楊麗萍

◆摘? 要：本實(shí)驗(yàn)研究采用分光光度法，用對-二甲氨基苯甲醛作顯色劑檢測飼料和動物性食品中磺胺二甲嘧啶的方法。該法的最小檢測量可達(dá)0.1μg/mg，平均回收率達(dá)99.2%，變異系數(shù)小于等于5，表明此方法結(jié)果準(zhǔn)確、離散程度小，且操作簡便、快速、試劑消耗少。

◆關(guān)鍵詞：飼料;動物性食品;磺胺二甲基嘧啶;檢測

由于部分飼養(yǎng)者不遵守休藥期的規(guī)定，導(dǎo)致磺胺類藥物在動物體內(nèi)蓄積，在畜禽產(chǎn)品中殘留。人們食用這些獸藥殘留量超標(biāo)的產(chǎn)品后，自身健康會受到不良影響。本實(shí)驗(yàn)研究使用對-二甲氨基苯甲醛作顯色劑的分光光度法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：此方法操作簡便、回收率高、結(jié)果快速準(zhǔn)確，試劑用量少、費(fèi)用低，可在基層推廣使用。

1.1測定原理

將對氨基苯磺酰胺及酰胺官能團(tuán)上的氫原子被其它基團(tuán)取代以后形成的一系列衍生物稱為磺胺類藥物。芳伯氨基是大多數(shù)磺胺類藥物都含有的基團(tuán)，酸性條件下，它能與對-二甲氨基苯甲醛生成有色化合物，即喜夫氏堿。因?yàn)樵谝欢舛确秶鷥?nèi)的喜夫氏堿的吸光度值符合光吸收定律，所以，能夠使用分光光度法來測定其含量。

1.2材料與方法

1.2.1試劑與儀器

1.2.1.1對-二甲氨基苯甲醛? 在50mL 95%乙醇中溶解1g化學(xué)純的對-二甲氨基苯甲醛即可。

1.2.1.2磺胺二甲基嘧啶（簡稱：SM2）應(yīng)用液：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品SM2 配制。

1.2.1.3提取液：于500mL容量瓶中加入247.5mL無水乙醇，同時(shí)加入5mL濃鹽酸，再用蒸餾水定容至500mL。

1.2.1.4儀器：721型分光光度計(jì)。

1.3試驗(yàn)條件的選擇

1.3.1提取試劑的選用。因磺胺二甲基嘧啶具有難溶于水、易溶于稀酸和堿等理化性質(zhì)，所以選用酒精、乙醚、氯仿、鹽酸作為提取試劑實(shí)驗(yàn)。

1.3.2溶液最大吸收波長的選擇（吸收曲線）。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：用提取試劑溶解精確稱量的25mg SM2，并移入100mL容量瓶中，再用提取液定容至100mL，得到SM2溶液的濃度為0.25mg/mL。分別取上述溶液0.5、1.0、3.0、4.5mL置于25mL容量瓶中，同時(shí)用提取液定容到刻度，分別得到濃度為0.005、0.010、0.030、0.045mg/mL的SM2標(biāo)準(zhǔn)液。分光光度計(jì)靈敏度檔選擇“3”檔、比色皿厚度選用0.5cm，并向標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入1mL對-二甲氨基苯甲醛，打開分光光度計(jì)，測定上述標(biāo)準(zhǔn)液在不同波長時(shí)的吸光度值。以波長λ為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線。結(jié)果表明：四個(gè)濃度都在450nm處有最大的吸光度值，所以確定溶液的最大吸收波長為450nm。

1.3.3顯色條件選擇

1.3.3.1確定顯色劑的酸度。首先配制五組濃度為0.01、0.02、0.03、0.04mg/mL的SM2標(biāo)準(zhǔn)液，各組溶液分別加入鹽酸含量為0、1、2、3、4mL的對-二甲氨基苯甲醛各1mL作顯色劑。然后選擇波長450nm測定溶液的吸光度值。橫坐標(biāo)為濃度，縱坐標(biāo)為吸光度值來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示：顯色劑中不加入鹽酸時(shí)，溶液可形成穩(wěn)定的有色化合物，吸光度值穩(wěn)定，在一定范圍內(nèi)符合光吸收定律，所以確定顯色劑中不加入鹽酸，溶液的pH值在4.0-4.5之間。

1.3.3.2確定顯色劑的用量。試驗(yàn)結(jié)果顯示，對-二甲氨基苯甲醛用量為1.0mL時(shí)，溶液吸光度值的梯度明顯，空白管為0，所以，確定顯色劑的用量為1.0mL。

1.3.3.3確定比色皿的厚度。結(jié)果顯示：在0.5cm厚的比色皿中，溶液的吸光度值在一定范圍內(nèi)符合光吸收定律，所以確定比色皿厚度為0.5cm。

1.3.3.4確定溶液顯色時(shí)間。配制五管濃度分別為0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL的SM2標(biāo)準(zhǔn)液，其他分析條件同上，室溫下，分別顯色2min、4 min 、6 min、8 min和 10 min后測定溶液的吸光度值。綜合三個(gè)濃度在不同顯色時(shí)間的吸光度值，可以看出溶液的顏色在顯色6-8min后達(dá)到穩(wěn)定，因此溶液顯色時(shí)間確定為6-8min。

1.4繪制工作曲線。為方便查出樣品中磺胺二甲基嘧啶的含量，可以繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。從工作曲線上就可以查出待測樣品中磺胺二甲基嘧啶的含量（毫克數(shù)）。

2回收率試驗(yàn)

為了驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)方法測定結(jié)果準(zhǔn)確性的高低，做了回收率試驗(yàn)。分別以0.05mg/g，0.1mg/g，0.2mg/g三個(gè)濃度在飼料中添加SM2，按照分析方法進(jìn)行檢測，結(jié)果見表6。結(jié)果顯示：SM2濃度在0.05-0.2mg/g范圍內(nèi)均與工作曲線有良好的比例關(guān)系，平均回收率在96%～102%。

3結(jié)果與討論

3.1實(shí)驗(yàn)表明：用對-二甲氨基苯甲醛作顯色劑的分光光度法具有簡便、易行、快速的優(yōu)點(diǎn)，而且試劑消耗量較少，在常溫條件下就可以進(jìn)行測定。

3.2生活中一些物質(zhì)也含有芳伯氨基，所以如果在待測樣品中有含芳伯氨基的物質(zhì)，可能對磺胺二甲嘧啶的顯色產(chǎn)生干擾。這個(gè)問題需要注意。

3.3磺胺類藥物在動物性食品中的MRL（mg/kg）為：所有食品動物肌肉、脂肪、肝、腎、牛奶、羊奶≤0.1mg/kg。飼料中磷酸泰樂菌素、磺胺二甲基嘧啶預(yù)混劑每1000Kg飼料中添加200g，其中泰樂菌素100g、磺胺二甲基嘧啶100g用分光光度法的檢出限量很低，該法的最小檢測量為：0.1ug/mg，所以可用于飼料和動物性食品中磺胺二甲基嘧啶的檢測。

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