王 園 ,師 錦 ,謝曉妍 ,陳丙生 ,周雙海 *
(1.北京農(nóng)學(xué)院動物科技學(xué)院,北京 102206;2.大興區(qū)畜牧技術(shù)推廣站,北京 102602)
豬細(xì)環(huán)病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是近年來發(fā)現(xiàn)的又一種很小的單股環(huán)狀DNA病毒,屬于指環(huán)病毒科,最早于1999年報(bào)道在豬體內(nèi)檢出。目前TTSuV有TTSuV1和TTSuV2兩種血清型,已有研究報(bào)道顯示,TTSuV1單獨(dú)感染可引起仔豬出現(xiàn)一定的病理變化[1],TTSuV1與豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)或豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)共同感染可促進(jìn)豬皮炎與腎病綜合征或斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的發(fā)生[2-3],提示TTSuV1具有潛在致病性,同時也提示TTSuV1與PRRS或豬圓環(huán)病毒病發(fā)生之間可能存在一定關(guān)聯(lián)性。有報(bào)道顯示TTSuV1在臨床上的檢出率比較高[4];同時,在當(dāng)前的國內(nèi)規(guī)?;i場,PRRSV感染與PCV2感染都非常普遍,PRRS與豬圓環(huán)病毒病也都時有發(fā)生,是當(dāng)前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的2種主要傳染病。因此,為了更加有效地防控PRRS與豬圓環(huán)病毒病,有必要了解當(dāng)前規(guī)模化豬場中TTSuV1感染的流行情況。
京津冀地區(qū)、華東地區(qū)、華南地區(qū)15個規(guī)?;i場578頭斷奶仔豬血清均采集分離于2020年。
檢測TTSuV1抗體的ELISA試劑由北京農(nóng)學(xué)院動物疫病研究室提供[5],病毒DNA提取試劑盒與PCR試劑分別為天根生化科技(北京)有限公司與北京康為世紀(jì)生物科技有限公司產(chǎn)品,檢測TTSuV1核酸的引物(上游引物序列為5′-CGGGTTCAGGA GGCTCAATT-3′、下游引物序列為5′-GCCATTCGGAACTG CACTTACT-3′)[5]由生工生物工程(上海)有限公司合成。
病毒抗體檢測與病毒DNA提取按照其試劑盒說明書操作。病毒核酸檢測采用PCR方法。病毒DNA提取按照其試劑盒說明書操作;PCR擴(kuò)增采用20 μL反應(yīng)體系,其中含有10 pmol上游引物、10 pmol下 游 引 物、5 μL病 毒DNA;PCR增程序?yàn)椋?5 ℃ 3 min,95 ℃ 25 s、55 ℃ 25 s、72 ℃ 25 s、共40次循環(huán),72 ℃ 9 min;PCR產(chǎn)物分析是在PCR擴(kuò)增結(jié)束后,取10 μL擴(kuò)增產(chǎn)物置于1.8%瓊脂糖凝膠上電泳,之后在凝膠成像儀上觀察是否有特異性目的條帶。
檢測了國內(nèi)部分地區(qū)15個豬場的578頭保育豬,病毒核酸與抗體檢測結(jié)果(表1)顯示,豬細(xì)環(huán)病毒1型的核酸與抗體的豬場陽性率均為100%;核酸陽性率介于14.29%~100%之間,總體陽性率為73.88%;抗體陽性率介于14.29%~100%之間,總體陽性率為78.55%;雖然抗體總體陽性率高于核酸總體陽性率,但二者之間并無顯著差異(P>0.05)。
表1 病毒核酸與抗體檢測結(jié)果
比較分析同一個豬場的病毒核酸陽性率和病毒抗體陽性率后發(fā)現(xiàn),僅有1個豬場的兩種陽性率正好相等,而絕大多數(shù)豬場的兩種陽性率并不完全一致,其占比達(dá)到93.33%(14/15);其中,病毒抗體陽性率高于病毒核酸陽性率的有60%(9/15),而病毒核酸陽性率高于病毒抗體陽性率的只有33.33%(5/15)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),大多數(shù)豬場的病毒核酸陽性率和病毒抗體陽性率都超過50%,占比達(dá)到86.67%(13/15),其中超過80%的占53.33%(8/15);都低于50%的僅占13.33%(2/15),其中1個豬場都低于20%。
目前國內(nèi)檢測豬細(xì)環(huán)病毒1型(TTSuV1)感染絕大多數(shù)采用PCR方法,但此方法是通過檢測病毒核酸來直接檢測病毒,這對正處于病毒感染階段且體內(nèi)具有一定病毒含量的個體是易于檢出的,但對感染過程已經(jīng)結(jié)束或者感染雖然持續(xù)存在但體內(nèi)病毒含量很低的個體則難以檢出,而抗體檢測則可以解決這個難題,故兩種方法聯(lián)合使用無疑會使檢測結(jié)果更加全面和準(zhǔn)確。聯(lián)合應(yīng)用PCR方法和ELISA方法對來源于京津冀、華東六省、華南兩省共11個省市15個規(guī)模化豬場的578份血清的檢測結(jié)果顯示,核酸與抗體的豬場陽性率都是100%,充分顯示所有檢測豬場均存在TTSuV1感染。檢測個體核酸的總體陽性率為73.88%,檢測個體抗體的總體陽性率為78.72%,雖然兩種方法的檢測結(jié)果之間存在一定差別,但沒有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明兩種方法的檢測結(jié)果基本一致。
進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),TTSuV1感染率超過50%以上的豬場達(dá)到85%以上,超過80%的豬場占50%以上,而低于20%的豬場不足10%。王礞礞等[6]對2008—2009年7個省份的258份樣品進(jìn)行PCR檢測后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為37.6%,李俊等[7]對2009—2010年山東省10個豬場的230份樣品進(jìn)行PCR檢測后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為45.2%,王俊等[4]對2014年京津地區(qū)的60份斷奶仔豬樣品進(jìn)行熒光定量PCR檢測后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為36.7%,這些資料顯示前些年TTSuV1在我國不少地區(qū)豬群中已有不低的感染率,此次調(diào)查顯示出更高的TTSuV1感染率,進(jìn)一步說明TTSuV1在我國不少地區(qū)豬群中廣泛流行。一些文獻(xiàn)報(bào)道TTSuV1與PRRSV或 PCV2共同感染可促進(jìn)相關(guān)疾病發(fā)生[2-3],豬圓環(huán)病毒病豬體內(nèi)TTSuV1載量明顯高于健康豬[8],臨床感染了TTSuV1的仔豬對PRRS疫苗的免疫反應(yīng)明顯降低[9],這些文獻(xiàn)綜合提示TTSuV1感染具有潛在協(xié)同致病性。因此,在當(dāng)前PRRSV感染與PCV2感染都普遍流行的背景下,臨床上TTSuV1的高感染率值得適當(dāng)關(guān)注。