生活飲用水檢驗(yàn)中兩種微生物檢驗(yàn)方法的比較分析

劉柳影（廣東省普寧市疾病預(yù)防控制中心,廣東 普寧 515300）

水是人體所需必不可少的一部分，維持人類正常生活所需。水的含量在人體中可達(dá)到70%以上，對(duì)人體起著重要作用，水調(diào)節(jié)著人體血液循環(huán)、新陳代謝以及酸堿平衡。對(duì)于地球上的其他生物而言，水也是不可或缺的[1]。由于水具有流動(dòng)性，局部地區(qū)水源污染會(huì)導(dǎo)致其他地方的水污染，而水污染的擴(kuò)散又影響著人們正常的生產(chǎn)生活。所以，水中微生物安全檢驗(yàn)顯得十分重要。目前，我國飲用水的處理方法有過濾、沉淀、添加氯進(jìn)行再處理[2]，這些處理方法可以有效減少水污染中的雜質(zhì)和沉淀物，但是水中微生物含量還需要進(jìn)一步檢驗(yàn)?，F(xiàn)對(duì)2019年1-12月收集的400份飲用水樣品和未處理的水樣采取回顧性分析，比較多管發(fā)酵檢驗(yàn)和濾膜檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果，詳細(xì)報(bào)告如下。

1 一般資料和方法

1.1 一般資料 將2019年1-12月從不同水廠收集的生活飲用水和未處理水樣400份作為本次研究對(duì)象，每份飲用水各100mL，生活飲用水200份，未處理用水200份，分別用濾膜檢驗(yàn)和多管發(fā)酵檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)水樣細(xì)菌情況，對(duì)比兩組檢查方法檢查水樣中細(xì)菌情況和水樣合格率情況。

1.2 方法

1.2.1 濾膜檢驗(yàn) 準(zhǔn)備檢測用品：試劑（乳糖蛋白）、鑷子、過濾儀器、培養(yǎng)基（品紅亞硫酸鈉）。將待檢測生活飲用水放入到微孔濾膜中進(jìn)行過濾，微孔濾膜孔徑0.45微米，再將過濾完畢的濾膜紙放置在含有乳糖的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時(shí)間2d。具體操作方法：首先，將生活飲用水樣本進(jìn)行殺菌處理，用無菌鑷子將過濾完畢的濾膜放置在裝有蒸餾水的燒杯中，蒸餾水煮至沸騰，進(jìn)行3次沸煮，每次時(shí)間15min，將前兩次煮沸后的水及時(shí)清理，避免留下殘留物，保證被測樣本無其他雜質(zhì)干擾。其次，樣本過濾，用無菌鑷子夾住濾膜放置于儀器的無菌濾床上，濾膜粗糙的一面放置在上方，加固過濾器，將100mL生活飲用水放入過濾器，打開閘門，氣壓0.05設(shè)定，進(jìn)行抽濾。最后，將過濾完畢的濾膜取出，無菌鑷子夾住濾膜邊緣，保證被測菌落的完整性，放置入含有品紅硫酸鈉的培養(yǎng)皿中，濾膜平整放入培養(yǎng)皿中，避免氣泡產(chǎn)生，培養(yǎng)皿倒置放入設(shè)定恒溫37℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時(shí)間2d左右。檢驗(yàn)完生活飲用水水樣后，再對(duì)未處理的水樣進(jìn)行濾膜檢驗(yàn)，按照上述步驟進(jìn)行。

1.2.2 多管發(fā)酵檢驗(yàn) 準(zhǔn)備檢測用品：培養(yǎng)皿、天平、載玻片、顯微鏡、導(dǎo)管、分度吸管。多管發(fā)酵檢驗(yàn)原理，大腸桿菌經(jīng)過放置發(fā)酵產(chǎn)生酸和氣體，按照其原理進(jìn)行檢驗(yàn)試驗(yàn)。具體操作如下，取1mL水樣分別放于10mL的單料乳糖蛋白胨和9mL的生理鹽水中，充分混勻后各自取出1mL分別放入5份稀釋濃度不同的水樣中。再從不同濃度的水樣中取出1mL分別接種到雙料培養(yǎng)基上放入培養(yǎng)箱，溫度35℃-37℃，時(shí)間2天。判定標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)過程中，如果未出現(xiàn)酸和氣體，則樣品中大腸桿菌為陰性；如果產(chǎn)生酸和氣體，則大腸桿菌為陽性，還需將樣品再檢驗(yàn)。將樣品放置在伊紅美藍(lán)瓊脂板上放入培養(yǎng)箱，溫度35℃-37℃，時(shí)間在1d內(nèi)，不低于18h，定時(shí)觀察瓊脂板情況，將菌落完整的瓊脂板進(jìn)行革蘭氏染色，用顯微鏡觀察瓊脂板。生活用水水樣檢驗(yàn)完畢后，再對(duì)未處理水樣進(jìn)行多管發(fā)酵檢驗(yàn)，操作步驟如上所述。

1.2.3 微生物檢測評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 我國現(xiàn)行飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定細(xì)菌總數(shù)在100個(gè)/mL內(nèi)，因?yàn)楝F(xiàn)在使用的日常用水往往經(jīng)過物理處理和化學(xué)處理后再使用，但是水中還是殘存一定數(shù)量的細(xì)菌菌落數(shù)，存在飲用水微生物不達(dá)標(biāo)或者水質(zhì)較渾濁的現(xiàn)象時(shí)，水中大腸桿菌數(shù)量不符合既定標(biāo)準(zhǔn)。此外，飲用水處理過程中，還存在其他原因?qū)е绿幚砗蟮乃俅卧馐芪廴?，如供水管管壁破裂，或者供水管使用時(shí)間較長導(dǎo)致管壁微生物滋生等。所以，對(duì)飲用水做好檢驗(yàn)和抽查就顯得非常重要了。

1.3 觀察指標(biāo) 根據(jù)國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)，每毫升水細(xì)菌總數(shù)不超過100個(gè)，檢測指標(biāo)有大腸桿菌、雜菌、耐熱大腸桿菌、大腸埃希氏菌，計(jì)算出檢測樣本結(jié)果，比較兩組水樣的合格率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 研究數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS20.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組水樣檢驗(yàn)合格情況比較 對(duì)200份生活飲用水檢測中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)水樣總合格195份，合格率97.5%，而濾膜檢驗(yàn)水樣總合格169份，合格率84.5%，多管發(fā)酵檢驗(yàn)合格率顯著高于濾膜檢驗(yàn)合格率（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩組水樣檢驗(yàn)合格率結(jié)果

2.2 兩組水樣中細(xì)菌指數(shù)比較 在對(duì)未處理水樣的檢測中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)大腸桿菌、雜菌、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌檢出率均顯著高于濾膜檢驗(yàn)檢出率（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 兩組水樣中細(xì)菌檢出率結(jié)果

3 討論

生活用水事關(guān)民生，通過檢驗(yàn)生活用水中的微生物，可判斷生活用水合格情況[3-4]，保障用水安全。通過實(shí)驗(yàn)中回顧性方法研究，在200份未處理被測樣品水中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)檢出大腸桿菌174份、雜菌168份、耐熱大腸桿菌182份、大腸埃希菌190份，檢出率93.5%；而濾膜檢驗(yàn)檢出大腸桿菌148份、雜菌144份、耐熱大腸桿菌158份、大腸埃希菌168份，檢出率78%，多管發(fā)酵檢驗(yàn)細(xì)菌菌落檢出率顯著高于濾膜檢驗(yàn)（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。濾膜檢驗(yàn)出廠水合格水樣69份，管網(wǎng)末梢水合格水樣70份，二次供水合格水樣30份，總合格水樣份數(shù)169份，合格率84.5%；而多管發(fā)酵檢驗(yàn)出廠水合格水樣78份，管網(wǎng)末梢水合格水樣79份，二次供水合格水樣38分，總合格水樣195份，合格率97.5%。多管發(fā)酵檢驗(yàn)總合格率顯著高于濾膜檢驗(yàn)（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)比兩種方法的檢驗(yàn)原理，多管發(fā)酵檢驗(yàn)將樣本水樣稀釋后進(jìn)行菌落培養(yǎng)，按照不同的稀釋濃度分別進(jìn)行菌落觀察，觀察各個(gè)稀釋度菌落的單位體積數(shù)[5]。而濾膜檢驗(yàn)將樣品水樣經(jīng)過過濾器過濾，把濾膜放置于培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基上濾膜大腸桿菌單位體積[6]。兩種方法各有優(yōu)點(diǎn)，多管發(fā)酵檢驗(yàn)較濾膜檢驗(yàn)水樣合格率較高，而濾膜檢驗(yàn)操作簡便，檢驗(yàn)結(jié)果較快，兩種方法均可適用。不過，對(duì)比檢驗(yàn)結(jié)果，未處理的水樣檢測中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)細(xì)菌檢出率高于濾膜檢驗(yàn)，而生活飲用水檢測中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)的水質(zhì)合格率高于濾膜檢驗(yàn)水質(zhì)合格率。說明多管發(fā)酵檢驗(yàn)有較高的靈敏度，能夠準(zhǔn)確檢驗(yàn)出細(xì)菌菌落，經(jīng)過多管發(fā)酵檢驗(yàn)的水樣，其合格率較濾膜檢驗(yàn)較高。

生活中存在各種細(xì)菌，這些細(xì)菌以生活用水為載體，人們食用這些細(xì)菌含量超標(biāo)的飲用水容易導(dǎo)致各種疾病滋生。由于細(xì)菌引起的各種疾病成為人們研究的重點(diǎn)，水資源的污染，嚴(yán)重影響人們的生命健康。從而加強(qiáng)水質(zhì)檢驗(yàn)尤為重要，涉及公共衛(wèi)生安全，國家相關(guān)部門應(yīng)加大對(duì)水質(zhì)檢驗(yàn)的抽樣檢查[7]，環(huán)保部門加大對(duì)水源污染的監(jiān)管，基層加大對(duì)水資源保護(hù)的宣傳和保護(hù)，將水源保護(hù)放在首位，減少水源垃圾污染、供水管道破壞污染水源等。全社會(huì)共同營造保護(hù)水資源，愛護(hù)水資源，減少水污染的意識(shí)，相關(guān)部門加大對(duì)生活用水相關(guān)知識(shí)的科普，定期抽查檢驗(yàn)，保障群眾用水安全。

綜上所述，在水樣檢驗(yàn)中，多管發(fā)酵檢驗(yàn)較濾膜檢驗(yàn)更好[8-9]，具有較高的細(xì)菌檢出率，值得推廣應(yīng)用。