王 力，賀 文，王麗娟，許 偉，石 鵬，高武臣，馬 杰

（1.慶陽市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 慶陽 745000；2.華池縣動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 慶陽 745600；3.慶城縣動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 慶陽 745100）

1 材料與方法

1.1 試驗群體與分組

場群1為華池縣懷安鄉(xiāng)糖坊咀村一養(yǎng)羊農(nóng)民專業(yè)合作社，飼養(yǎng)動物為湖羊，存欄1 200只，隨機選取6月齡臨床健康、膘情良好的湖羊120只，隨機分成4組進行免疫試驗。A組免疫芻痘靈活疫苗、B組免疫小反芻獸疫活疫苗、C組免疫山羊痘活疫苗、D組免疫小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗。

場群2為慶城縣南莊鄉(xiāng)六寸塬村一養(yǎng)羊農(nóng)民專業(yè)合作社，飼養(yǎng)動物為湖羊，存欄2 100只，隨機選取6月齡左右臨床健康、膘情良好的湖羊120只，隨機分成4組進行免疫試驗。E組免疫芻痘靈活疫苗、F組免疫小反芻獸疫活疫苗、G組免疫山羊痘活疫苗、H組免疫小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗。

其中，小反芻獸疫活疫苗免疫組、山羊痘活疫苗免疫組、小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗組合免疫組為對照組。試驗羊只前期未免疫過小反芻獸疫、羊痘等疫苗。

1.2 羊只管理

為方便試驗開展，試驗羊全部舍飼，根據(jù)分組情況對試驗羊只進行噴碼標記，不同試驗組羊只分欄飼養(yǎng)。每天飼喂3～4次、自由飲水，注重日常清潔和圈舍消毒，及時清理羊糞，每周消毒1～2次，重點消毒羊舍內(nèi)部過道、欄桿、墻面以及羊床漏縫板。

1.3 疫苗使用

芻痘靈活疫苗由國藥集團揚州威克生物工程有限公司生產(chǎn)，尾部皮內(nèi)注射，劑量1頭份/只，生產(chǎn)批號為C0920009，有效期至2022年2月15日。小反芻獸疫活疫苗由天康生物股份有限公司生產(chǎn)，頸部肌肉注射，劑量1頭份/只，生產(chǎn)批號為202026-1，有效期至2022年7月1日。山羊痘活疫苗由山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，尾部皮下注射，劑量1頭份/只，生產(chǎn)批號為2005005，有效期至2021年11月17日。免疫試驗使用的各種疫苗均嚴格按照說明書進行操作，注射前后采取消毒措施，用注射器吸取疫苗液后確保排空空氣，并且保證免疫同組羊只注射同種疫苗量一致，做到“一畜一針”，注射完成后規(guī)范處置廢棄物。

1.4 試驗安全性和生產(chǎn)性能評價

在免疫后3 d內(nèi)以及第7天、第14天、第21天、第28天持續(xù)對各試驗組的羊只進行體溫監(jiān)測，每天多次觀察試驗組的羊只精神食欲狀況、有無不良反應(yīng)和應(yīng)激死亡等現(xiàn)象，詳細做好各項安全性評價記錄。每周查看羊只膘情，稱量體重并記錄。

1.5 采樣檢測與結(jié)果判定

分別于免疫前和免疫后第7天、第14天、第21天、第28天采集血清在實驗室進行免疫抗體效價檢測，試驗過程每次采樣保證羊只與信息對應(yīng)一致，詳細記錄采樣登記表，采樣、實驗室檢測期間注重人員防護，嚴格穿戴防護服、口罩、鞋套等。試驗羊只在疫苗試驗前期經(jīng)過布魯氏菌病抗體檢測，結(jié)果均為陰性。小反芻獸疫抗體檢測采用小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，批號為020172008，由青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)；山羊痘免疫抗體檢測采用羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒，批號為20200904119-1，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。所有試劑盒的使用均嚴格按照說明書進行操作和試驗結(jié)果判定。在保證各項試驗成立的前提下，小反芻獸疫被檢血清PB（阻斷率）>50，結(jié)果為抗體陽性，否則為陰性；羊痘間接ELISA抗體檢測被檢血清OD450值≥0.25時，結(jié)果為抗體陽性，如果被檢血清OD450值介于0.2和0.25之間，重復(fù)檢測1次，若復(fù)檢血清OD450值≥0.23，則判定為抗體陽性，否則為陰性。免疫羊群抗體陽性率（免疫合格率）≥70%，判定為疫苗免疫合格。

2 結(jié)果

各試驗組羊只免疫前通過采集血清進行小反芻獸疫、羊痘抗體檢測，結(jié)果均為陰性。

2.1 芻痘靈活疫苗免疫組抗體檢測

免疫第7 天小反芻獸疫抗體陽性率為93.33%，羊痘抗體陽性率為36.67%；第14天小反芻獸疫抗體陽性率為100%，羊痘抗體陽性率為93.33%；第21天小反芻獸疫抗體陽性率為100%，羊痘抗體陽性率為95.00%；第28天小反芻獸疫抗體陽性率為96.67%，羊痘抗體陽性率為86.67%（見表1）。

表1 芻痘靈活疫苗免疫效果及對照組實驗室檢測數(shù)據(jù)匯總

2.2 小反芻獸疫活疫苗免疫組抗體檢測

免疫第7天抗體陽性率為81.67%，第14天抗體陽性率為98.33%，第21天抗體陽性率為98.33%，第28天抗體陽性率為96.67%（見表1）。

2.3 山羊痘活疫苗免疫組抗體檢測

免疫7天后抗體陽性率為28.33%，第14天抗體陽性率為90.00%，第21天抗體陽性率為91.67%，第28天抗體陽性率為90.00%（見表1）。

2.4 小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗組合免疫組（同時分點注射）抗體檢測

免疫第7 天小反芻獸疫抗體陽性率為85.00%，羊痘抗體陽性率為45.00%；第14天小反芻獸疫抗體陽性率為98.33%，羊痘抗體陽性率為93.33%；第21天小反芻獸疫抗體陽性率為98.33%，羊痘抗體陽性率為86.67%；第28天小反芻獸疫抗體陽性率為95.00%，羊痘抗體陽性率為83.33%（見表1）。

3 討論與結(jié)論

在免疫后3 d內(nèi)以及第7天、第14天、第21天、第28天持續(xù)對各試驗組羊只進行體溫監(jiān)測，以及每天對試驗羊只進行表象觀察，各組試驗羊只免疫后每次測量體溫均屬于正常范圍，整體精神狀態(tài)良好，食欲正常，膘情較好，沒有出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)和應(yīng)激死亡等現(xiàn)象。

分別于免疫后第7天、第14天、第21天、第28天進行采樣實驗室檢測，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，試驗羊群免疫芻痘靈活疫苗后第14～21天小反芻獸疫、羊痘抗體陽性率達到峰值，分別為100%和95%，第28天檢測，兩種疫病抗體陽性率有所下降，但仍處于較高水平。

芻痘靈活疫苗免疫較單苗免疫（小反芻獸疫活疫苗免疫、山羊痘活疫苗免疫）抗體產(chǎn)生更快，免疫第14～21天抗體陽性率更高；芻痘靈活疫苗免疫較小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗組合免疫（同時分點注射）抗體陽性率略高；單苗免疫較芻痘靈活疫苗免疫、小反芻獸疫活疫苗+山羊痘活疫苗組合免疫（同時分點注射）抗體產(chǎn)生較慢，但抗體水平達到峰值后衰減較慢。

從試驗情況來看，免疫芻痘靈活疫苗羊只小反芻獸疫、羊痘免疫抗體陽性率都較高，且未見明顯的不良反應(yīng)，膘情保持較好，證明了芻痘靈活疫苗有較好的安全性和較強的免疫效果，加之經(jīng)濟性等優(yōu)勢，具有一定的推廣意義，建議先小范圍免疫使用，若各方面表現(xiàn)良好，可逐步擴大應(yīng)用范圍。