溫日葵 江炎章

貧血是由多種原因引起外周血的血紅蛋白(Hb)濃度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞壓積(HCT)低于正常人參考值下限的一種癥狀；一般可分為正常細(xì)胞性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血和大細(xì)胞性貧血。貧血在兒童期是常見(jiàn)病,可使兒童生長(zhǎng)發(fā)育減慢甚至智力低下［1］。小細(xì)胞低色素性貧血是因?yàn)镠b、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)以及平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)四項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果同時(shí)下降的一種疾病,其中分別以缺鐵性貧血(IDA)和地中海貧血最為常見(jiàn)［2］。缺鐵性貧血是由于體內(nèi)缺乏鐵元素或者是體內(nèi)鐵元素的利用障礙,從而導(dǎo)致人體內(nèi)Hb 的生成不足而出現(xiàn)的貧血,根據(jù)相關(guān)研究提示［3］,我國(guó)兒童是缺鐵性貧血的高發(fā)人群,因?yàn)閮和幱谏L(zhǎng)發(fā)育期,體內(nèi)的新陳代謝快,在成長(zhǎng)過(guò)程中所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括鐵元素較成人的要多,所以缺鐵性貧血在我國(guó)也是重要防治疾病之一。地中海貧血是一種遺傳性疾病。其因是合成血紅蛋白的珠蛋白鏈減少或缺失導(dǎo)致血紅蛋白結(jié)構(gòu)異常而導(dǎo)致的貧血［4］。為了解本地區(qū)小細(xì)胞低色素性貧血兒童的主要病因,為臨床診斷和治療提供科學(xué)準(zhǔn)確的依據(jù),作者選取2019 年1 月～2020 年10 月期間在本院進(jìn)行體檢的小細(xì)胞低色素性貧血兒童進(jìn)行地中海貧血基因和鐵蛋白聯(lián)合檢測(cè),對(duì)檢測(cè)結(jié)果分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月～2020 年10 月期間60例在本院進(jìn)行體檢診斷為小細(xì)胞低色素性貧血患兒,小細(xì)胞低色素癥的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：血常規(guī)檢測(cè)平均紅細(xì)胞體積<80 fl,平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量<26 pg,平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度<320 g/L。

1.2 儀器 抽EDTA 抗凝血3 ml,采用血常規(guī)分析儀DxH800 檢測(cè)血常規(guī)；于干燥管抽3 ml 靜脈血,采用羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀E411 檢測(cè)鐵蛋白；抽枸椽酸鹽抗凝血3 ml,采用分子雜交儀檢測(cè)地中海貧血基因標(biāo)本。

1.4 檢測(cè)原理

1.4.1 鐵蛋白 電化學(xué)發(fā)光雙抗體夾心法。

1.4.2 地中海貧血基因 PCR-反向點(diǎn)雜交法。根據(jù)α 鏈珠蛋白基因(α2和α1)突變區(qū)域序列特點(diǎn),在序列保守區(qū)設(shè)計(jì)3 對(duì)高度特異的引物且5′端用生物素進(jìn)行標(biāo)記,用于檢測(cè)3 種缺失型α-地中海貧血基因突變(-SEA、-α3.7 和-α4.2)；根據(jù)α 鏈珠蛋白基因(α2)突變區(qū)域序列特點(diǎn),在序列保守區(qū)設(shè)計(jì)1 對(duì)高度特異的引物且5′端用生物素進(jìn)行標(biāo)記用于檢測(cè)3 種非缺失型α-地中海貧血基因突變(αCSα、αQSα 和αWSα)；根據(jù)β 鏈珠蛋白基因基因突變區(qū)域序列特點(diǎn),在序列保守區(qū)設(shè)計(jì)2 對(duì)高度特異的引物且5′端用生物素進(jìn)行標(biāo)記,用于檢測(cè)17 種β-地中海貧血基因突變(41-42M、-28M、654M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM)。根據(jù)檢測(cè)位點(diǎn)堿基差異,按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,設(shè)計(jì)特異性識(shí)別某種基因型的寡核苷酸探針組合,分別固定在尼龍膜的特定位置上,制成檢測(cè)膜條。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增產(chǎn)物與探針通過(guò)分子雜交反應(yīng)及顯色反應(yīng),觀察檢測(cè)膜條上各位點(diǎn)信號(hào)的有無(wú)(信號(hào)為藍(lán)色斑點(diǎn)),判斷該探針是否與PCR 產(chǎn)物雜交,從而確定待檢樣品基因型。

1.5 觀察指標(biāo) 分析小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因以及小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型。

2 結(jié)果

2.1 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因分析 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒?jiǎn)渭兊刂泻Ｘ氀?5 例,陽(yáng)性率為58.3%,單純?nèi)辫F性貧血有12 例,陽(yáng)性率為20.0%,地中海貧血合并缺鐵性貧血有9 例,陽(yáng)性率為15.0%,其他類(lèi)型有4 例,陽(yáng)性率為6.7%。見(jiàn)表1。

表1 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因分析(n,%)

2.2 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒(單純地中海貧血35 例,地中海貧血合并缺鐵性貧血9 例),其中主要基因型：α-地中海貧血有32 例,主要基因型為αα/--SEA,有26 例(59.1%)；β-地中海貧血有12 例,主要基因型為41-42M/N,有5 例(11.4%)。見(jiàn)表2。

表2 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析(n,%)

3 討論

缺鐵性貧血和地中海貧血的血常規(guī)結(jié)果常常相似,兩者都為小細(xì)胞低色素貧血,且臨床上患兒較為多見(jiàn)。地中海貧血又名海洋性貧血,因?yàn)樽畛醢l(fā)患者多為地中海沿岸民族的原因。本病是因?yàn)檫z傳的珠蛋白基因缺失,使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈合成缺如或不足所導(dǎo)致的貧血。臨床上常見(jiàn)分為α-地中海貧血和β-地中海貧血,其中α-地中海貧血可分為輕型α-地中海貧血：又包括靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型,靜止型僅有輕度α 鏈合成減少,α/β 鏈合成比約為0.9,一般無(wú)臨床癥狀；標(biāo)準(zhǔn)型有輕度貧血或紅細(xì)胞形態(tài)異常,α/β 鏈合成比約為0.6。中間型α-地中海貧血又稱為血紅蛋白H 病,因?yàn)槿笔? 個(gè)α 基因,臨床上表現(xiàn)為輕度或中度貧血,伴有肝脾腫大、黃疸。重型α-地貧又稱為胎兒水腫綜合征,因?yàn)槿笔? 個(gè)α 基因,無(wú)α 鏈合成,胎兒容易造成死胎或流產(chǎn)。β-地貧也可分輕型β 地貧,β 鏈與α 鏈比率為0.5,一般其他臨床無(wú)臨床癥狀和貧血；重型β 地貧的β 與α 兩鏈比率為0～0.3,一般有貧血、黃疸、肝脾腫大等臨床癥狀,患兒易發(fā)生感染和出血,常常會(huì)合并發(fā)生心肌炎、膽結(jié)石、下肢潰瘍性損害,容易夭折；中間型β 地貧嚴(yán)重程度介于輕型和重型之間［6-8］。地貧是人類(lèi)單基因遺傳病發(fā)病率最高的其中一種,夫妻雙方如果都是輕型地中海貧血患者,都可能生出中型或重型的地中海貧血患兒［9］。根據(jù)相關(guān)研究所示,我國(guó)α 地中海貧血者的基因型普遍以--SEA、-α3.7 和-α4.2 位點(diǎn)缺失多見(jiàn)［10］。孕婦如果懷有重型地貧胎兒,很可能會(huì)發(fā)生胎兒死于宮內(nèi),或早產(chǎn)或流產(chǎn)［8］,重型地中海貧血患兒需終生輸血,中間型地貧患者多無(wú)勞動(dòng)力或勞動(dòng)力下降［11］,所以減少中、重型地中海貧血患兒的出生會(huì)減輕家庭的不少負(fù)擔(dān)。

缺鐵性貧血是體內(nèi)一種慢性漸進(jìn)性缺鐵的發(fā)展結(jié)果。缺鐵性貧血早期一般為正常細(xì)胞性貧血,表現(xiàn)為輕度貧血,隨著病程的進(jìn)展,體內(nèi)貯存鐵慢慢消耗殆盡,紅細(xì)胞和血紅蛋白會(huì)進(jìn)一步下降,出現(xiàn)明顯的小細(xì)胞低色素性貧血,呈典型的缺鐵性貧血［12］。缺鐵性貧血臨床癥狀表現(xiàn)為部分患者可出現(xiàn)異食癖,患兒會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、易激動(dòng)、注意力不集中、智力低下［13］,指甲缺乏光澤、脆薄、易裂,出現(xiàn)口腔炎和舌炎,還有少部分患者會(huì)有輕度的脾腫大。從上述的缺鐵性貧血癥狀和危害可知,缺鐵性貧血的防治在兒童中也不容輕視。

本研究顯示,本地區(qū)小細(xì)胞低色素性貧血兒童其中單純地中海貧血基因攜帶率為58.0%,以α 地中海貧血為主,其中以αα/--SEA 基因型為主；單純?nèi)辫F性貧血占20%,地中海貧血合并缺鐵性貧血占15.0%,可見(jiàn)缺鐵性貧血的兒童比例也不低。地中海貧血在我國(guó)廣東(地中海貧血陽(yáng)性率11.07%)、廣西、四川多見(jiàn)［14］,且云浮處于廣東省經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū),有很大部分人們的生活質(zhì)量和意識(shí)不高,兒童期的小細(xì)胞低色素性貧血情況不被重視,會(huì)對(duì)兒童的成長(zhǎng)造成不可逆的傷害,因此營(yíng)養(yǎng)性貧血如缺鐵性貧血等也不容忽視［15］。地中海貧血患者體內(nèi)紅細(xì)胞的生存期比正常人紅細(xì)胞要短,在患者體內(nèi)呈慢性溶血狀態(tài),地貧患者體內(nèi)鐵元素含量是超標(biāo)的,需要進(jìn)行排鐵的治療,以前的舊觀點(diǎn)認(rèn)為,體查地中海貧血基因確診是地中海貧血患者后,一般都不做鐵蛋白的檢查,認(rèn)為該患者不會(huì)缺鐵的。其實(shí)結(jié)果不然,因?yàn)楹芏鄡和L(zhǎng)快,所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)多,還因?yàn)橛胁簧賰和瘯?huì)偏食,營(yíng)養(yǎng)不均衡,同樣會(huì)導(dǎo)致缺鐵的。

綜上所述,小細(xì)胞低色素性貧血會(huì)對(duì)患兒的生長(zhǎng)發(fā)育和生活學(xué)習(xí)造成這么多的危害,通過(guò)地中海貧血基因和鐵蛋白的同時(shí)檢測(cè),幫助臨床找出小細(xì)胞低色素性貧血兒童的正確病因,對(duì)癥治療,讓祖國(guó)的花朵有一個(gè)健康快樂(lè)的童年。