實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證分析

郭彥秀

（晉中市水文水資源勘測(cè)站，山西 晉中 030600）

1 檢測(cè)方法評(píng)價(jià)

隨著科技的發(fā)展，水質(zhì)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備越來越完善，利用大型儀器實(shí)現(xiàn)水質(zhì)項(xiàng)目檢測(cè)，需選擇適用的現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)方法。在首次使用標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，僅僅驗(yàn)證測(cè)試操作正確與否，是相對(duì)片面的，要先對(duì)此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法驗(yàn)證，以確定檢測(cè)機(jī)構(gòu)是否有能力，按此標(biāo)準(zhǔn)開展檢測(cè)工作。

方法驗(yàn)證是評(píng)定檢測(cè)機(jī)構(gòu)是否有能力，在滿足方法要求的情況下，開展檢測(cè)活動(dòng)的過程。首次使用標(biāo)準(zhǔn)方法前，檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)驗(yàn)證其在現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室條件（人員、設(shè)施設(shè)備、環(huán)境等)下，用該方法是否能獲得令人滿意的結(jié)果；當(dāng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變更，變更內(nèi)容涉及方法原理、環(huán)境設(shè)施、儀器設(shè)備、適用范圍、操作方法時(shí)，需重新進(jìn)行方法驗(yàn)證，證明其使用新標(biāo)準(zhǔn)的能力。

標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證需對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容對(duì)技術(shù)指標(biāo)要求不明確時(shí)，要從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六方面做好驗(yàn)證工作，才能使標(biāo)準(zhǔn)方法都能滿足要求。

2 方法驗(yàn)證步驟

方法驗(yàn)證的實(shí)施，需對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有情況，從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六個(gè)方面逐一進(jìn)行驗(yàn)證。

2.1 人員驗(yàn)證

人員指完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程所涉及的全部人員，一般指檢測(cè)人員，涉及到樣品采集時(shí)，也包括采樣人員、抽樣人員、收樣人員及樣品管理員等與化學(xué)檢測(cè)相關(guān)的人員。人員方面應(yīng)從數(shù)量、資質(zhì)等方面進(jìn)行驗(yàn)證。

在人員數(shù)量方面，同一檢測(cè)項(xiàng)目至少應(yīng)有兩名上崗的檢測(cè)人員，即確保雙人上崗。

在人員資質(zhì)方面，檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)驗(yàn)證檢測(cè)人員是否具有本領(lǐng)域工作經(jīng)歷，是否熟悉和掌握此標(biāo)準(zhǔn)方法、儀器的操作、維護(hù)保養(yǎng)及期間核查，并培訓(xùn)上崗，是否被授權(quán)儀器操作并對(duì)其進(jìn)行能力確認(rèn)等。采樣人員及其他相關(guān)人員，應(yīng)驗(yàn)證其是否理解標(biāo)準(zhǔn)條款，是否對(duì)其進(jìn)行能力確認(rèn)并滿足要求。所有人員的能力測(cè)試均可通過人員監(jiān)督、比對(duì)等方式進(jìn)行。

2.2 儀器設(shè)備驗(yàn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)所需儀器設(shè)備，包括檢測(cè)儀器、玻璃器皿及為確保滿足檢測(cè)環(huán)境條件而配備的監(jiān)控設(shè)備。

檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)驗(yàn)證相關(guān)儀器設(shè)備是否滿足方法要求，如判定儀器參數(shù)和性能等是否符合要求，儀器設(shè)備是否可溯源（是否檢定或校準(zhǔn)并確認(rèn)合格）等。以色譜儀器為例，除確認(rèn)儀器參數(shù)外，還應(yīng)確認(rèn)色譜柱是否符合要求。

2.3 檢測(cè)耗材驗(yàn)證

檢測(cè)耗材包括檢測(cè)所需樣品、試劑和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（樣品）。機(jī)構(gòu)應(yīng)驗(yàn)證檢測(cè)樣品的制備儲(chǔ)存是否滿足方法要求，管理是否科學(xué)；試劑純度是否符合要求，是否驗(yàn)收合格；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（樣品）是否可溯源。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證

機(jī)構(gòu)應(yīng)定期對(duì)所用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行查新，確保其為最新有效版本，即驗(yàn)證方法的有效性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行受控管理；標(biāo)準(zhǔn)如果足夠詳細(xì)，則可直接使用；若其內(nèi)容對(duì)檢測(cè)要求不夠明確時(shí)，檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)制定相對(duì)應(yīng)的作業(yè)指導(dǎo)書[1]。

2.5 環(huán)境驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件，包括測(cè)試條件和樣品、試劑的儲(chǔ)存條件。機(jī)構(gòu)應(yīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件（如溫濕度等），是否能滿足方法要求；實(shí)驗(yàn)室對(duì)環(huán)境條件的控制是否有效等。

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果有影響時(shí)，機(jī)構(gòu)應(yīng)配置相應(yīng)的監(jiān)控設(shè)備來監(jiān)控環(huán)境條件，并做好監(jiān)控記錄[2]。

2.6 技術(shù)指標(biāo)測(cè)試驗(yàn)證

當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)方法有明確技術(shù)指標(biāo)要求時(shí)，按方法內(nèi)容要求逐一進(jìn)行驗(yàn)證；技術(shù)指標(biāo)要求不明確的，做常用參數(shù)的驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果滿足一般要求即可。

2.6.1 測(cè)試參數(shù)的選擇

通過比較《檢測(cè)和核準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS-CL01-A002：2020）《環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則》（HJ168-2010）[3]、《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T27417-2017）[4]等中對(duì)方法性能參數(shù)的說明，發(fā)現(xiàn)檢出限、精密度、準(zhǔn)確度是必不可少的參數(shù)。

方法驗(yàn)證參數(shù)涉及檢出限、精密度、準(zhǔn)確度及標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的其它參數(shù)，如測(cè)定下限、線性范圍等。

2.6.2 常用參數(shù)測(cè)試驗(yàn)證過程

（1）線性范圍（標(biāo)準(zhǔn)曲線）的驗(yàn)證

若方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作有要求，按要求的濃度進(jìn)行測(cè)定；若沒有明確要求，可自行確定曲線濃度點(diǎn)，至少需要6個(gè)（包括零點(diǎn)），確保被測(cè)濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。

方法對(duì)線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)有要求的，測(cè)試結(jié)果應(yīng)滿足其要求。方法沒有要求的，定性或半定量方法需滿足：R≥0.98（R為曲線線性相關(guān)系數(shù)），定量方法則要滿足：R≥0.99[5]。

（2）檢出限的驗(yàn)證

目前常用的方法檢出限測(cè)定法是低濃度加標(biāo)法，即使用空白添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為樣品，按樣品分析的全部步驟，平行測(cè)定7次以上，計(jì)算檢出限。檢出限的計(jì)算公式：

式中：MDL——方法檢出限；

n——樣品的平行測(cè)定次數(shù)；

t——自由度為n-1，置信度為99%時(shí)的t值，詳見表1；

表1 t值表

S——n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（3）精密度的驗(yàn)證

精密度的確定，可采用標(biāo)準(zhǔn)樣品或?qū)嶋H樣品進(jìn)行測(cè)定，一般用高、中、低三種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，或1到3個(gè)同類型樣品，分別平行測(cè)定6次以上，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，與方法要求進(jìn)行對(duì)比，判定驗(yàn)證結(jié)果。

（4）準(zhǔn)確度的驗(yàn)證

方法準(zhǔn)確度的確定，可直接用有證標(biāo)物進(jìn)行測(cè)定，也可通過對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)測(cè)定，具體按方法要求進(jìn)行，方法無明確要求的，可以選擇至少其中一種方法進(jìn)行驗(yàn)證，若水利方法中無加標(biāo)量及加標(biāo)回收率范圍要求的，參照水環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)范的相關(guān)要求。

若利用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)確定準(zhǔn)確度，需對(duì)1～3個(gè)不同濃度的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別平行測(cè)定6次以上，計(jì)算相對(duì)誤差。若利用實(shí)際樣品加標(biāo)確定準(zhǔn)確度，需選擇至少3個(gè)加標(biāo)濃度，分別平行測(cè)定6次以上，計(jì)算加標(biāo)回收率。

用以上測(cè)定結(jié)果對(duì)比方法要求，確定是否滿足要求。

3 方法驗(yàn)證案例

如實(shí)驗(yàn)室新配備離子色譜儀一臺(tái)，在經(jīng)過方法選擇及標(biāo)準(zhǔn)查新后，決定選用《水質(zhì)無機(jī)陰離子（F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-、SO32-、SO42-）的測(cè)定 離子色譜法》（HJ84-2016）現(xiàn)行有效的方法，用作氟離子的檢測(cè)，在使用之前，需先做方法驗(yàn)證，方法驗(yàn)證內(nèi)容見表2。

表2 氟離子檢測(cè)HJ84-2016標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證內(nèi)容

4 總結(jié)

當(dāng)檢測(cè)人員對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，完成人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六個(gè)方面的驗(yàn)證后，可將驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行匯總，生成標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證表，驗(yàn)證表是整個(gè)驗(yàn)證過程及結(jié)果最直觀的反饋，內(nèi)容需包括驗(yàn)證項(xiàng)目、使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、方法有效性、適用范圍、方法要求、結(jié)果的符合性確認(rèn)信息、驗(yàn)證結(jié)論及上級(jí)審核意見等信息。

方法驗(yàn)證的過程和結(jié)果應(yīng)形成報(bào)告，并能提供驗(yàn)證過程的相關(guān)原始記錄及溯源文件，保證方法驗(yàn)證過程可追溯。