王丹丹，韓 君，馮福山，吳建挺，朱立國

(山東中農(nóng)聯(lián)合生物科技股份有限公司，山東 濟南 250100)

煙草是我國重要的經(jīng)濟植物，煙草稅收在我國財政收入中占有較大比重[1]。煙草黑脛病(Tobacco black shank)是一種分布于世界范圍內(nèi)的煙草土傳卵菌病害，又名“黑稈瘋、烏頭病、黑根”[2-3]，是由煙草疫霉(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)引起的危害煙草生產(chǎn)的重要病害[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)常規(guī)殺菌劑在長期、高頻率使用下，對煙草黑脛病防效顯著降低，病原菌已對其產(chǎn)生不同程度的抗藥性[5]，因此，為保障煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展和化學農(nóng)藥減量施用，篩選具有高效綠色且具備新作用機理的殺菌劑替代當前常規(guī)藥劑尤為迫切。

40%氟醚·烯酰懸浮劑，是由氟醚菌酰胺與烯酰嗎啉(3:5)復(fù)配而成，目前已經(jīng)在馬鈴薯晚疫和芋頭疫病獲得登記。氟醚菌酰胺具有良好的內(nèi)吸傳導(dǎo)性，能從葉片上表面向下滲透，從葉基向葉尖方向傳導(dǎo)，對幼芽處理后能夠保護葉片不受病原菌侵染，此外氟醚菌酰胺還可從根部沿植株的木質(zhì)部向整株作物分布，獨特的作用機理使得氟醚菌酰胺具有優(yōu)良的防治效果[6]。烯酰嗎啉，其主要作用原理為破壞細胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，致使病菌死亡，對各個階段卵菌都有作用，在孢子囊梗和卵孢子的形成階段尤為敏感[7]。二者作用機理不同，對于延緩抗藥性的發(fā)生具有積極重要的意義。本文通過室內(nèi)毒力測定、盆栽試驗和田間藥效試驗，評價了40%氟醚·烯酰懸浮劑和常規(guī)藥劑對煙草黑脛病的防治效果，為其合理使用提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試作物：煙草(品種：中煙101、NC55)。

供試培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基。

供試菌株：煙草疫霉菌種，由山東中農(nóng)聯(lián)合研發(fā)中心生測室采集病樣分離純化并保存。

供試藥劑：代森錳鋅原藥、代森聯(lián)原藥、吡唑醚菌酯原藥、氟醚菌酰胺原藥、烯酰嗎啉原藥、40%氟醚·烯酰懸浮劑、60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑、58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑。

供試田地：山東省濰坊市昌樂縣阿陀鎮(zhèn)煙草生產(chǎn)基地。每667m2地約1 100株煙草，每壟大約280株煙苗，長約125m。

1.2 供試方法

1.2.1 菌絲生長法 本試驗按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準(NY/T 1156.2-2006)，采用菌絲生長速率法進行測定。用丙酮溶解各原藥配置成一系列不同濃度的母液，分別加入等量母液于預(yù)先分裝45mL PDA培養(yǎng)基、滅菌并冷卻至50～60℃的錐形瓶中。將其充分搖勻，然后等量倒入3個直徑為90mm的培養(yǎng)皿中，配成目標濃度的含藥培養(yǎng)基(表1)。

表1 菌絲生長法供試藥劑及濃度

將培養(yǎng)好的煙草疫霉菌種，在無菌條件下取直徑為7mm菌餅，并接種菌餅至含藥平板中央。溶劑對照加等量丙酮，并設(shè)清水對照。在25℃±2℃下培養(yǎng)，待對照生長至培養(yǎng)皿3/4時用十字交叉法測量菌落直徑(cm)，計算取平均值，計算抑制率，重復(fù)3次，多次重復(fù)得出結(jié)果。

采用Wadley法進行評價：根據(jù)增效系數(shù)(SR)來評價藥劑混用的增效作用，即SR>1.5為增效作用；0.5≤SR≤1.5為相加作用；SR<0.5為拮抗作用。計算增效系數(shù)(SR)按公式(1)和(2)進行：

(1)

式中：

X—混劑的EC50理論值，單位為：μg/mL；

PA—混劑中A的百分含量；

PB—混劑中B的百分含量；

A—混劑中A的EC50值，單位為：μg/mL；

B—混劑中B的EC50值，單位為：μg/mL；

(2)

式中：

SR—混劑的增效系數(shù)；

X—混劑EC50的理論值，單位為：μg/mL；

X(1)—混劑EC50的實測值，單位為：μg/mL。

1.2.2 活體盆栽法

1.2.2.1 試驗設(shè)計 將生長一致的6葉煙苗(品種為：中煙101和NC55)移栽至花盆中緩苗1周后，分別用(表2)所示的供試藥劑及處理濃度，以每株噴灑30mL藥液對煙苗進行噴淋莖基部處理，其中60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2與58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑作為藥劑對照，清水處理作為空白對照，定義施藥當天為施藥0d，待第3d時將煙草黑脛病菌的菌餅(d=7mm)接種至煙草苗莖基部并用脫脂棉保濕處理，置于25±2℃的溫室中培養(yǎng)。每個處理均設(shè)4組重復(fù)，每組重復(fù)24株煙草苗。

表2 活體盆栽法供試藥劑及濃度

1.2.2.2 調(diào)查方法 各組試驗在施藥前調(diào)查發(fā)病情況，計算藥前病情指數(shù)，噴藥后7d調(diào)查發(fā)病情況，計算病情指數(shù)和防治效果。調(diào)查前后均自上而下調(diào)查植株全部莖稈及葉片，根據(jù)以下分級標準記錄各級發(fā)病莖葉數(shù)及全部莖葉數(shù)：0級：全株無??；1級：莖部病斑不超過莖圍的1/3，個別葉片萎蔫；3級：莖部病斑不超過莖圍的1/2，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級：莖部病斑超過莖圍的1/2，或半數(shù)以上葉片輕度凋萎；7級：莖部病斑環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計算方式根據(jù)病情指數(shù)按下列指數(shù)公式計算出防治效果，再按DMRT法測定處理防效的差異顯著性。

按照下列公式進行計算。

防治效果(%)(藥前無基數(shù))=(空白對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/(空白對照區(qū)病情指數(shù))×100

1.2.3 田間試驗

1.2.3.1 試驗設(shè)計 依據(jù)《GB/T17980.90-2004農(nóng)田藥效試驗準則殺菌劑第90部分：殺菌劑防治煙草黑脛病》開展試驗。田間試驗于山東省濰坊市昌樂縣阿陀鎮(zhèn)煙草生產(chǎn)基地進行，試驗地前茬作物為煙草。施藥方式為人工灌根，每個小區(qū)15株，重復(fù)4次，設(shè)計為隨機區(qū)組排列，試驗區(qū)四周設(shè)保護行。試驗共設(shè)4個處理，(表3)所示的供試藥劑及處理濃度。具體操作流程為：圍繞煙苗莖部挖開半徑約為4cm左右的近圓形小洞，深度挖至以根部上方3～4cm左右，使灌入的藥劑能滲透至根部，采用改造后的100mL量杯每株煙草灌入100mL藥劑，待藥劑完全滲入土里，填平小洞，壓住已破壞的薄膜，避免影響薄膜的保溫保濕效果。

表3 田間試驗供試藥劑及濃度

1.2.3.2 調(diào)查方法 各組試驗在施藥前未發(fā)病，待空白區(qū)發(fā)病率達半數(shù)以上，計算病情指數(shù)和防治效果[8]。每小區(qū)采用五點取樣法調(diào)查，每點查5～10株，記錄調(diào)查總株數(shù)及各級病株數(shù)。分級方法：0級：全株無?。?級：莖部病斑不超過莖圍的1/3，個別葉片萎蔫；3級：莖部病斑不超過莖圍的1/2，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級：莖部病斑超過莖圍的1/2，或半數(shù)以上葉片輕度調(diào)萎；7級：莖部病斑環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計算方式根據(jù)病情指數(shù)按下列指數(shù)公式計算出防治效果，再按DMRT法測定處理防效的差異顯著性。

防治效果(%)(藥前無基數(shù))=(空白對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/(空白對照區(qū)病情指數(shù))×100

1.2.4 數(shù)據(jù)分析方法 采用Excel 2010和DPS 7.05對試驗數(shù)據(jù)進行計算和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)生物活性測定結(jié)果 氟醚·烯酰(3:5)對煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用。(表4)可知，煙草黑脛病菌對氟醚∶烯酰(3:5)表現(xiàn)出很高的活性，EC50值為0.426 7μg/mL；其次為烯酰嗎啉，EC50值為0.435 6μg/mL；吡唑·代森聯(lián)(1:11)和代森錳鋅表現(xiàn)表現(xiàn)出了中等的活性水平。

表4 不同藥劑對煙草黑脛病菌的毒力水平

2.2 室內(nèi)盆栽試驗 各殺菌劑對煙草黑脛病表現(xiàn)出不同的防治效果，(表5)40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為50mL/667m2處理對煙草黑脛病的防效最高，對中煙101、NC55的防效分別可達87.50%、88.30%，其次是40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2處理，分別可達75.00%、77.66%，該兩組處理的防效均>60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑 80g/667m2處理。

表5 不同藥劑對煙草黑脛病菌活體盆栽結(jié)果

2.3 田間防治效果 (表6)可知：不同殺菌劑均可達到良好的防控作用。其中40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2、50mL/667m2對煙草黑脛病的防控效果依次為83.02%、91.42%，優(yōu)于對照藥劑60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2。田間防治效果與室內(nèi)毒力測定及室內(nèi)盆栽試驗結(jié)果相一致，表明40%氟醚·烯酰懸浮劑對煙草黑脛病具有較高的活性。

表6 葉俏等藥劑對煙草黑脛病田間藥效測定結(jié)果

續(xù)表

3 討論

研究表明，氟醚·烯酰(3:5)對煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用，其中氟醚菌酰胺∶烯酰嗎啉(3:5)的EC50值為0.426 7μg/mL，增效系數(shù)為1.53，表現(xiàn)為增效作用。煙草黑脛病活體盆栽試驗中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2對兩品種煙草的黑脛病防效均>75%，在濰坊昌樂開展的煙草黑脛病大田試驗中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2防效均高于對照藥劑60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2，表現(xiàn)出較好的防治效果。

煙草黑脛病是一種非常難防治的病害，每年都投入各種力量防治，特別是化學殺菌劑的投入。然而，近年研究發(fā)現(xiàn)煙草黑脛病病原菌對常規(guī)殺菌劑已經(jīng)產(chǎn)生不同程度的抗藥性[9-11]。如袁宗勝等已報道煙草黑脛病菌對甲霜靈可產(chǎn)生不同程度的耐藥性[12-13]；煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉存在抗性風險等[14]。氟醚菌酰胺屬于細胞骨架和運動蛋白類的殺菌劑，且上市時間較短，抗性水平低，對卵菌綱病原真菌有特效，且作用機理新穎；烯酰嗎啉屬于嗎啉類殺菌劑，烯酰嗎啉屬專一防治卵菌綱真菌性病害藥劑，其作用機制是破壞病菌細胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，而使病菌死亡。氟醚菌酰胺和烯酰嗎啉以3:5的比例復(fù)配后，不僅具有一定的增效作用，可以更好的發(fā)揮藥效，而且二者作用機理不同，對于延緩抗藥性的發(fā)生具有積極重要的意義。因此，可以使用40%氟醚·烯酰懸浮劑35～50mL/667m2噴霧或灌根可有效防治煙草黑脛病。