 ?探究使用金標(biāo)法測量嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2 （SARS-CoV-2）血清抗-SARS-CoV-2 IgM和IgG 抗體的有效性。方法 ?檢測了26例2019冠狀病毒?。–OVID-19） PCR陽性患者、53例2019冠狀病毒病疑似但PCR陰性患者以及20例和100例隨機抽取的非2019冠狀病毒病患者血清中抗SARS-CoV-2 IgM和IgG滴度。結(jié)果 ?該檢測系統(tǒng)能夠成功檢測SARS-CoV-2 IgM/IgG。在對111份已知含有自身抗體的血清樣本進行評估時，我們觀察到IgM檢測有4例假陽性，IgG檢測無假陽性?？贵w檢測與PCR檢測的符合率分別為98.1%和100%，PCR檢測陰性病例SARS-CoV-2 IgM和IgG符合率分別為30.8%和73.1%。結(jié)論 ?該方法可用于SARS-CoV-2病毒N蛋白和S蛋白抗體的自動檢測，且可用于實驗室檢測。

關(guān)鍵詞：新型化學(xué)發(fā)光法;IgM和IgG;N和S蛋白

【中圖分類號】Q511 ?【文獻標(biāo)識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）06-143-01

2019年12月，中國武漢發(fā)現(xiàn)首例由未知微生物引起的肺炎病例。目前，COVID-19的診斷依據(jù)為患者的臨床表現(xiàn)，并通過實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）在呼吸道標(biāo)本，如鼻拭子或痰中檢測SARS-CoV-2 RNA。與PCR檢測相比，該血清學(xué)檢測方法周轉(zhuǎn)時間更快，采集樣本更容易、更安全，技術(shù)人員的專業(yè)技能更低[1];此外，當(dāng)我們根據(jù)COVID-19發(fā)病后的時間來解釋抗體檢測結(jié)果時，該檢測將為我們診斷COVID-19提供重要信息。抗體測試的主要問題是假陽性病例的高頻率。因此，本研究旨在驗證血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體的檢測方法，并探討該方法在COVID-19診斷中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 患者資料

收集COVID-19陽性病例26例和COVID-19疑似病例53例。COVID-19確診病例是根據(jù)中國新冠的指南診斷。隨機選取2020年3月或2017年1～12月在我院就診且無自身免疫性疾病的門診患者20例和100例作為對照組。

1.2 ?抗體檢測

抗體檢測采用SARS-CoV-2 IgM和IgG金標(biāo)法免疫分析試劑盒和iFlash3000全自動分析儀。將SARS-CoV的核衣殼蛋白[N蛋白]和刺突蛋白[S蛋白]包覆在磁珠上。用吖啶標(biāo)記的抗人IgM或IgG偶聯(lián)抗體檢測結(jié)合到珠子上的抗體。SARS-CoV-2 IgM/IgG陽性的臨界值為10AU/mL。如果SARS-CoV-2 IgG滴度大于40 AU/mL，則用無反應(yīng)血清稀釋后再次測定抗體滴度。為了與已建立的抗SARS-CoV-2抗體測試相比較，使用羅氏公司（Roche）的抗SARS-CoV-2電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）試劑盒，測量了從COVID-19陽性或疑似患者收集的385份血清樣本

1.3 ?統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，使用t檢驗進行分析。計數(shù)數(shù)據(jù)以百分比（%）或例數(shù)（n）表示，使用2檢驗進行分析，P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?抗體檢測的準(zhǔn)確度和精度

金標(biāo)法檢測的SARS-CoV-2 IgM范圍在1.90%～2.13%，精度從2.48%降至4.08%的，重復(fù)性SARS-CoV-2免疫球蛋白范圍從1.03%到1.65%，精度從1.87%到2.17%。實驗室內(nèi)SARS-CoV-2 IgG的精密度為3.12 ～ 5.13%。

2.2 ?SARS-CoV-2抗體檢測能力

為評價SARS-CoV-2 IgM/IgG的檢測能力，我們測定了LoB和LoD。SARS-CoV-2 IgM檢測的LoD為0.74 AU/mL，LoB為0.63 AU/mL。SARS-CoV-2 IgG抗體120次測定的LoD為0.53 AU/mL， LoB為0.47 AU/mL。我們檢測了7份SARS-CoV-2 IgM抗體水平較低的樣本和10份SARS-CoV-2 IgG樣本。在兩種檢測中，低于LoD的樣品的CV均不超過10%。因此，SARS-CoV-2 IgM檢測限為0.74 AU/mL， SARS-CoV-2 IgG檢測限為0.53 AU/mL。

3 ?討論

金標(biāo)法是一種較為先進的體外診斷手段，其具有較高的靈敏性與特異性，操作簡便、快捷，檢測準(zhǔn)確率較高[2]。其只根據(jù)特制的檢驗盒于較短時間內(nèi)就可以獲得檢測結(jié)果，主要操作步驟為抽血以后滴在試紙上，放置20 min后對此試紙是否有顏色變化予以認真觀察，倘若存在顏色變化，初步檢測為陽性。此種檢測方法在醫(yī)院或多數(shù)患者均較適用，具有操作方便、快捷的特點，檢測結(jié)果快速、準(zhǔn)確。酶聯(lián)法就是按照酶免疫測定原理改良的新型技術(shù)，其主要分為雙抗原夾心法、間接法以及抗體競爭法三類。現(xiàn)階段，國內(nèi)與國外通常采用第3代雙抗原夾心法試劑。主要檢測流程為：將加入酶反應(yīng)的底物后，底物受到酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物和標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量具有密切聯(lián)系，因此，可以按照顏色反應(yīng)深淺予以刊物定性或定量分析。因為酶催化頻率相對較高，因此，可使反應(yīng)效果顯著放大，進而促使檢測方法的敏感度明顯提高 [3]。金標(biāo)法的反應(yīng)速度較快，不需要采用特殊的儀器與花費大量時間獲得檢測結(jié)果。利用金標(biāo)法能夠?qū)⒓痹\中遇到的此種情況有效解決，使治療醫(yī)師對患者的病情充分掌握。

總之，我們已經(jīng)驗證了一種使用CLIA試劑盒檢測SARS-CoV-2 IgM和IgG的測量系統(tǒng)，并觀察到該系統(tǒng)具有足夠的診斷性能用于臨床實驗室檢測。

參考文獻：

[1] ?Lu R， Zhao X， Li J， et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus： implications for virus origins and receptor binding. Lancet. 2020; 395： 565-574.

[2] ?Zhu N， Zhang D， Wang W， et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China， 2019. N Engl J Med. 2020; 382： 727-733.

[3] ?Guan W， Ni Z， Hu Y， et al. Clinical Characteristics of Coronavirus Disease 2019 in China. N Engl J Med. 2020; 382： 1708-1720.

第一作者簡介：李勝濤，性別：男;出生年月1978.11，籍貫：湖南郴州;民族：漢;職稱：副主任技師;學(xué)歷：碩士研究生;研究方向：檢驗

通訊作者簡介：徐玉娟，性別：女;出生年月1986.07，籍貫：湖南郴州;民族：漢;職稱：主管技師;學(xué)歷：碩士研究生;研究方向：檢驗

郴州市第一人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心 ?湖南郴州 ?423000

基金：級別：郴州市科學(xué)技術(shù)局基金

編號：ZDF2020017

名稱：COVID-19 IgG-IgM抗體快速聯(lián)合檢測試劑條的研究