何穎 陳世照 武明軒
牙本質(zhì)過敏癥(dentin hypersensitivity,DH)是指由于牙本質(zhì)不同程度暴露,而使牙齒在受到如溫度(冷熱),化學(xué)(酸甜),機(jī)械(磨擦或咬硬物)等刺激時(shí),出現(xiàn)的一種異常酸痛癥狀[1]。其發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說,其中的流體動(dòng)力學(xué)說最被認(rèn)同,該理論認(rèn)為,治療DH的關(guān)鍵是阻止牙本質(zhì)小管內(nèi)的液體流動(dòng),或者阻斷牙髓神經(jīng)傳導(dǎo)[2]。因此,將牙本質(zhì)小管封閉可有效改善牙本質(zhì)過敏癥狀。傳統(tǒng)的治療方法是使用脫敏藥物,諸如氟化物、樹脂類脫敏劑等。20世紀(jì)80年代后期,有學(xué)者將激光引入此領(lǐng)域。目前,應(yīng)用較多的是Er:YAG激光、Nd:YAG激光和半導(dǎo)體激光。激光實(shí)質(zhì)是一種粒子能量形式,半導(dǎo)體激光和Er:YAG激光照射能使牙本質(zhì)表面形成薄薄一層熔融物覆蓋牙本質(zhì)小管口,將其封閉[3-5],進(jìn)而阻斷神經(jīng)傳導(dǎo),減輕牙齒疼痛癥狀;牙本質(zhì)敏感癥患者如果長期經(jīng)Er:YAG激光照射脫敏,其牙本質(zhì)細(xì)胞的防御反應(yīng)可以被刺激調(diào)動(dòng),進(jìn)而修復(fù)性牙本質(zhì)的形成被促進(jìn)[4],而照射距離和不同手具可影響Er:YAG激光的牙本質(zhì)封閉效果[6]。半導(dǎo)體激光和Er:YAG激光都能夠有效封閉牙本質(zhì)小管從而改善牙本質(zhì)過敏癥狀。本實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建離體牙本質(zhì)敏感模型進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),在對模型分別使用兩種激光處理后,進(jìn)行冷熱循環(huán)老化處理前后牙本質(zhì)小管暴露情況的比較,從而比較哪種激光封閉牙本質(zhì)小管效果更好,能顯效更快、療效更持久,為牙本質(zhì)敏感的臨床治療提供一定的理論依據(jù)和實(shí)踐參考。
1.1 一般資料 收集河北醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科新鮮拔除的第三磨牙25顆,其中男14例,女11例;年齡18~40歲。納入標(biāo)準(zhǔn):牙齒外形完整、無牙隱裂、無齲病、無氟斑、無牙體硬組織疾病等。用刮治器刮除牙齒表面的牙石及肉芽組織后,浸于 0.9%氯化鈉溶液中,放在4℃冰箱中冷藏保存。
1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 雙波長激光治療儀(斯羅文尼亞Fotona公司,型號:M021-5AF/1);半導(dǎo)體激光(斯羅文尼亞Fotona公司,型號:M002 3A/4);慢速精密切割機(jī)(SYJ-150,沈陽科晶公司);超聲震蕩儀(上海予皓科學(xué)儀器公司Y,H-200DH);冷場發(fā)射電子掃描顯微鏡(日本日立公司,SM-3500N);冷熱循環(huán)儀(蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司,TC-501F(111));超聲純水機(jī)(SMART N2);0.5 mol/L EDTA(天津市北辰方正化學(xué)試劑廠);Image-pro plus 6.0圖像分析軟件(美國 Media Cybernetics公司);IBM SPSS Statistics 25.0(美國IBM公司)。
1.3 方法
1.3.1 牙本質(zhì)過敏癥離體模型的建立:離體牙本質(zhì)模型預(yù)備:收集患者拔除的離體牙25顆,用冷凝水降溫,將牙體于牙釉質(zhì)界上1.0mm處垂直牙體長軸切割,深約2 mm,制成邊長4 mm大小的正方形的牙本質(zhì)盤,依次用600、800目的碳化硅砂紙將牙本質(zhì)盤表面打磨至光滑平整,然后用0.5 mmol/L EDTA 酸蝕5 min、用去離子水超聲蕩洗10 min、蒸餾水沖洗1 min,并浸泡在0.9%氯化鈉溶液中于4℃ 冰箱冷藏備用。
1.3.2 牙本質(zhì)敏感模型的分組:將5個(gè)樣本作為空白對照組,其余20個(gè)樣本隨機(jī)分成A、B兩組,每組10個(gè)牙本質(zhì)過敏模型。干燥后備用。Er:YGA激光(A組):使用Fotona 雙波長激光治療儀、散焦式照射手具(R14)、Er:YAG激光(SP,40 mJ,10 Hz,0.4 W,水0,氣0,光斑直徑約2 mm),垂直于牙本質(zhì)盤表面,探頭頂端距離牙面約2 cm,快速均勻移動(dòng)照射20 s。半導(dǎo)體激光(B組):使用Fotona 半導(dǎo)體激光(1.0W,CW,光斑直徑約2 mm)與牙本質(zhì)盤表面成 90°,探頭頂端距離牙面約1 cm,快速均勻移動(dòng)照射20 s。隨機(jī)選取2組的一半樣本和對照組樣本在掃描電鏡下觀察牙本質(zhì)小管的暴露情況。
1.4 冷熱循環(huán)老化實(shí)驗(yàn) 將A、B組剩余的一半樣本放在37℃水中保存1周后,在冷熱循環(huán)儀中冷熱循環(huán)4 000次,水溫5℃~55℃,水中停滯30 s然后離開水面2 s。在掃描電鏡下觀察記錄牙本質(zhì)小管暴露情況。
1.5 牙本質(zhì)樣本檢測分析 掃描電鏡下觀察的結(jié)果:將牙本質(zhì)樣本置于干燥瓶內(nèi),自然干燥1 d,按要求對樣品表面進(jìn)行噴金,并用導(dǎo)電膠粘固在觀察托盤上;然后用掃描電鏡觀察各樣本的牙本質(zhì)小管暴露情況并采集圖像。圖像處理:分別從每個(gè)樣本中隨機(jī)選取 5 張采集的掃描電鏡圖像,應(yīng)用 Image-Pro Plus 6.0 圖像分析軟件對圖像進(jìn)行分析處理。采用面積法,先利用軟件自動(dòng)識別功能標(biāo)記牙本質(zhì)小管口的邊界,選中圖像中牙本質(zhì)小管口的暴露區(qū)域,并計(jì)算處理區(qū)域牙本質(zhì)小管暴露的面積作為牙本質(zhì)小管的暴露面積;然后再以空白對照組開放牙本質(zhì)小管暴露面積作為基準(zhǔn),根據(jù)公式:牙本質(zhì)小管暴露率(%)=處理組牙本質(zhì)小管暴露面積/對照組牙本質(zhì)小管暴露面積)×100%,計(jì)算樣本牙本質(zhì)小管暴露率[7]。
2.1 牙本質(zhì)樣本結(jié)果
2.1.1 掃描電鏡下牙本質(zhì)樣本表面牙本質(zhì)小管觀察:空白對照組樣本的牙本質(zhì)小管口幾乎完全開放,漏斗口狀,周界清楚,呈圓形或橢圓形。A組牙本質(zhì)小管口大多封閉,少數(shù)為半封閉或開放,部分可見裂紋和突起。被封閉牙本質(zhì)小管口上面覆蓋有一層熔融的牙本質(zhì),表面不平整,可能是由于存在少許玷污層。B組牙本質(zhì)表面呈現(xiàn)條紋狀,牙本質(zhì)小管口幾乎全部被封閉,僅有少數(shù)呈線條狀開口且不連續(xù),表面有分散的顆粒物。見圖1。
圖1 3組牙本質(zhì)小管表面形態(tài)
2.1.2 牙本質(zhì)小管暴露面積數(shù)據(jù)分析:對比對照組,A、B 2組牙本質(zhì)小管的暴露面積均明顯小于空白對照組(P<0.05),且B組牙本質(zhì)小管暴露面積小于A組(P<0.05)。