周海燕，哈瑞雯，王繼永，肖蘇萍，詹志來，王輝，梁寒峭

1.中國中藥有限公司，北京 102600；2.北京城市學院，北京 100094；3.中國中醫(yī)科學院 中藥資源中心 道地藥材國家重點實驗室培育基地，北京 100700

沒藥Myrrha為橄欖科植物地丁樹CommiphoramyrrhaEngl.和哈地丁樹C.molmolEngl.的干燥樹脂，分為天然沒藥和膠質(zhì)沒藥，味辛、苦，性平，歸心、肝、脾經(jīng)，具有散瘀定痛、消腫生肌之功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，沒藥中的主要化學成分有萜類、甾體類、黃酮類、木脂素類、長鏈脂肪醇等，其藥理作用有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)脂肪代謝、促進創(chuàng)面愈合等[2-4]。

沒藥是一種應(yīng)用廣泛、歷史悠久的天然藥物和香料，為國際上重要的藥用植物品種，相關(guān)產(chǎn)品涉及醫(yī)藥、食品、化妝品、香料等多個領(lǐng)域。我國為沒藥進口大國，貨源主要來自索馬里、埃塞俄比亞以及阿拉伯半島。受品種、產(chǎn)地、采收加工、貯藏等的差異影響，市場上的沒藥質(zhì)量參差不齊，時有摻假、摻雜問題。《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2020年版中制定了沒藥性狀、鑒別、雜質(zhì)、總灰分、酸不溶性灰分檢測標準，并以揮發(fā)油含量作為沒藥的質(zhì)量評價指標[1]。此標準實施過程簡單易行，但不可用來鑒別沒藥的基原，也無法衡量藥材的品質(zhì)優(yōu)劣。隨著近年來沒藥特有的化學成分被發(fā)現(xiàn)和鑒定，成分與質(zhì)量的相關(guān)性日益受到關(guān)注。鑒于此，本文對近年來沒藥的混偽品研究現(xiàn)狀、質(zhì)量分析方法及國內(nèi)外質(zhì)量標準進行了歸納總結(jié)，為建立科學、合理的沒藥藥材質(zhì)量評價方法提供參考。

1 混偽品研究現(xiàn)狀

沒藥屬(CommiphoraJacq.)植物約150個種[5]，地丁樹和哈地丁樹為《中國藥典》2020年版記載的沒藥正品來源[1]，其他沒藥屬植物的樹脂也常作為商品沒藥使用[5-6]?！度珖胁菟巺R編》[7]、《新編中藥志》[8]和《中華本草》[9]將沒藥基原擴展為沒藥屬植物。于新蘭等[10]通過查閱國內(nèi)外藥品質(zhì)量標準、植物學專著和相關(guān)文獻，對天然沒藥、膠質(zhì)沒藥和穆庫沒藥的原植物進行考證，得出天然沒藥的原植物主要為C.myrrha，膠質(zhì)沒藥的原植物主要為C.erythraea(Ehrenb.)Engl.，穆庫沒藥的原植物為C.mukul(Hook.ex Stocks)Engl.。

沒藥原植物均系低矮灌木或小喬木，源于野生，周邊常與其他可分泌樹脂的類似植物共生，產(chǎn)地采收時常不加選擇，導致原裝貨中混有不可供藥用的樹脂[11]。近年來，隨著沒藥飲片價格上漲，摻偽現(xiàn)象日趨嚴重，市場上沒藥時有以松香、樹皮、泥沙、其他雜膠等摻假問題，嚴重影響了藥品的安全和質(zhì)量[12]。松香(即松脂的提取物)是沒藥常見的摻假物質(zhì)，早在明代《本草乘雅半偈》就有“市肆多用松脂、瀝青，偽造入藥，殊為患也”的記載[13]。江先文等[14]應(yīng)用理化和紫外鑒別手段鑒別沒藥中的松香。張文婷等[12]通過天然沒藥與膠質(zhì)沒藥高效液相色譜(HPLC)特征圖譜色譜峰的匹配來判斷是否為摻偽沒藥。李哲等[15]按照《中國藥典》2015年版一部和2011年國家藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件(沒藥中松香酸檢測)，連續(xù)2年對129批次沒藥的性狀、鑒別、檢查、含量等項目進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥品生產(chǎn)、經(jīng)營和使用環(huán)節(jié)均存在沒藥質(zhì)量不合格現(xiàn)象，其中揮發(fā)油和酸不溶性灰分的不合格率最高，分別為38.8%和37.2%，其次是松香酸，不合格率為15.2%。2013—2016年全國中藥材及飲片的專項抽驗工作中抽檢了204批沒藥，其中99批不合格，不合格率為48.5%，不合格項目為雜質(zhì)、含量、總灰分、性狀、檢出松香酸[16]。

2 質(zhì)量分析方法

《中國藥典》2020年版一部以揮發(fā)油的定量作為沒藥藥材的質(zhì)量評價指標，規(guī)定天然沒藥中揮發(fā)油不得少于4.0%，膠質(zhì)沒藥不得少于2.0%。此標準實施簡單易行，但評價指標單一，無法從整體上評價沒藥質(zhì)量。將中藥標準采用圖譜的形式生動直觀地展現(xiàn)出來，讓標準簡單清晰地表達出來，更容易被接受和理解，這是“深入研究，淺出標準”這一理念最好的表現(xiàn)形式[17]。建立指紋圖譜(或特征圖譜)結(jié)合多成分含量測定是中藥質(zhì)量控制的重要組成部分，可用于沒藥質(zhì)量標準的提升。目前，特征圖譜或指紋圖譜已逐漸應(yīng)用到?jīng)]藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別中。

2.1 薄層色譜法

陳黃保等[18]通過薄層色譜法對天然沒藥和膠質(zhì)沒藥進行研究和比較，發(fā)現(xiàn)兩者色譜完全不同，該方法重現(xiàn)性好，專一性強，可用于兩者的鑒別。

2.2 液相色譜法

張文婷等[12]通過HPLC分別建立天然沒藥與膠質(zhì)沒藥的特征指紋圖譜，標定了天然沒藥7個特征峰和膠質(zhì)沒藥2個特征峰，發(fā)現(xiàn)天然沒藥和膠質(zhì)沒藥的成分存在明顯差異，提示可通過特征圖譜檢查識別天然沒藥或膠質(zhì)沒藥，同時也能通過色譜峰的匹配，判斷是否為摻偽沒藥。李霞等[19]采用HPLC建立沒藥藥材的特征圖譜，確定了9個共有峰，對14批沒藥藥材及天然沒藥、膠質(zhì)沒藥對照藥材的指紋圖譜進行分析，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地不同批次的藥材之間質(zhì)量雖然存在差異，但仍具有較好的相關(guān)性，為沒藥的基原鑒定和質(zhì)量評價提供了參考。宿樹蘭等[20]采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器法(HPLC-PDA)建立了非揮發(fā)性成分的特征圖譜，標出52個共有峰；相似度分析結(jié)果表明，不同批次沒藥藥材相似度較低；主成分分析結(jié)果表明，倍半萜烯類成分、二萜酸和有機酸酯類成分對藥材品質(zhì)起到主導作用。

倍半萜類化合物是沒藥揮發(fā)油的主要成分之一，具有重要的生物功能和生理活性，其相對含量與沒藥藥材質(zhì)量密切相關(guān)。已有研究者以沒藥倍半萜為標準建立檢測沒藥品質(zhì)的方法。陳露等[21]采用HPLC同時測定沒藥中相對-1S，2S-環(huán)氧-4R-呋喃大根香葉-10(15)-烯-6-酮、[1(10)E，2R，4R]-2-甲氧基-8，12-環(huán)氧大根香葉-1(10)，7，11-三烯-6-酮和莪術(shù)酮3個倍半萜類化合物含量。但目前針對倍半萜類化合物的沒藥質(zhì)量評價尚無科學明確的標準，僅通過1個或幾個倍半萜成分的檢測，暫時也無法合理地對沒藥質(zhì)量進行評價。多成分含量測定在沒藥研究中較少，迄今尚無其他類成分如二萜、三萜類化合物研究。

2.3 氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)

沒藥中揮發(fā)油質(zhì)量分數(shù)為2.5%～9.0%[20]，是沒藥發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抑制子宮平滑肌收縮、抑制芳香化酶活性等作用[22-23]。目前多采用纖維素酶提取法[24]、水蒸氣蒸餾提取法[20，24-26]、超臨界CO2萃取法(SFE-CO2)[26]、索氏提取法[26]、超聲提取法[26]等方法提取沒藥揮發(fā)油，并通過GC-MS分析和鑒定揮發(fā)油的化學成分及其相對含量。研究結(jié)果表明，沒藥揮發(fā)油成分、相對含量與其提取方法、來源、產(chǎn)地等密切相關(guān)，但多為單萜、倍半萜和鏈狀芳香族化合物(烷烴、醇、酯及羧酸)。陳華等[24]利用GC-MS對纖維素酶提取法(CE)和水蒸氣蒸餾提取法(DSE)提取的沒藥揮發(fā)油化學成分進行分析，從中分別鑒定出34個和38個化學成分，各化學成分在揮發(fā)油中的質(zhì)量分數(shù)分別為70.05%和67.95%，共同組分中含量最多的是乙酸辛酯和辛醇。宿樹蘭等[20]采用GC-MS分析鑒定了沒藥揮發(fā)油中28個化學成分，以單萜、倍半萜和有機酸酯類成分為主。符繼紅等[25]利用水蒸氣蒸餾法提取沒藥藥材中揮發(fā)油成分，運用GC-MS分析鑒定了42個成分，占揮發(fā)性物質(zhì)的87.46%，萜烯類及其衍生物占較大比例，主要有α-香檸檬烯(12.52%)、β-蛇床烯(8.75%)、β-紅沒藥烯(10.03%)、2-羥基-2，4，6-環(huán)庚三烯-1-酮(6.25%)等。王勇等[26]發(fā)現(xiàn)SFE-CO2優(yōu)于水蒸氣蒸餾提取法、索氏提取法、超聲提取法，其萃取物得率和β-欖香烯質(zhì)量分數(shù)較高，且萃取物中成分種類多。

3 國內(nèi)外藥典中沒藥及其制品的質(zhì)量標準

沒藥是國際上廣泛使用的藥用植物品種，被多個國家及地區(qū)標準收錄。對比分析《中國藥典》[1](下文中均指2020年版)、我國臺灣地區(qū)的《臺灣中藥典》[27](以下簡稱“臺灣標準”)、《美國藥典》[28]及《歐洲藥典》[29]中沒藥質(zhì)量標準之間的異同點，見表1?；矫?，“臺灣標準”、《美國藥典》及《歐洲藥典》的沒藥來源均為沒藥屬植物，《中國藥典》僅收載橄欖科植物地丁樹和哈地丁樹2個品種。性狀描述時，各標準對沒藥的性狀分別從形狀、大小、顏色、質(zhì)地、氣味等宏觀方面進行描述，盡管《中國藥典》和“臺灣標準”將天然沒藥、膠質(zhì)沒藥分類敘述且內(nèi)容一致，《美國藥典》和《歐洲藥典》未進行區(qū)分，但總的來說各標準間的性狀描述沒有明顯差異。鑒別方面，《中國藥典》和《美國藥典》仍用到了顯色反應(yīng)；《歐洲藥典》對粉末顯微形態(tài)特征等進行了鑒別描述；各標準均采用了薄層鑒別，但在制備方法、展開劑、比對物質(zhì)等方面均有區(qū)別(表2)；在驗收標準上，《美國藥典》《歐洲藥典》均采用對照品作為對照物質(zhì)，通過薄層條帶位置及顏色來鑒別與檢識待測物質(zhì)。檢查項下，《中國藥典》、“臺灣標準”及《美國藥典》均進行了總灰分、酸不溶性灰分要求，《歐洲藥典》僅進行總灰分檢測，比較而言《美國藥典》對總灰分、酸不溶性灰分要求更細致，《歐洲藥典》要求最高；《美國藥典》規(guī)定雜質(zhì)不得超過2%，雖未同《中國藥典》對天然沒藥和膠質(zhì)沒藥的雜質(zhì)分類規(guī)定，但要求相當嚴格；“臺灣標準”二氧化硫指標的要求和《中國藥典》相同，未規(guī)定雜質(zhì)要求，但增設(shè)了總重金屬含量限度檢查；《歐洲藥典》相對《中國藥典》增設(shè)了干燥失重、醇不溶性物質(zhì)的檢查。含量測定中，《中國藥典》以揮發(fā)油含量作為評價指標，規(guī)定揮發(fā)油天然沒藥不得少于4.0%，膠質(zhì)沒藥不得少于2.0%；“臺灣標準”則要求稀乙醇抽提物質(zhì)量分數(shù)≥10.0%，水抽提物≥21.0%；《美國藥典》中使用了揮發(fā)油、醇溶性提取物和水溶性提取物進行質(zhì)控，其要求明顯高于《中國藥典》的含量標準；《歐洲藥典》未進行相關(guān)含量測定。

表1 各標準中沒藥標準比較

4 討論

沒藥是我國進口中藥材的重點品種之一[30]，其藥材、飲片及中成藥制品已步入產(chǎn)業(yè)化進程?！吨袊幍洹肥蛰d的沒藥基原、鑒別、檢查、含量測定等指標與國外藥典標準、國內(nèi)外相關(guān)著作、文獻均存在差異，尚沒有形成統(tǒng)一的基于特征性化學成分的質(zhì)量標準。在中藥標準化及質(zhì)量溯源體系構(gòu)建的總體要求下，首先有必要理清沒藥品種，確定沒藥質(zhì)量標準體系構(gòu)建的基石；其次，目前對沒藥及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制多限于浸出物和揮發(fā)油測定的含量標準，無法控制藥材整體質(zhì)量，有必要在沒藥特征性化學成分逐漸清晰并增多的研究基礎(chǔ)上，開展沒藥真?zhèn)蝺?yōu)劣與相關(guān)成分含量之間的相關(guān)性研究，建立多點控制、專屬性強的相關(guān)成分分析和含量測定方法；再次，完善安全性指標，如重金屬、非法添加物，以確保沒藥臨床用藥的安全性和有效性；最后，作為我國常用的傳統(tǒng)進口樹脂類中藥，構(gòu)建完善的沒藥質(zhì)量標準體系，主導沒藥國際標準的制定，從而引領(lǐng)國際。綜上所述，建立沒藥指紋圖譜、多成分含量的標準，完善安全性指標，建立科學、合理、簡便、可行質(zhì)量標準具有極為重要的意義。

表2 各標準中沒藥薄層鑒別方法