杜 強，洪 鍇，潘伯臣△

(1. 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心， 沈陽 110004； 2. 北京大學(xué)第三醫(yī)院泌尿外科， 北京 100191)

男性生殖道感染是全球性的公共衛(wèi)生問題[1]。由淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)以外的其他病原體感染而引起的非淋球菌性生殖道感染臨床上十分常見，但是約有20%～50%的感染者并沒有明顯臨床癥狀[2]，只能依靠篩查發(fā)現(xiàn)。實施輔助生殖技術(shù)助孕前，需要排除生殖道沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)和解脲支原體(Ureaplasmaurealyticum)感染。隨著診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展，傳統(tǒng)的培養(yǎng)法以及免疫學(xué)方法因技術(shù)上操作困難且漏診率高，已逐漸被分子診斷所取代。實時熒光核酸恒溫擴增(simultneous amplification and testing，SAT)是在RNA恒溫擴增基礎(chǔ)上開發(fā)的可同時檢測體液和拭子的新一代核酸檢測技術(shù)(SAT-RNA法)[3]，其具有準(zhǔn)確、快速的特點。本研究擬采用SAT-RNA技術(shù)對門診就診的輔助生殖患者進行體液標(biāo)本檢測，并與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)-DNA(PCR-DNA法)檢測尿道拭子標(biāo)本結(jié)果進行對比，旨在為臨床檢測沙眼衣原體、解脲支原體的方法選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年4月至2017年4月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的因女方因素擬行體外受精-胚胎移植助孕的163例男性為研究對象，年齡24～50歲，均簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集

采集163例男性的尿液標(biāo)本，具體方法為：取清晨首次尿或長時間(>1 h)不排尿的首段尿0.5 mL，與0.5 mL試劑盒中的樣本保存液混合作為待測標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上海仁度生物科技有限公司試劑盒說明書操作。

常規(guī)留取尿液后，對其中109例符合當(dāng)天采集精液標(biāo)本條件者進行精液采集，方法為：將拭子頭放入無菌采集的精液標(biāo)本中攪動一圈，貼管壁取出，與0.5 mL試劑盒中的樣本保存液混勻作為待測標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上海仁度生物科技有限公司試劑盒說明書操作。

按輔助生殖助孕要求，163例均行尿道分泌物檢查，以排除沙眼衣原體和解脲支原體感染。具體方法為：以拇指、食指輕輕張開尿道外口，將醫(yī)用棉拭子插入尿道中2～3 cm，輕輕轉(zhuǎn)動，停留數(shù)秒后取出，將其放入標(biāo)有患者編號的取樣管中作為待測標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上?？迫A生物工程股份有限公司試劑盒說明書操作。

1.3 檢測方法

PCR-DNA法：使用上海科華生物工程股份有限公司的沙眼衣原體和解脲支原體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)，對163例男性尿道拭子標(biāo)本進行相應(yīng)病原體的檢測，操作過程嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

SAT-RNA法：使用上海仁度生物科技有限公司沙眼衣原體和解脲支原體核酸檢測試劑盒，對163例男性尿液標(biāo)本和109例精液標(biāo)本進行相應(yīng)病原體的檢測，操作過程嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。各組計數(shù)資料用率表示，組間比較采用配對χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Kappa值>0.8時表明一致性極好，Kappa值在0.6～0.8時表明有較好的一致性。

2 結(jié)果

2.1 不同方法檢測生殖道解脲支原體結(jié)果比較

163例中，PCR-DNA法檢測尿道拭子解脲支原體陽性77例(陽性率47.24%)，SAT-RNA法檢測尿液標(biāo)本解脲支原體陽性78 例(陽性率47.85%)，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0，P>0.05)，兩種方法檢測結(jié)果的符合率為 93.25%，陽性符合率93.51%，陰性符合率 93.02%，檢驗結(jié)果一致性極好(Kappa值0.865，表1)。

表1 不同方法檢測生殖道解脲支原體結(jié)果比較Table 1 Comparison of different detection methods for Ureaplasma urealyticum in male genital tract

2.2 不同方法檢測生殖道沙眼衣原體結(jié)果比較

163例中，PCR-DNA法檢測尿道拭子沙眼衣原體陽性5例(陽性率3.07%)，SAT-RNA法檢測尿液標(biāo)本沙眼衣原體陽性7例(陽性率4.29%)，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.25，P>0.05)，兩種方法檢測結(jié)果符合率為97.55%，陽性符合率80.00%，陰性符合率98.10%，檢驗結(jié)果一致性較好(Kappa值0.654，表2)。

表2 不同方法檢測生殖道沙眼衣原體結(jié)果比較Table 2 Comparison of different detection methods for Chlamydia trachomatis in male genital tract

2.3 SAT-RNA法檢測不同標(biāo)本解脲支原體結(jié)果比較

對109例男性尿液標(biāo)本和精液標(biāo)本解脲支原體檢測結(jié)果進行比較，發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本解脲支原體陽性55例(陽性率50.46%)，精液標(biāo)本解脲支原體陽性49 例(陽性率44.95%)，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.08，P>0.05)，兩種標(biāo)本檢測結(jié)果符合率為88.99%，陽性符合率 93.88%，陰性符合率85.00%，檢驗結(jié)果一致性較好(Kappa值0.780，表3)。

表3 SAT-RNA法檢測不同標(biāo)本中解脲支原體結(jié)果比較Table 3 Comparison of SAT-RNA detection of Ureaplasma urealyticum in different samples of the male genital tract

2.4 SAT-RNA法檢測不同標(biāo)本沙眼衣原體結(jié)果比較

對109例男性尿液標(biāo)本和精液標(biāo)本的沙眼衣原體檢測結(jié)果進行比較，發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本沙眼衣原體陽性6例(陽性率5.50%)，精液標(biāo)本沙眼衣原體陽性4 例(陽性率 3.67%)，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.5，P>0.05)，兩種標(biāo)本的檢測結(jié)果符合率為 98.17%，陽性符合率 100.00%，陰性符合率98.10%，檢驗結(jié)果一致性較好(Kappa值0.791，表4)。

表4 SAT-RNA法檢測不同標(biāo)本中沙眼衣原體結(jié)果比較Table 4 Comparison of SAT-RNA detection of Chlamydia trachomatis in different samples of the male genital tract

3 討論

依據(jù)進行輔助生殖助孕基本要求，排除生殖道感染是進入輔助生殖周期前的基本檢查[4]。男女一方患有生殖泌尿系統(tǒng)急性感染或性傳播疾病均為實施輔助生殖技術(shù)的禁忌癥，并將影響助孕的成功率[5]。研究表明,約有20%～50%的感染者沒有明顯臨床癥狀，不能僅憑癥狀和體征判斷病原體的存在。解脲支原體和沙眼衣原體是臨床最常見的兩種導(dǎo)致非淋菌性尿道炎的病原體[6-7]，并且會對生育產(chǎn)生負面影響[8-10]。相比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法[11]，采用核酸擴增方法可顯著提高對生殖道病原微生物的檢出率，有利于對感染患者采取迅速的診斷和恰當(dāng)?shù)闹委焄12-13]。

分子檢測技術(shù)以DNA和RNA檢測為主要代表。本研究對163例男性采用PCR-DNA法檢測尿道拭子和SAT-RNA法檢測尿液標(biāo)本的結(jié)果進行對比，發(fā)現(xiàn)兩種方法對沙眼衣原體、解脲支原體的檢出率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，檢測結(jié)果的一致性較好，說明兩種方法均可實現(xiàn)對常規(guī)體檢者沙眼衣原體、解脲支原體的快速、準(zhǔn)確診斷?？紤]到男性尿道神經(jīng)分布的特點，拭子標(biāo)本的采集勢必引起患者的疼痛和不適，甚至有導(dǎo)致醫(yī)源性尿道損傷的風(fēng)險[14]，而SAT-RNA法因可以使用尿液或精液標(biāo)本，具有無創(chuàng)、方便的優(yōu)點，不僅可以更好地保護患者，減輕患者痛苦，而且也能減少臨床醫(yī)生的工作量，更適用于人群篩查[15]。此外，由于RNA僅在活的病原體中存在，故以RNA為靶標(biāo)的診斷技術(shù)還可以反映病原體的存活狀態(tài)，為監(jiān)測療效及指導(dǎo)臨床精準(zhǔn)醫(yī)療提供了有力保障[2]。

本研究還對采用SAT-RNA法檢測不同標(biāo)本(尿液和精液)的沙眼衣原體、解脲支原體結(jié)果進行比較，發(fā)現(xiàn)兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，檢測結(jié)果具有較好的一致性，提示臨床上可以使用不同標(biāo)本進行沙眼衣原體、解脲支原體的檢測。以往的研究也證實，尿液和尿道拭子在男性受試者中檢測的一致性幾乎可達100%[16]，與本研究得出的結(jié)論相似。盡管如此，我們還是能夠看到，不論是解脲支原體還是沙眼衣原體，使用尿液標(biāo)本的檢測陽性率更高，尤其是對沙眼衣原體來說，所有精液標(biāo)本檢測結(jié)果為陽性的4例患者，其尿液標(biāo)本檢測結(jié)果均為陽性，而尿液標(biāo)本檢測陽性的2例患者，其精液標(biāo)本檢測為陰性，這可能與病原體感染的位置不同有關(guān)，亦可能受到檢測試劑和檢測方法的影響。因此，我們認為尿液標(biāo)本檢測可能避免漏檢。

此外，SAT-RNA法還可同時進行生殖支原體(Mycoplasmagenitalium)的檢測[17]，但因PCR-DNA法無法檢測生殖支原體，故本研究未涉及此部分內(nèi)容。有研究表明，生殖支原體可能是影響精子質(zhì)量的重要參數(shù)，會顯著降低精液量和精子濃度，積極防治生殖支原體感染將有助于預(yù)防男性不育[18-19]。不同人群生殖支原體感染率大相徑庭[20]，將來應(yīng)進一步分析生育人群生殖支原體感染情況，以評價生育人群生殖支原體檢測的意義。

綜上所述，SAT-RNA法與PCR-DNA法檢測生殖道沙眼衣原體、解脲支原體有良好的一致性；相比PCR-DNA法，SAT-RNA法可用于尿液或精液標(biāo)本的檢測，具有采樣方便、無創(chuàng)等優(yōu)勢，更適宜臨床應(yīng)用，值得推廣。