陸齊泉，羅綺莉，寧立芬（通訊作者）

（武漢市漢陽醫(yī)院檢驗科 湖北 武漢 430050）

遺傳代謝性疾病主要是因基因突變導(dǎo)致的酶或受體缺乏，細(xì)胞膜功能發(fā)生異常，機(jī)體生化代謝發(fā)生紊亂，最終引發(fā)一系列臨床癥狀的疾病。隨著國家二胎政策的開放，新生兒降生率提升。受到一些因素影響，一部分新生兒在胚胎發(fā)育過程中會發(fā)生異常，形成遺傳代謝性疾病?，F(xiàn)人們較為重視優(yōu)生優(yōu)育，因此在分娩前會進(jìn)行篩查，然而一部分遺傳代謝性疾病在出生之前不能篩查出來，即使出生后也并不會表現(xiàn)出疾病癥狀，一旦疾病表現(xiàn)出來，那么就已經(jīng)對神經(jīng)系統(tǒng)造成了不可逆損害[1]。新生兒遺傳代謝疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療對生長發(fā)育有著重要意義。在本次研究中旨在分析串聯(lián)質(zhì)譜法在新生兒遺傳代謝疾病篩查中的應(yīng)用效果，以下為詳情報告。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年12 月—2020 年12 月間在我院分娩1 225 名新生兒作為研究受檢者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）新生兒父母對該研究表示支持；（2）均在出生72 h ～7 d 內(nèi)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）出生72 h 后死亡；（2）產(chǎn)前篩查已確診患有先天性疾病。在1 225 名新生兒中，男690 名、女535 名；出生時間自1 ～8 d，均值（4.50±1.39）d；出生體質(zhì)量在2.1 ～4.2 kg，均值（3.15±1.13）kg；48 名為早產(chǎn)兒、1 177 名為足月兒。

1.2 方法

1.2.1 對照組 常規(guī)篩查法：行PKU（苯丙酮尿癥）、TSH（促甲狀腺素）篩查。自新生兒足跟內(nèi)、外側(cè)進(jìn)針采集血液標(biāo)本，并將其滴在濾片上，血凝干透后形成干濾紙血片，使用時間分辨率免疫熒光法檢測血片中的促甲狀腺素與苯丙氨酸濃度。

1.2.2 研究組 串聯(lián)質(zhì)譜法篩查：（1）采集血液標(biāo)本：為了避免發(fā)生假陽性或假陰性的篩查結(jié)果，新生兒在出生72 h 內(nèi)哺乳喂養(yǎng)次數(shù)應(yīng)＞6 次，由臨床經(jīng)驗豐富醫(yī)務(wù)人員采集血樣。選用903 標(biāo)準(zhǔn)血斑濾紙，消毒采血處皮膚，對足跟外側(cè)進(jìn)行穿刺，第一滴血棄用，將第二滴血滴在血斑濾紙上，當(dāng)血液干透后，再取三滴血，確保血液滲透濾紙，且血斑直徑＞0.8 mm。以相同的方式再采集第2 個血斑，當(dāng)血液干透后放到密封袋中，保存環(huán)境溫度4 ～5℃，及時送檢。（2）取非衍生化多種氨基酸、琥珀酰丙酮、肉堿試劑盒，根據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行操作。經(jīng)Perkin Elmer MSMS 系統(tǒng)對分析物信號強(qiáng)度、內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品信號強(qiáng)度進(jìn)行檢測，獲取氨基酸、肉堿、多種類型酰基肉堿的濃度及飽和度，在相同條件下質(zhì)控品及樣本復(fù)孔進(jìn)行。針對可疑陽性需行二次檢測，若二次檢測結(jié)果比正常值低，結(jié)果為陰性，若比正常值高，需要轉(zhuǎn)到專科做進(jìn)一步檢測。

1.3 評估指標(biāo)

比較對照組與研究組可疑陽性檢出率與最終確診率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)應(yīng)用

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。正態(tài)分布的計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料用頻數(shù)和百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

經(jīng)病理證實，共8 名新生兒患遺傳代謝疾病，甲基丙二酸血癥為3 名（37.50%）、脂肪酸代謝異常為2 名（25.00%）、高苯丙酸酸血癥為1 名（12.50%）、高瓜氨酸血癥為1 名（12.50%）、異戊酸血癥為1 名（12.50%）。研究組可疑陽性檢出率低于對照組（P＜0.05）；最終確診率高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 篩查結(jié)果比較[n（%）]

3.討論

遺傳代謝疾病因維持機(jī)體代謝的多肽或者蛋白組成的酶類、載體、受體出現(xiàn)遺傳性缺陷，導(dǎo)致基因突變，從而引起疾病[2]。遺傳代謝疾病的臨床表現(xiàn)為低血糖、呼吸不規(guī)律、喂養(yǎng)困難等等，導(dǎo)致遺傳代謝疾病的致病因素有兩種，一種為先天基因遺傳，另一種則為后天基因突變。遺傳代謝疾病涉及脂肪酸、氨基酸、類固醇等多種物質(zhì)代謝異常，會損害人體多個系統(tǒng)。遺傳代謝疾病一旦沒有及時治療，隨著病情進(jìn)展會引發(fā)腦癱、癡呆等。一些遺傳代謝疾病并不常見，然而一旦發(fā)生，那么造成后果是極為嚴(yán)重的，不僅會影響智力發(fā)育，甚至終身殘疾。

醫(yī)學(xué)已知的遺傳代謝疾病種類有千種，單一病種的發(fā)生率并不高，發(fā)病種類也有所不同，根據(jù)調(diào)查顯示，氨基酸代謝疾病發(fā)病率1/3 800、有機(jī)酸代謝疾病發(fā)病率1/14 700、脂肪酸代謝疾病發(fā)病率1/10 500[3]。新生兒的氨基酸代謝異常主要是因氨基酸代謝途徑中缺乏一些關(guān)鍵酶，致使相應(yīng)氨基酸不能代謝，濃度發(fā)生異常。通過質(zhì)譜信息可以使用中性丟失掃描或（和）多反應(yīng)離子監(jiān)測，建立半定量或絕對定量的串聯(lián)質(zhì)譜分析法進(jìn)行篩查；在線粒體中，脂肪酸的來源為β 氧化，長鏈脂肪酸在細(xì)胞質(zhì)中活化，成為長鏈脂酰CoA，并將肉毒堿作為載體進(jìn)入到線粒體，進(jìn)入到線粒體后，游離肉毒堿及長鏈脂酰CoA 被釋放出來，長鏈脂酰CoA 受到各種酶作用，通過一系列步驟分解成為中鏈與短鏈脂酰CoA，分別進(jìn)入β 氧化下個循環(huán)中，也就是說任何一種酶缺乏都會引起脂肪酸氧化缺陷。通過使用母離子掃描或（和）多反應(yīng)離子檢測，建立半定量或絕對定量的串聯(lián)質(zhì)譜分析法進(jìn)行篩查；有機(jī)酸是氨基酸、脂肪、糖中間在代謝中產(chǎn)生的羥酸，有機(jī)酸血癥是因某種酶缺陷引起有關(guān)羥酸與其代謝產(chǎn)物蓄積導(dǎo)致的。一部分有機(jī)酸代謝途徑較為相似，代謝標(biāo)志物也相同，所以增加了篩查難度。采用串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行篩查時其關(guān)鍵是快速、準(zhǔn)確檢測出C3-酰基肉毒堿和游離、C2-、C16-?；舛緣A。

本次研究中，對1 225 名新生兒遺傳代謝疾病進(jìn)行篩查，將篩查結(jié)果與病理結(jié)果比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率為100.0%。質(zhì)譜儀可以將分子轉(zhuǎn)化成為離子，然后經(jīng)適當(dāng)電場、磁場將離子按照空間位置等實現(xiàn)質(zhì)合比分離，通過對強(qiáng)度進(jìn)行檢測分析被檢測物質(zhì)。此外質(zhì)譜儀也能獲取樣品的相對分子質(zhì)量、分子中同位素構(gòu)成等信息。串聯(lián)質(zhì)譜法將兩個質(zhì)譜串聯(lián)在一起，與單極質(zhì)譜比較，雙極質(zhì)譜可改善信號信噪比、提高分辨力等，可以對30多種新生兒遺傳代謝疾病進(jìn)行篩查。串聯(lián)質(zhì)譜法的檢測原理是將被測電離成質(zhì)合比離子，利用電磁場產(chǎn)生的作用分離出離子，然后對峰強(qiáng)度進(jìn)行檢測，并將檢測結(jié)果與內(nèi)標(biāo)液進(jìn)行比對，從而獲取目標(biāo)物質(zhì)濃度[4]。酶聯(lián)免疫吸附實驗、細(xì)菌抑制法等常規(guī)篩查方法為一種實驗檢測一種疾病，不適用多種疾病群體篩查中，此外檢測時間也較長。與常規(guī)篩查技術(shù)比較，串聯(lián)質(zhì)譜法的敏感度、有效率較高，可以同時對多種指標(biāo)、多種疾病進(jìn)行檢測，同一血斑上的多種氨基酸與游離肉堿可以快速顯示出來[5]。串聯(lián)質(zhì)譜法在新生兒遺傳代謝疾病篩查中的價值如下：（1）檢測信息豐富：進(jìn)行一次實驗可以對百余項指標(biāo)與比值進(jìn)行檢測，數(shù)十種遺傳代謝疾病信息都能顯示出來；（2）高通量：一臺質(zhì)譜儀每天可檢測500 份標(biāo)本；（3）高特異性：分析疾病指標(biāo)指征，杜絕或減少了假陽性結(jié)果；（4）靈敏度高：肉堿在機(jī)體中的含量比較低，串聯(lián)質(zhì)譜法檢測則彌補(bǔ)了這種不足。

雖然串聯(lián)質(zhì)譜法有著很大優(yōu)勢，但是也不能徹底代替?zhèn)鹘y(tǒng)篩查方法，串聯(lián)質(zhì)譜法是一個篩查方法，為了保證篩查準(zhǔn)確性，也需要進(jìn)一步篩查。串聯(lián)質(zhì)譜法的不足如下：（1）質(zhì)譜儀的價格較貴，再加上維護(hù)的費用，并不能在基層醫(yī)院開展；（2）與一般新生兒疾病比較，遺傳代謝疾病并不常見，治療資源也較為匱乏，因此在一般醫(yī)院不一定能有相應(yīng)治療服務(wù)；（3）高特異性與高靈敏度是串聯(lián)質(zhì)譜法的優(yōu)勢，也是串聯(lián)質(zhì)譜法的限制，新生兒營養(yǎng)狀況、用藥等因素會對檢測結(jié)果造成影響；（4）通過串聯(lián)質(zhì)譜法可以檢出多種遺傳代謝疾病，而常規(guī)喂養(yǎng)在短時間或3 d 內(nèi)就會引起急性發(fā)病，甚至死亡，所以在出生之后，越早進(jìn)行檢測越好、越早治療越好，最好的出生5 d 內(nèi)檢測、確診[6]；（5）酪氨酸血癥等疾病有檢測窗口期；（6）串聯(lián)質(zhì)譜法在檢測時會使用到試劑盒，分為衍生法與非衍生法兩類，不同統(tǒng)一方法驗證參數(shù)。目前對各種遺傳代謝疾病機(jī)理認(rèn)識不斷加深，再加上醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷提升，串聯(lián)質(zhì)譜法也會越來越規(guī)范，也將檢測出更多的遺傳代謝疾病，徹底實現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療。

綜上所述，串聯(lián)質(zhì)譜法在新生兒遺傳代謝疾病篩查中，雖然確診率與常規(guī)法無顯著差異，但串聯(lián)質(zhì)譜法的確診率為100%，常規(guī)法僅為50%。因此，串聯(lián)法仍有著重要意義，可做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，為疾病診斷提供科學(xué)依據(jù)，保障新生兒健康生長發(fā)育，具有應(yīng)用價值。