楊速，操勇清，李海英，盧立志，李國(guó)勤，曾濤，陳黎，黃希東，沈軍達(dá)，陶爭(zhēng)榮，田勇*

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；4.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；5.拜城縣牧村拜城油雞原種保護(hù)場(chǎng)，新疆 拜城 842314)

我國(guó)地大物博，不同的自然環(huán)境、社會(huì)經(jīng)濟(jì)條件和地區(qū)文化馴化出各具特色的地方雞品種，2012年《中國(guó)畜禽遺傳資源志·家禽志》中收集了189個(gè)家禽品種，其中有116個(gè)雞品種，農(nóng)業(yè)部最新公布的國(guó)家保護(hù)名錄中包含28個(gè)雞品種[1]。眾多的雞品種滿足了人們多樣的生活需要，如雞肉、雞蛋的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，特殊品種的藥用價(jià)值，雞毛制品的實(shí)用價(jià)值以及羽毛和斗雞的觀賞價(jià)值。但隨著人們對(duì)畜禽產(chǎn)品需求的增加，一味地提高生產(chǎn)效益，引入外來(lái)品種(如來(lái)航雞、星布羅肉雞等[2])與本地雞種雜交，導(dǎo)致遺傳資源的污染，甚至一些地方品種的滅絕[3]。禽類遺傳資源是不可再生的寶貴資源，是家禽業(yè)可持續(xù)發(fā)展的根基。國(guó)家和地方政府正在積極出臺(tái)禽類遺傳資源的保護(hù)政策，對(duì)我國(guó)地方雞品種種質(zhì)特性和遺傳資源的評(píng)估和保護(hù)十分重要。

拜城油雞原產(chǎn)于新疆阿克蘇地區(qū)，是我國(guó)珍品油雞禽品種資源之一，為肉蛋兼用型。其具有肉味鮮美、骨細(xì)肉多、抗病力強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn)。因皮膚和肌肉間有一層很薄的脂肪且散發(fā)出特殊的香味而得名油雞[4]。此外，雞皮中還含有多種脂質(zhì)成分，包括磷脂、鞘磷脂、酰脂等，能夠預(yù)防多種心腦血管疾病，促進(jìn)新陳代謝[5-6]。本研究對(duì)300日齡拜城油雞體重、體尺和蛋品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)采用微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行遺傳學(xué)分析，擬從種質(zhì)特性和遺傳多樣性角度對(duì)拜城油雞進(jìn)行評(píng)估，為拜城油雞的保種育種提供參考資料和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

拜城油雞及雞蛋由拜城縣牧村拜城油雞原種保護(hù)場(chǎng)提供。

1.2 體尺性狀測(cè)定

隨機(jī)選取300日齡拜城油雞公母各30只，測(cè)量指標(biāo)包括體重、體斜長(zhǎng)、龍骨長(zhǎng)、胸寬、胸深、盆骨寬、脛長(zhǎng)和脛圍8項(xiàng)體尺指標(biāo)。以上所有指標(biāo)均參照NY/T 823—2004《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》[7]進(jìn)行。

1.3 蛋品質(zhì)測(cè)定

取300日齡拜城油雞雞蛋45枚，測(cè)量其蛋重、蛋黃色澤、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、哈氏單位和蛋殼厚度6項(xiàng)指標(biāo)。測(cè)量?jī)x器包括多功能蛋品質(zhì)測(cè)定儀、蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀、蛋殼厚度測(cè)定儀和游標(biāo)卡尺。

1.4 PCR程序與測(cè)序

1.4.1 血樣采集

隨機(jī)選取100只拜城油雞進(jìn)行翅下靜脈采血，用含乙二胺四乙酸(EDTA)真空采血管進(jìn)行封裝，置于-20 ℃保存，用于DNA提取。

1.4.2 DNA提取與檢測(cè)

使用杭州新景公司生物試劑開(kāi)發(fā)有限公司的全血DNA小量提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度(D260/280)和濃度。

1.4.3 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增

使用Premier 5.0進(jìn)行用于基因多態(tài)性檢測(cè)的引物設(shè)計(jì)或?qū)ο嚓P(guān)文獻(xiàn)中引物進(jìn)行篩選，優(yōu)先選擇多態(tài)性高、核心序列重復(fù)次數(shù)多的位點(diǎn)，部分引物序列參考黃玲玲的研究[8]。最終使用28對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增(表1)。引物交由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

表1 28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)PCR擴(kuò)增引物

PCR擴(kuò)增程序參考操勇清等[9]的方法，PCR循環(huán)條件：預(yù)變性3 mim，95 ℃；變性20 s，94 ℃，退火20 s，58 ℃，延伸40 s，72 ℃，35個(gè)循環(huán)；修復(fù)延伸5 mim，72 ℃。采用ABI 3730XL DNA分析儀對(duì)含熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，參照劉雅麗等[10]的方法進(jìn)行。PCR產(chǎn)物由上海杰瑞生物工程有限公司進(jìn)行DNA直接測(cè)序。

1.5 統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel對(duì)拜城油雞體尺和蛋品質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理，IBM SPSS 21獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行體尺差異比較，結(jié)果采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用POPGENE 1.32對(duì)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行有效等位基因和雜合度計(jì)算，LittlePrograme 0.6計(jì)算多態(tài)信息含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 體尺

拜城油雞公雞的體重、體斜長(zhǎng)、龍骨長(zhǎng)、胸寬、胸深、盆骨寬、脛長(zhǎng)和脛圍8項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于母雞，公雞體重比母雞高24.35%，在體型上，公雞與母雞存在明顯差異(表2)。

表2 300日齡拜城油雞體尺測(cè)定

2.2 蛋品質(zhì)

本研究測(cè)定了拜城油雞蛋重、蛋黃色澤、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、哈氏單位和蛋殼厚度6項(xiàng)蛋品質(zhì)指標(biāo)(表3)。

表3 拜城油雞及其他雞蛋品質(zhì)

2.3 遺傳參數(shù)分析

本試驗(yàn)利用微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)對(duì)拜城油雞進(jìn)行了多個(gè)遺傳多樣性參數(shù)統(tǒng)計(jì)，28微衛(wèi)星位點(diǎn)中，ADL136位點(diǎn)有效等位基因、雜合度和多態(tài)信息含量均最高，分別為8.12、0.83和0.81(表4)。除上述3個(gè)指標(biāo)均為0的MCW294位點(diǎn)外，ADL201位點(diǎn)多態(tài)性最低，有效等位基因、雜合度和多態(tài)信息含量分別為0.96、0.06和0.05。28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中，23個(gè)位點(diǎn)為高度多態(tài)位點(diǎn)(多態(tài)信息含量>0.5)，4個(gè)位點(diǎn)為中度多態(tài)位點(diǎn)(多態(tài)信息含量0.25～0.5)，1個(gè)位點(diǎn)未顯示出多態(tài)性，平均多態(tài)信息含量為0.57，整體表現(xiàn)為高度多態(tài)。

表4 拜城油雞各基因位點(diǎn)遺傳多態(tài)性

3 小結(jié)與結(jié)論

3.1 體重體尺

體重體尺是家禽育種過(guò)程中重要的參考指標(biāo)，不僅可以衡量家禽的生長(zhǎng)發(fā)育程度和群體的均勻度[14]，還直接或間接影響家禽的生產(chǎn)性能[15]。本試驗(yàn)表明，拜城油雞的體重體尺存在性別差異，公雞體重體尺8項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于母雞。鄧雨英等[16]、李俊營(yíng)等[17]分別對(duì)黃麻羽雪峰烏骨雞和黃山黑雞進(jìn)行體重體尺測(cè)定，同樣表明公雞各項(xiàng)指標(biāo)均高于母雞。說(shuō)明公雞更具生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)將公母區(qū)別飼喂，充分發(fā)揮公雞的生長(zhǎng)潛能。拜城油雞的體重高于藏雞[18]、絲羽烏骨雞[19]、烏蒙鳳雞[20]，與宮廷黃雞[12]相當(dāng)，但小于浦東雞[21]，同時(shí)體尺各項(xiàng)指標(biāo)也有不同程度的差異，而不同品種間體型外貌差異的決定性因素是遺傳基礎(chǔ)。整體而言，拜城油雞屬于體型較大的雞品種。

3.2 蛋品質(zhì)

禽類蛋品質(zhì)是一個(gè)綜合指標(biāo)，不僅影響?zhàn)B禽業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，也與禽類繁殖性能密切相關(guān)[22]。蛋品質(zhì)主要包括蛋重、蛋黃色澤、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼厚度等指標(biāo)。蛋重是消費(fèi)者在挑選雞蛋過(guò)程中最直觀的指標(biāo)，有研究表明，蛋重對(duì)繁殖力和總孵化率有顯著影響[23]，且在一定范圍內(nèi)，蛋重與孵化率呈正相關(guān)[24]。拜城油雞蛋重52.09 g，高于南丹瑤雞和廣西麻雞[25]，但低于宮廷黃雞和羅曼雞。楊寧[26]研究表明，蛋形指數(shù)最好為1.35，本研究顯示，拜城油雞的蛋形指數(shù)與該值接近。蛋殼強(qiáng)度與蛋殼厚度會(huì)影響蛋在運(yùn)輸加工過(guò)程中的破損率，拜城油雞蛋殼強(qiáng)度和厚度大于白來(lái)航雞、宮廷黃雞和羅曼雞，可以保證在運(yùn)輸加工過(guò)程中有較低的破損率。哈氏單位是衡量雞蛋新鮮程度的指標(biāo)，哈氏單位越高表示蛋越新鮮。本研究中，拜城油雞哈氏單位為55.32，明顯低于白來(lái)航雞、宮廷黃雞和羅曼雞，這可能是檢測(cè)前存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的緣故。蛋黃顏色是影響消費(fèi)者選擇偏好的性狀之一，顏色越深越受消費(fèi)者青睞。研究表明，蛋黃顏色與母雞不同產(chǎn)蛋階段有關(guān)[27]。拜城油雞蛋黃顏色為9.28，蛋黃顏色較深，符合消費(fèi)者消費(fèi)偏好。

3.3 遺傳多樣性

群體的遺傳多樣性是指群體內(nèi)所有個(gè)體的遺傳變異總和。一個(gè)群體的遺傳多樣性越豐富，表明該群體適應(yīng)環(huán)境變化的能力越強(qiáng)，即進(jìn)化的潛力越大[28]。有效等位基因是反映群體遺傳變異大小的指標(biāo)，能較好地反映群體中起作用的基因數(shù)，其值越大則遺傳多樣性越高。雜合度即基因的多樣性，指某個(gè)位點(diǎn)雜合子所占的比例[29]。多態(tài)信息含量可直接反映位點(diǎn)的多態(tài)性，多態(tài)信息含量>0.5的位點(diǎn)為高度多態(tài)信息位點(diǎn)，0.25<多態(tài)信息含量<0.5的位點(diǎn)為中度多態(tài)信息位點(diǎn)，多態(tài)信息含量<0.25的位點(diǎn)為低度多態(tài)信息位點(diǎn)。莫國(guó)東等[30]對(duì)廣西三黃雞進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記分析，共檢測(cè)到144個(gè)等位基因，平均有效等位基因數(shù)為3.58，18個(gè)位點(diǎn)中15個(gè)為高度多態(tài)位點(diǎn)，3個(gè)為中度多態(tài)位點(diǎn)，平均多態(tài)信息為0.639 3。曲魯江等[31]利用微衛(wèi)星對(duì)我國(guó)78個(gè)雞品種進(jìn)行遺傳多樣性分析，平均多態(tài)信息含量為0.573，其中雙蓮雞最高，為0.633，狼山雞最低，為0.456。吾買爾江·艾孜木等[32]對(duì)拜城油雞的遺傳多樣性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示多態(tài)信息含量為0.722，高于本研究結(jié)果，原因可能是選取的微衛(wèi)星位點(diǎn)不同或者試驗(yàn)雞群存在差異，但均為高度多信息位點(diǎn)，表明拜城油雞具有豐富的遺傳多樣性。

拜城油雞為肉蛋兼用型，其肉味鮮美、骨細(xì)肉多。本試驗(yàn)對(duì)拜城油雞體重體尺和蛋品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定分析，同時(shí)采用微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行遺傳多樣性分析，為拜城油雞種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)利用和保護(hù)提供參考資料。