楊衛(wèi)民，杜京旗，路文靜

（呂梁學(xué)院，呂梁林果植物化學(xué)省市共建山西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，山西省特色植物功能成分工程研究中心，山西呂梁033001）

核桃（Juglans regia L）.又稱胡桃，羌桃，為胡桃科植物。核桃青皮、花、葉中均含有一定量的不同種類的生物堿成分。作為一類來(lái)源于生物界的含氮有機(jī)物質(zhì)，大部分生物堿分子的結(jié)構(gòu)特性一般較為復(fù)雜，多具有顯著的生理藥理效應(yīng)，呈現(xiàn)不同程度的堿性，是中草藥的重要有效成分。一些生物堿由于在生物制藥和衛(wèi)生等方面具有很強(qiáng)的實(shí)用性潛能和開(kāi)發(fā)市場(chǎng)，正逐漸成為人們研究熱點(diǎn)，具有抗腫瘤、抗病毒、消炎等醫(yī)學(xué)方面的作用。

吳茱萸堿結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

圖1 吳茱萸堿結(jié)構(gòu)式

吲哚類生物堿是具有吲哚分子骨架的一類化合物，具有多種良好的生理活性。目前，吲哚類生物堿的研究成為抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)之一，特別是在新藥及其新藥先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)中具有不可替代的作用[1-3]。吲哚類生物堿抗腫瘤機(jī)制一般可分為2類，一類是直接殺傷腫瘤細(xì)胞，另一類是干擾細(xì)胞周期的有絲分裂階段，抑制腫瘤細(xì)胞的分裂和增殖。此外，吲哚類生物堿抗腫瘤成分在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和提高機(jī)體免疫力方面也表現(xiàn)出一定的作用。核桃青皮等是一種具有前景的抗腫瘤新藥[4]。

核桃青皮、花、葉內(nèi)均富含多種生物活性物質(zhì)，關(guān)于青皮中有效化學(xué)成分的提取已被報(bào)道[4]。然而，目前生物堿的獲取途徑仍然比較單一，生物堿中的許多種類還沒(méi)有得到深層次的研發(fā)。從當(dāng)前的研究發(fā)展來(lái)看，局限性主要表現(xiàn)為某些分離技術(shù)的不成熟，比如較高的純化成本、較低的分離產(chǎn)量等問(wèn)題，尤其是大部分分離純化技術(shù)尚處在實(shí)驗(yàn)室研究階段。試驗(yàn)以核桃不同部位為原料，75%的甲醇為提取劑，經(jīng)微波超聲波組合萃取儀輔助處理，用薄層層析分離純化獲得三萜類化合物，用TLC-CMS技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了檢測(cè)與表征，該技術(shù)可直接從TLC薄層板上獲取質(zhì)譜圖，其優(yōu)點(diǎn)是不經(jīng)過(guò)樣品前處理，可快速?gòu)膹?fù)雜混合物中獲得目標(biāo)物分子質(zhì)量信息，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及主要儀器

材料：核桃青皮、葉、枝條，均采集于呂梁。

試劑：甲醇、石油醚、氯仿、苯、冰乙酸、氫氧化鈉、鹽酸、環(huán)己烷等，均為分析純；色譜甲醇；薄層硅膠板色譜分析板；吳茱萸堿（CAS：518-17-2；純度＞99%），購(gòu)買(mǎi)于中檢所。

儀器：ALB-224型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；XH-300B型微波-超聲波組合合成/萃取儀，北京祥鵠科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品；KH-3000Plus型薄層色譜儀，上?？普苌萍加邢薰井a(chǎn)品；Expressions型質(zhì)譜儀、Plate ExpressTLC-質(zhì)譜接口，美國(guó)Advion公司產(chǎn)品；Tensor-11型傅里葉紅外光譜儀，德國(guó)布魯克公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法與步驟

1.2.1 總生物堿的粗提取

核桃青皮陰干、粉碎、過(guò)80目篩，稱取7.2 g核桃青皮粉，以料液比1∶30加75%甲醇溶液，恒溫振蕩24 h，溫度45℃。

超聲波微波組合萃取儀分3個(gè)階段提取，每階段10 min，共30 min。在超聲波恒定的條件下，分別設(shè)置溫度為40，45，50℃；超聲波功率為850，900，800 W；微波功率為100，200，300 W；超聲波頻率為50 kHz，模式15∶10，電機(jī)轉(zhuǎn)速900 r/min。

提取液以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心10 min，3次，合并上清液，上清液用0.45 μm微膜減壓過(guò)濾，于水浴溫度為65℃下濃縮至體積的1/4。

等量石油醚除雜3次，用鹽酸酸化至pH值2～3時(shí)，等量氯仿萃取3次。用氫氧化鈉堿化至pH值9～10時(shí)，用等量的氯仿∶甲醇溶液（3∶1，V/V）混合液體萃取3次，獲取氯仿甲醇相后。濃縮至固體狀，用色譜甲醇定容至10 mL。

核桃葉和枝處理方法與上述相同。

1.2.2 樣液中吳茱萸堿含量檢測(cè)

配制0.010 000，0.005 000，0.002 500，0.001 250，0.000 625 mg/mL質(zhì)量濃度梯度的吳茱萸堿甲醇溶液，在最大吸收峰下測(cè)定其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

分別檢測(cè)新鮮核桃青皮和葉、陳葉、枝提取液的吸光度，計(jì)算其含量。

1.2.3 薄層色譜分離純化

用微量進(jìn)樣器吸取25 μL吲哚類生物堿對(duì)照品溶液，置于全自動(dòng)點(diǎn)樣機(jī)上，設(shè)置點(diǎn)樣參數(shù)（點(diǎn)樣間距10 mm，點(diǎn)樣寬度8 mm，點(diǎn)樣數(shù)目4，點(diǎn)樣量分別為2，4，6，點(diǎn)樣速度5 s/μL），在聚酰胺薄膜上進(jìn)行點(diǎn)樣；再吸取25 μL供試品溶液，點(diǎn)樣20 μL。

配制甲醇∶氯仿∶苯∶石油醚展開(kāi)劑，倒入展開(kāi)缸后蓋等待20 min，將點(diǎn)樣完成的硅膠板輕輕放入展開(kāi)劑液面高2～3 mm的平臥式展開(kāi)缸內(nèi)，待到展開(kāi)劑前沿距離硅膠板頂端約1 cm處時(shí)，取出晾干。將晾干的層析板放入薄層色譜成像系統(tǒng)，在365 nm的紫外光燈下觀察層析情況，并拍照記錄[5-6]。

1.2.4 紅外光譜儀檢測(cè)

將儀器和軟件打開(kāi)使其處于工作狀態(tài)，在測(cè)量每一個(gè)樣品之前，都需要測(cè)量單通道背景光譜，然后將樣品用毛細(xì)管點(diǎn)樣至光學(xué)臺(tái)的金剛石上，再進(jìn)行單通道樣品光譜的測(cè)量。每一個(gè)樣品測(cè)量后，都需要進(jìn)行譜圖處理，如進(jìn)行氣氛補(bǔ)償，可消除CO2、H2O的干擾。然后將檢測(cè)出來(lái)的光譜轉(zhuǎn)換成倒峰，選擇單峰檢索標(biāo)出每一個(gè)特征峰，保存并進(jìn)行分析[7-9]。

1.2.5 質(zhì)譜儀檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜檢測(cè)：用色譜甲醇和超純水作為流動(dòng)相。將儀器和軟件打開(kāi)使其處于工作狀態(tài)，用微量進(jìn)樣器吸取10 μL的吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液插入到進(jìn)樣口處，打到load檔開(kāi)始進(jìn)樣，進(jìn)完樣后打回到inject檔。點(diǎn)開(kāi)譜圖界面對(duì)譜圖進(jìn)行分析并保存。

待測(cè)液的質(zhì)譜檢測(cè)：流動(dòng)相與測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的流動(dòng)相相同。使儀器和軟件處于工作狀態(tài)，將待測(cè)品薄層板置于TLC-質(zhì)譜接口上，使激光對(duì)準(zhǔn)圈出的吳茱萸堿斑點(diǎn)中心處[10]。用軟件操作進(jìn)行取樣，點(diǎn)開(kāi)譜圖界面對(duì)譜圖進(jìn)行分析并保存。

1.2.6 樣液比旋光度和熔點(diǎn)檢測(cè)

通過(guò)對(duì)TLC的圖譜色譜的分析，判定所分離的物質(zhì)是有效分離，將分離物放入旋光儀中先用甲醇進(jìn)行校正，然后將溶液倒入，調(diào)節(jié)模式，測(cè)定其旋光度和比旋光度，記錄數(shù)值及其平均值。

將提取的樣液放入蒸發(fā)皿中，在電熱板上蒸發(fā)結(jié)晶成為固體，然后將固體放入一端封口的毛細(xì)管中，插入熔點(diǎn)儀中，調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)碾妷簛?lái)升溫，當(dāng)固體變?yōu)楣桃浩胶獾臓顟B(tài)時(shí)，溫度計(jì)上顯示的溫度即為該物質(zhì)的熔點(diǎn)[11-12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 吲哚類生物堿的粗提取

吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜圖見(jiàn)圖2，吳茱萸堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。

圖2 吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜圖

圖3 吳茱萸堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖2可以看出，吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品于波長(zhǎng)200～700 nm時(shí)進(jìn)行光譜波峰掃描，于波長(zhǎng)224 nm處有最大吸收波峰。

由圖3可以看出，吳茱萸堿在最大吸收波峰下的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

Y=154.72X+0.005 5，相關(guān)系數(shù)為0.992 5，線性關(guān)系良好。

核桃供試樣品中總生物堿的提取率和吳茱萸堿含量見(jiàn)表1。

表1 核桃供試樣品中總生物堿的提取率和吳茱萸堿含量

由表1可以看出，無(wú)論總生物堿的提取率還是吳茱萸堿的含量，核桃青皮中為最高，新鮮葉其次，枝條和陳葉中為最低[13]。

2.2 薄層色譜分離與分析

核桃青皮樣液TLC成像圖見(jiàn)圖4，核桃新鮮葉樣液TLC成像圖見(jiàn)圖5，核桃陳葉樣液TLC成像圖見(jiàn)圖6，核桃嫩枝樣液TLC成像圖見(jiàn)圖7。

圖4 核桃青皮樣液TLC成像圖

圖5 核桃新鮮葉樣液TLC成像圖

圖6 核桃陳葉樣液TLC成像圖

圖7 核桃嫩枝樣液TLC成像圖

由圖4～圖7可以看出，在不同配比的展開(kāi)劑下，核桃青皮和新鮮葉樣液色譜斑點(diǎn)較多，展開(kāi)效果良好，色譜斑點(diǎn)清晰。核桃陳葉和枝條樣液色譜斑點(diǎn)較少，展開(kāi)效果一般，陳葉樣液色譜斑點(diǎn)有拖尾現(xiàn)象[14-16]。

該檢測(cè)結(jié)果與紫外分析結(jié)果一致。

核桃青皮樣液與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品TLC成像圖見(jiàn)圖8，新鮮核桃葉與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品TLC成像圖見(jiàn)圖9。

圖8 核桃青皮樣液與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品TLC成像圖

圖9 新鮮核桃葉與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品TLC成像圖

核桃青皮等4種原料提取液所選用的4種展開(kāi)劑是經(jīng)過(guò)優(yōu)化試驗(yàn)條件確定的。由于核桃各部分所含化學(xué)成分不同，選取的原料在儲(chǔ)存上也有較大差異，因此選擇了不同的展開(kāi)劑。

經(jīng)過(guò)對(duì)核桃青皮等提取液的光譜掃描，以及與吳茱萸堿光譜波峰比對(duì)，可初步確定提取的樣品中含有吲哚類生物堿。但是，核桃青皮等提取液到底含有哪一種生物堿，需要對(duì)其與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對(duì)，若有大致相同Rf值的物質(zhì)出現(xiàn)，即可進(jìn)一步確定所提取的物質(zhì)是吲哚類生物堿[17]。

由圖8可以看出，用甲醇∶氯仿∶苯∶石油醚（2∶16∶2∶5，V/V）作為展開(kāi)劑，核桃青皮樣品與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品在同一硅膠板上展開(kāi)，晾干后在紫外光下觀察拍攝。結(jié)果顯示，核桃青皮樣品展開(kāi)后色譜斑點(diǎn)很多，標(biāo)記斑點(diǎn)A、B和C，其中斑點(diǎn)A吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值基本一致，且非常清晰?？沙醪酱_定所提取的樣品中含有吳茱萸堿，以及與吳茱萸堿極性相近的其他生物堿類化合物[18-19]。

由圖9可以看出，在展開(kāi)劑為甲醇∶氯仿∶苯∶石油醚（1∶9∶2∶5，V/V）下，出現(xiàn)較為明顯的色譜斑點(diǎn)3個(gè)，其中斑點(diǎn)A與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品展開(kāi)位置基本相同，Rf值也大致相同。斑點(diǎn)B和C與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品位置鄰近，可能是極性相近的生物堿。

2.3 質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果與分析

吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜圖見(jiàn)圖10，色譜斑點(diǎn)A質(zhì)譜圖見(jiàn)圖11。

圖10 吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜圖

圖11 色譜斑點(diǎn)A質(zhì)譜圖

通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[20]可以得知，分子離子峰的識(shí)別首先是該離子峰范圍內(nèi)最大的峰值（m/z），其次需要判斷該物質(zhì)是否符合氮規(guī)劃，不含N或含偶數(shù)N的有機(jī)分子，其分子離子峰的m/z（即分子量）為偶數(shù)。含奇數(shù)N的有機(jī)分子，其分子離子峰的m/z（即分子量）為奇數(shù)，這兩點(diǎn)是識(shí)別離子峰的關(guān)鍵。

吳茱萸堿分子式為C19H17N3O，分子量為303，含3個(gè)氮原子，其分子離子峰m/z 303左右，為奇數(shù)。

由圖11可以看出，色譜斑點(diǎn)A的分子離子峰為m/z 305.3，其分子離子峰滿足氮規(guī)則。分子離子峰與較小的碎片離子峰產(chǎn)生了合理的碎片丟失（Δm），Δm=305.3-304.4≈1，表示在電子轟擊下打掉了1個(gè)H，因此為合理丟失。

色譜斑點(diǎn)B質(zhì)譜圖見(jiàn)圖12。

圖12 色譜斑點(diǎn)B質(zhì)譜圖

由圖12可以看出，色譜斑點(diǎn)B的質(zhì)荷比（m/z）在360以上，而吳茱萸堿的相對(duì)分子質(zhì)量為303，色譜斑點(diǎn)B不是吳茱萸堿，可能為其他吲哚類化合物。

色譜斑點(diǎn)C質(zhì)譜圖見(jiàn)圖13。

圖13 色譜斑點(diǎn)C質(zhì)譜圖

由圖13可以看出，色譜斑點(diǎn)C與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜圖有相近的分子離子峰（304.2，332.1，333.2），故推測(cè)斑點(diǎn)C與吳茱萸堿可能有相似的分子組成，具體結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步分析。

2.4 紅外檢測(cè)結(jié)果與分析

吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（甲醇，第一次）見(jiàn)圖14，吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（甲醇，第二次）見(jiàn)圖15。

圖14 吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（甲醇，第一次）

圖15 吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（甲醇，第二次）

由圖14和圖15可以看出，吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品（甲醇）2次紅外檢測(cè)的結(jié)果大致一致，但存在差異（1 650 cm-1和1 669 cm-1，1 449 cm-1和1 448 cm-1，1 411 cm-1和1 392 cm-1，1 113 cm-1和1 112 cm-1，1 019 cm-1和1 017 cm-）1，可視為試驗(yàn)誤差。

吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（氯仿）見(jiàn)圖16。

圖16 吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖（氯仿）

由圖16可以看出，吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品（氯仿）和甲醇溶的吳茱萸堿，兩者共同的峰值為吳茱萸堿的特征峰。（2 945 cm-1和2 918 cm-1，2 833 cm-1和2 850 cm-1，1 650 cm-1和1 638 cm-1，1 449 cm-1和1 479 cm-1，1 411 cm-1和1 424 cm-1，1 281 cm-1和1 269 cm-）1。

色譜斑點(diǎn)A的紅外光譜圖（甲醇）見(jiàn)圖17，色譜斑點(diǎn)B的紅外光譜圖（甲醇）見(jiàn)圖18。

圖17 色譜斑點(diǎn)A的紅外光譜圖（甲醇）

圖18 色譜斑點(diǎn)B的紅外光譜圖（甲醇）

由圖17可以看出，色譜斑點(diǎn)A在3 280 cm-1處出現(xiàn)了N-H的伸縮振動(dòng)吸收峰，在1 654 cm-1處出現(xiàn)了C=O的特征吸收峰，在2 944 cm-1和2 832 cm-1處的吸收峰可以分別為CH3和CH2上的C-H伸縮振動(dòng)吸收峰，在1 654，1 449，1 414，1 021 cm-1的吸收峰為苯環(huán)的特征吸收峰。這些光譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)一致，也與文獻(xiàn)報(bào)道[20]的大致一致，說(shuō)明為吳茱萸堿。

由圖18可以看出，色譜斑點(diǎn)B與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品有相似之處。在2 943 cm-1和2 832 cm-1處的吸收峰可以分別歸屬為CH3和CH2上的C-H伸縮振動(dòng)吸收峰，在1 449，1 415，1 115，1 022 cm-1的吸收峰為苯環(huán)的特征吸收峰，這與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品有相似之處。但不完全相同，在2 318 cm-1處的峰可能為甲醇中的羥基峰，在1 654 cm-1左右沒(méi)有出現(xiàn)的C=O的特征吸收峰。故推測(cè)斑點(diǎn)2可能為吲哚類其他物質(zhì)。

色譜斑點(diǎn)C紅外光譜圖（甲醇）見(jiàn)圖19。

圖19 色譜斑點(diǎn)C紅外光譜圖（甲醇）

由圖19可以看出，色譜斑點(diǎn)C與斑點(diǎn)B的紅外光譜圖相似，同樣有歸屬為CH3和CH2上的C-H伸縮振動(dòng)吸收峰（2 943 cm-1和2 832 cm-）1，在1 449，1 415，1 115，1 022 cm-1的苯環(huán)的特征吸收峰。沒(méi)有在1 654 cm-1左右出現(xiàn)的C=O的特征吸收峰。所以，推測(cè)斑點(diǎn)3可能為吲哚類其他物質(zhì)，也可能為別的生物堿化合物。

2.5 比旋光度和熔點(diǎn)檢測(cè)與分析

譜斑點(diǎn)的旋光度及比旋光度見(jiàn)表2，色譜斑點(diǎn)及吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的熔點(diǎn)見(jiàn)表3。

表2 色譜斑點(diǎn)的旋光度及比旋光度

表3 色譜斑點(diǎn)及吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的熔點(diǎn)

3 結(jié)論

按料液比1∶30（m/V）加75%甲醇溶液，于超聲波微波組合萃取儀中分3個(gè)階段處理。每階段10 min，共30 min。在超聲波恒定的條件下，分別設(shè)置溫度為40，45，50℃；超聲波功率為850，900，800 W；微波功率為100，200，300 W；超聲波頻率為50 kHz，模式15∶10，電機(jī)轉(zhuǎn)速900 r/min。新鮮核桃青皮、葉和枝中的吳茱萸堿含量依次是50.13，16.67，8.06 mg/100 g。新鮮核桃青皮和葉中所含物質(zhì)種類較多，枝和陳葉中物質(zhì)單一。試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)舊葉中幾乎全是紅色物質(zhì)，而新葉中物質(zhì)比較豐富，枝中物質(zhì)較少。舊葉和新葉的不同，可能是舊葉被氧化的緣故。

在甲醇∶氯仿∶苯∶石油醚展開(kāi)劑配比為2∶16∶2∶5（V/V）；1∶9∶2∶5（V/V）；1∶8∶2∶6（V/V）和1∶8∶2∶6（V/V）下，核桃青皮、新葉、舊葉和枝條樣品展開(kāi)效果良好，色譜斑點(diǎn)清晰；供試樣品與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品色譜斑點(diǎn)位置一致。TLC分離、純化技術(shù)能適應(yīng)不同物化特性的溶劑體系和多樣性的操作條件，具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，為從復(fù)雜的天然產(chǎn)物粗制品中提取不同特性（如不同極性）的有效成分提供了有利條件。

供試樣品與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品的最大質(zhì)荷比（m/z）為305，有相同的碎片丟失。質(zhì)譜圖中除包含與吳茱萸堿相符的碎片離子峰外，存在其他多個(gè)碎片離子峰或者基峰，推測(cè)原因有三：其一選擇的離子源不合適，導(dǎo)致打出的碎片雜多；其二在電轟擊過(guò)程中，產(chǎn)生了成倍的碎片離子峰；其三分離純化程度不夠，進(jìn)入質(zhì)譜的樣液尚存在雜質(zhì)。

供試樣品與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品在3 280 cm-1處有N-H的伸縮振動(dòng)吸收峰，1 654 cm-1處有C=O的特征吸收峰，2 944 cm-1和2 832 cm-1處分別歸屬為CH3和CH2上的C-H伸縮振動(dòng)吸收峰，1 654，1 449，1 414，1 021 cm-1處出現(xiàn)苯環(huán)的特征吸收峰；與吳茱萸堿Rf值相近的未知斑點(diǎn)，可能是其他吲哚類化合物。紅外圖譜中，洗脫物的特征峰除與對(duì)照品一致外，還有其他峰，但峰面積較小，影響較小，分析可能是TLC分離物中還有些許雜質(zhì)，或者是吲哚類化合物中以吳茱萸堿為母核以外的結(jié)構(gòu)，這需要進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)并進(jìn)行后續(xù)的研究。

薄層層析-質(zhì)譜-紅外（TLC-CMS-IR）在生物活性物質(zhì)分離純化中具有操作簡(jiǎn)便、容易掌握、回收率高、重現(xiàn)性好、分離效率高、分離量較大等特點(diǎn)。TLC-CMS-IR聯(lián)用有望在標(biāo)準(zhǔn)品的制備、天然產(chǎn)物化學(xué)成分研究及新藥篩選、評(píng)價(jià)、分析或質(zhì)控需求等領(lǐng)域得到更廣泛的應(yīng)用。