青學剛 陳小平 陳寶瑞 李文學 肖文福 張友洪 劉 剛 尹 紅 王琳璐(四川省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)研究所，四川南充 637000)

2019年，在國際國內(nèi)繭絲綢行情波動起伏的不利形勢下，四川省珙縣蠶業(yè)依托龍頭企業(yè)——智溢繭絲綢有限公司，以省級現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)創(chuàng)建為契機，狠抓桑園基地建設，推廣優(yōu)質(zhì)桑蠶品種，實行多批次滾動養(yǎng)蠶，普及小蠶共育等實用新技術(shù)，堅持儀評收購、按質(zhì)計價，生產(chǎn)上實現(xiàn)了張種產(chǎn)繭量、蠶繭質(zhì)量創(chuàng)珙縣歷史最好記錄，蠶農(nóng)繭款收入穩(wěn)定增加的佳績。2019年珙縣桑園面積1.25萬hm2，年產(chǎn)鮮繭近8 000 t，蠶業(yè)綜合產(chǎn)值達12億元。其中，孝兒鎮(zhèn)是珙縣的蠶桑主產(chǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，年發(fā)種量28 000余張，產(chǎn)繭量近1 000 t，蠶業(yè)綜合產(chǎn)值超15 000萬元。但是，在規(guī)模效益形成的同時，孝兒鎮(zhèn)蠶病出現(xiàn)了暴發(fā)的趨勢，嚴重影響了蠶桑產(chǎn)業(yè)的優(yōu)質(zhì)高效發(fā)展。為了查明原因加以防范和控制，國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系四川創(chuàng)新團隊蠶疫病防控與飼育技術(shù)研發(fā)崗位人員積極組織相關蠶病、育種專家分別于2018年9月27日和2019年7月19日先后2次前往實地進行調(diào)查了解，并進行診斷和鑒定，現(xiàn)將有關情況報告如下，供同仁商榷。

1 近年孝兒鎮(zhèn)蠶病發(fā)生概況

1.1 2018年蠶病發(fā)生情況

2018年9月秋蠶期孝兒鎮(zhèn)黃蓮村、太平村、波浪村、新勝村、桐梓村、鞏舟村等地家蠶發(fā)育到5齡第9天，未見上蔟結(jié)繭，蠶臺內(nèi)家蠶大量死亡，部分養(yǎng)蠶戶蠶臺內(nèi)有活蠶，但蠶體開差大，發(fā)育不齊，無食桑表現(xiàn)，呆滯不活潑，腹足無力，呈軟化狀態(tài)。發(fā)病面積涉及6個村、3 426張蠶種，占全鎮(zhèn)秋蠶發(fā)種量的53%。

1.2 2019年蠶病發(fā)生情況

2019年7月夏蠶期孝兒鎮(zhèn)黃蓮村、太平村、波浪村、蓮花村、寶興村、新勝村、桐梓村、鞏舟村、李團村等地家蠶發(fā)育到5齡第9天左右，少部分蠶上蔟做薄皮繭，多數(shù)蠶呆滯不活潑，腹足無力，無食桑表現(xiàn)，發(fā)育不齊，群體大小不勻，齡期延長，頭胸空虛半透明，排黃褐色稀糞，呈軟化狀態(tài)。發(fā)病面積涉及9個村、2 083張蠶種，占全鎮(zhèn)夏蠶發(fā)種量的48%。

2 發(fā)病原因調(diào)查

2.1 桑葉樣品氟化物和硫化物含量測定

考慮到環(huán)境因素(發(fā)病區(qū)域有一個大型發(fā)電廠,當?shù)匦Q農(nóng)認為可能是發(fā)電廠的氟化物或硫化物引起的家蠶生病)，2019年7月，在遠離發(fā)病區(qū)域的未發(fā)病區(qū)域農(nóng)戶的桑樹上、發(fā)病區(qū)域農(nóng)戶的桑樹上、發(fā)病區(qū)域農(nóng)戶的蠶臺上分別選取1號、2號和3號3個桑葉樣品進行化驗分析，結(jié)果如表1所示。從表1可以看出，3個樣品均為陰性，有5個指標未檢出，1個病區(qū)桑葉氟化物含量為4.7 mg/kg。根據(jù)四川省地方標準DB 51/T 2224—2016《桑蠶氟化物中毒診斷技術(shù)規(guī)程》[1]“桑葉中的含氟量(以干物計)≥35 mg/kg時，非抗氟桑蠶品種攝入后可表現(xiàn)出中毒癥狀”以及四川省優(yōu)勢特色效益農(nóng)業(yè)培訓教材《蠶?！穂2]“當桑葉中硫含量超過0.63%時，蠶的發(fā)育過程延遲，死亡率極高”認為，此次蠶病暴發(fā)不是氟化物或硫化物引起的。

表1 2019年7月桑葉樣品氟化物和硫化物含量測試情況

測試日期為2019年7月19日；表中數(shù)據(jù)為四川藍城檢測技術(shù)有限公司檢測，硫化物檢測方法參照《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則[3]；氟化物檢測方法參照GB/T 5009.3—2016《食品中氟的測定》[4]；“-”表示未檢出。表2相同。

為了查明桑葉中不同季節(jié)氟化物和硫化物的含量，2019年9月在原采樣區(qū)域進行了跟蹤檢測，在遠離發(fā)病區(qū)域未發(fā)病農(nóng)戶的桑樹上采集4、5、6號桑葉樣品，在2019年7月調(diào)查發(fā)病區(qū)域農(nóng)戶的桑樹上采集7、8、9號桑葉樣品，經(jīng)化驗分析結(jié)果如表2所示，結(jié)果顯示：6個樣品均為陰性，病區(qū)桑葉氟化物含量略高于無病區(qū)的桑葉，也比春季高，但差異不顯著，不會對家蠶造成危害。秋季生產(chǎn)上也確實沒有暴發(fā)蠶病。

表2 2019年9月桑葉樣品氟化物和硫化物含量測試情況

2.2 取樣解剖及顯微鏡檢

2.2.1 2018年顯微鏡檢情況 2018年9月在孝兒鎮(zhèn)發(fā)病區(qū)域抽樣(太平村4社的周世清戶和6社的魏仲華戶、黃蓮村3社的李光金戶和李清容戶共4個樣品)，分別取死蠶、活蠶進行解剖及顯微鏡檢發(fā)現(xiàn)，蠶體中腸空虛，桑葉碎片較少，無核型多角體病毒(NPV)、質(zhì)型多角體病毒(CPV)及微粒子孢子(NB)等致病微生物,因我國非包涵體病毒病絕大多數(shù)是濃核病病毒(DNV)[5]，故懷疑是濃核病。

2.2.2 2019年顯微鏡檢情況 2019年7月在孝兒鎮(zhèn)發(fā)病區(qū)域抽樣(太平村6社的魏仲華戶、波浪村1社的周文虎戶和2社的周之鳳戶、黃蓮村6社的李春銀戶和王玉先戶、蓮花村1社的蔣開貴戶共6個樣品)，分別對死蠶、活蠶進行解剖及顯微鏡檢，太平村6社的魏仲華戶解剖的蠶體中腸黑黃，鏡檢有病毒多角體存在，未發(fā)現(xiàn)微粒子孢子；其他5戶(波浪村的周文虎戶和周之鳳戶、黃蓮村的李春銀戶和王玉先戶、蓮花村的蔣開貴戶)解剖的蠶體中腸空虛，桑葉碎片較少，鏡檢未發(fā)現(xiàn)病毒多角體和微粒子孢子。

2.3 熒光定量PCR檢測

圖中數(shù)據(jù)由西南大學潘敏慧團隊檢測提供；圖2相同。圖1 2018年不同樣品家蠶濃核病病毒病原的相對表達量

2.3.1 2018年分子生物學鑒定情況 2018年在發(fā)病區(qū)域抽的4個樣品進一步做濃核病病毒病原熒光定量PCR檢測(當時用解剖和顯微鏡檢方法排除了核型多角體病毒、質(zhì)型多角體病毒、微粒子孢子，懷疑是濃核病病毒引起，故只做了濃核病病毒檢測)，結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，太平村6社的魏仲華戶和4社的周世清戶、黃蓮村3社的李清容戶和李光金戶的家蠶濃核病病毒檢測濃度非常低，相對表達量在10-7水平，故不能判定為濃核病病毒引起的蠶病。

2.3.2 2019年分子生物學鑒定情況 2019年在發(fā)病區(qū)域抽的6個樣品進一步做分子生物學全面檢測，檢測微粒子孢子、質(zhì)型多角體病毒、核型多角體病毒、濃核病病毒、軟化病病毒(FV)，結(jié)果如圖2所示。從圖2可以看出，太平村6社魏仲華戶的家蠶主要是質(zhì)型多角體病毒和軟化病病毒引起的中腸型膿病和病毒性軟化??；其他5戶(波浪村的周文虎戶和周之鳳戶、黃蓮村的李春銀戶和王玉先戶、蓮花村的蔣開貴戶)的家蠶是軟化病病毒引起的病毒性軟化病。

圖2 2019年不同樣品家蠶不同病原的相對表達量

2.4 氣象因素分析

2.4.1 秋蠶期間的氣象情況 查詢珙縣氣象局2018年9月1日—9月30日和2019年9月1日—9月30日秋蠶期間的氣象資料，進一步分析氣象因素的影響。從表3可以看出，2018年秋蠶期較2019年同期降雨量多、相對濕度大、平均溫度高、風速小，這種高溫多濕的環(huán)境有利于病原菌的繁殖。

表3 珙縣孝兒鎮(zhèn)2018年和2019年秋蠶期氣象資料數(shù)據(jù)

2.4.2 夏蠶期間的氣象情況 查詢珙縣氣象局2018年6月20日—7月20日和2019年6月20日—7月20日夏蠶期間的氣象資料，進一步分析氣象因素的影響。從表4可以看出，2019年夏蠶期較2018年同期降雨量多、相對濕度大、平均溫度略低、風速小，這種高溫多濕的環(huán)境有利于病原菌的繁殖。

表4 珙縣孝兒鎮(zhèn)2018年和2019年夏蠶期氣象資料數(shù)據(jù)

從2年的氣象數(shù)據(jù)可以看出，家蠶在高溫多濕的環(huán)境下容易暴發(fā)蠶病。

2.5 發(fā)病區(qū)域地理分布分析

2018年9月秋蠶期孝兒鎮(zhèn)黃蓮村、太平村、波浪村、新勝村、桐梓村、鞏舟村等地暴發(fā)蠶病。2019年7月夏蠶期孝兒鎮(zhèn)黃蓮村、太平村、波浪村、新勝村、桐梓村、鞏舟村、蓮花村、寶興村、李團村等地暴發(fā)蠶病(表5)。其中黃蓮村、太平村、波浪村、新勝村、桐梓村、鞏舟村連續(xù)2年均暴發(fā)蠶病。

表5 珙縣孝兒鎮(zhèn)2018年和2019年夏蠶期蠶病發(fā)生情況

發(fā)病區(qū)域主要分布在孝兒鎮(zhèn)南廣河谷低洼地帶，空氣流動性差，加上高溫多濕氣候影響，有利于病原菌繁殖，造成了蠶病的暴發(fā)。

珙縣孝兒鎮(zhèn)2019年有20個村飼養(yǎng)夏蠶，當季發(fā)種量4 350張，暴發(fā)蠶病的有9個村、2 083張蠶種，發(fā)病率高達48%。其中調(diào)查的波浪村、黃蓮村、太平村、蓮花村等4個村2019年夏蠶期平均張種產(chǎn)繭量只有22.4 kg，比不發(fā)病的2018年夏蠶期平均張種產(chǎn)繭量(34.1 kg)低34%(表6)，嚴重挫傷了蠶農(nóng)栽桑養(yǎng)蠶的積極性。

表6 珙縣孝兒鎮(zhèn)2019年夏蠶期波浪村等4個村的養(yǎng)蠶成績

3 結(jié)語

基于上述蠶病診斷及鑒定結(jié)果，我們認為導致孝兒鎮(zhèn)大面積家蠶異常死亡情況發(fā)生的原因是夏秋蠶飼養(yǎng)期間氣候條件惡劣，溫度較高，雨水偏多，濕度偏大，同時蠶病發(fā)生區(qū)域地勢低洼，呈鍋底型，氣流不暢，使家蠶體質(zhì)虛弱，新陳代謝機能下降，生理機能失調(diào)，食桑緩慢，消化液的殺菌作用減弱，家蠶抗病力下降，從而引起家蠶感染病毒暴發(fā)蠶病。加之區(qū)域內(nèi)蠶種發(fā)放混亂無序，蠶種質(zhì)量參差不齊，而且大小蠶重疊飼養(yǎng)，極易引起交叉感染，病原大面積傳播擴散，引起蠶病暴發(fā)。