蘇東梅 車漢榮 彭燕

（茂名市中醫(yī)院 廣東茂名 525000）

1 前言

梅毒是一種臨床常見慢性傳染性疾病，以梅毒螺旋體為主要致病體。性接觸與血液傳播均可導(dǎo)致機(jī)體感染，危險(xiǎn)性極大，既可對機(jī)體全身器官造成損害，還可通過胎盤傳播導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎傳梅毒，嚴(yán)重時(shí)危及生命[1]。患者發(fā)病初期一般無全身癥狀，通常以硬下疳、硬化性淋巴結(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)，由于癥狀不明顯，常被患者忽略，隨著病情加重，多種癥狀逐漸顯現(xiàn)出來。臨床上梅毒檢測方法眾多，時(shí)間分辨免疫熒光法（TRFIA）、顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）等均可實(shí)現(xiàn)梅毒檢測，為明確各種方法在梅毒診斷中應(yīng)用價(jià)值，本次研究對TRFIA、TPPA及TRUST 3種方法的梅毒檢測效果進(jìn)行研究分析。

2 資料與方法

2.1 一般資料

選取2019年11月—2020年4月期間在我院接受梅毒檢測的627例受檢者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18歲；未患其他傳染性、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)及代謝系統(tǒng)性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：不愿參與研究；采血后需手術(shù)。受檢者男性345例，女性282例；年齡18～66歲，平均（43.5±6.0）歲；伴生殖器周圍斑塊55例，伴腹股溝淋巴結(jié)腫大104例，其余468例受檢者伴不同程度皮膚黏膜受損。

2.2 檢測方法

所有受檢者均于清晨取空腹5 mL靜脈血，常溫靜置5 min后行離心處理獲得血清，采用TRFIA、TPPA及TRUST 3種方法行梅毒檢測。

2.2.1TRFIA檢測

選用蘇州新波生物技術(shù)有限公司研發(fā)AT2000時(shí)間分辨全自動(dòng)檢測系統(tǒng)，室溫下檢測平衡板條5～10 min，取血清樣本50μL移至微孔板底部，另加入生物素標(biāo)記抗原，于室溫下孵育45 min。孵育完成后進(jìn)行洗滌，取EU標(biāo)記鏈親和素至微孔板底部，于室溫下孵育15 min，孵育后再進(jìn)行洗滌，加入增強(qiáng)液后進(jìn)行熒光計(jì)數(shù)值測量[2]。

2.2.2TPPA檢測

選用日本富士生物制品株式會(huì)社生產(chǎn)TPPA試劑盒。檢測前30 min于冰箱中取出血清標(biāo)本和試劑，放置于無菌環(huán)境使其溫度恢復(fù)至室溫。每份樣品作4孔，選用移液器取100滴血清稀釋液，放入微量反應(yīng)板第1孔，各取25滴放入第2～4孔。選用移液器，取血清樣本25滴至第1孔，再以2n方式從第1孔稀釋至第4孔，取25滴未致敏粒子滴入第3孔，取25滴致敏粒子至第4孔?；蝿?dòng)微量反應(yīng)板30 s使其充分混合，控制晃動(dòng)強(qiáng)度，避免微量反應(yīng)板的內(nèi)容物濺出。隨后加蓋至濕盒內(nèi)，室溫下水平靜置2 h后，觀察結(jié)果[3]。

2.2.3TRUST檢測

選用上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)TRUST試劑盒，檢測前于室溫下預(yù)溫30 min。預(yù)溫完成后，取50滴血清至試驗(yàn)卡片圈中，均勻涂布，使血清樣本均勻布于整個(gè)卡圈，切記不要讓血清樣本溢出圈外。搖勻抗原，使用專用滴管針頭取抗原添加至標(biāo)本圈中，添加時(shí)需與標(biāo)本圈垂直，每個(gè)標(biāo)本圈添加1滴（約17約至）抗原。將卡片置于水平旋轉(zhuǎn)儀，蓋好保濕蓋，旋轉(zhuǎn)8 min，轉(zhuǎn)速為100 r/min。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后，取出卡片，放置在亮度處，肉眼觀察結(jié)果[4]。

2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

TRFIA判定標(biāo)準(zhǔn)：測量標(biāo)本S/CO值≥1為陽性，反之為陰性。TPPA判定標(biāo)準(zhǔn)：觀察第3孔是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，確定試驗(yàn)有效后，觀察第4孔是否產(chǎn)生凝集反應(yīng)，產(chǎn)生為陽性，未產(chǎn)生為陰性。TRUST判定標(biāo)準(zhǔn)：觀察圈內(nèi)發(fā)現(xiàn)有中量或大量紅色絮狀物，液體清亮，為陽性；圈內(nèi)發(fā)現(xiàn)少量紅色絮狀物，液體渾濁，為弱陽性；圈內(nèi)發(fā)現(xiàn)碳顆粒聚集一點(diǎn)或均勻分散，為陰性。

2.4 觀察指標(biāo)

觀察3種方法檢測陽性率和陰性率；本次研究以腦脊液檢查作為梅毒檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，觀察3種方法敏感度、特異度及準(zhǔn)確度等診斷效能；觀察3種方法檢測一致率。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過Dataload 5.4.10軟件錄入數(shù)據(jù)，選用Graph PadPrism8.0軟件比對數(shù)據(jù)，計(jì)量資料進(jìn)行t檢驗(yàn)。將P<0.05視為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。

3 結(jié)果

3.1 3種方法檢測結(jié)果，詳見表1。

表1 3種方法檢測結(jié)果（n，%）

3.2 3種方法診斷效能，詳見表2。

表2 3種方法診斷效能（n，%）

3.3 3種方法檢測一致率為70.65%，詳見表3。

表3 3種方法檢測一致性

4 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年約有1 200萬例梅毒新增病例，2019年我國梅毒新增病例達(dá)54萬例，梅毒患者人數(shù)不斷增多，已成為當(dāng)今社會(huì)備受關(guān)注的問題。積極采取有效方法準(zhǔn)確檢測梅毒，為患者制定早期治療方案起到重要作用。對于改善患者預(yù)后、保障患者生命健康，具有重要意義[5]。TRFIA、TPPA和TRUST均為臨床梅毒檢測的常用方法，TRFIA試驗(yàn)以鑭系金屬元素螯合物為標(biāo)記物，通過測量樣本發(fā)射熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)梅毒特異性抗體檢測，是一種新型體外超微量檢測分析技術(shù)。本次研究中，TRFIA檢測具有較高敏感度（97.69%）和準(zhǔn)確度（96.49%），但檢測特異度（61.90%）相對較低，結(jié)果表明TRFIA診斷效能優(yōu)異，自動(dòng)化操作，客觀因素對檢測結(jié)果造成影響較小。但可能會(huì)在檢測時(shí)出現(xiàn)假陽性，因此采用TRFIA檢測梅毒為陽性時(shí)，需再進(jìn)行梅毒檢測以獲得更為準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。TPPA試驗(yàn)是通過提取Nichols株梅毒螺旋體特異性抗原，以檢測梅毒特異性抗體的檢測方法，本次研究TPPA檢測敏感度（97.69%）、特異度（66.67%）及準(zhǔn)確度（96.65%）均達(dá)到較高水平，但相比其他2種檢測方法，檢測步驟相對復(fù)雜，且檢測費(fèi)用高。TRUST試驗(yàn)是以心磷脂、卵磷脂、膽固醇等為抗原，檢驗(yàn)血清中反應(yīng)素的檢測方法。臨床常將其與TPPA聯(lián)合使用，以提高梅毒檢測準(zhǔn)確性。本次研究TRUST檢測敏感度（76.40%）、特異度（57.14%）及準(zhǔn)確度（75.76%）均低于其他2種方法。采用TRUST檢測，梅毒更容易發(fā)生假陰性，延誤患者治療時(shí)機(jī)，但其檢測費(fèi)用低廉。另外結(jié)果顯示，3種方法檢測一致率僅為70.65%，可見其檢測精準(zhǔn)性存在一定差距。因此，在梅毒檢測時(shí)，可根據(jù)受檢者具體情況，選擇合適方法對其進(jìn)行梅毒檢測。適當(dāng)聯(lián)合檢測，以獲得更為準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，為患者在發(fā)病初期獲得有效治療提供保障。

綜上所述，3種方法在梅毒檢測中各有優(yōu)勢，需結(jié)合受檢者具體情況選擇合適方法，臨床也可進(jìn)行聯(lián)合檢測，提高診斷準(zhǔn)確性。