王澤帥，陸雨順，劉松鑫，李珊珊，孫印石※

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林 長春130112；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春130118）

據(jù)李時珍《本草綱目》記載，鹿茸、鹿鞭、鹿胎、鹿血和鹿心等均可入藥，具有很高的藥用價值和養(yǎng)生保健功能，其中鹿茸味甘，性溫，具有壯腎陽、益精血、強筋骨、調(diào)沖任和托瘡毒的功效[1]。作為傳統(tǒng)的名貴中藥，鹿茸因其具有豐富的藥理作用，已經(jīng)被廣泛使用了2 000多年[2]。隨著中醫(yī)學(xué)在世界范圍內(nèi)的崛起與應(yīng)用以及民眾對于健康意識的不斷增強，從20世紀(jì)末開始，鹿茸及鹿副產(chǎn)品在醫(yī)療保健用途上不斷擴充，市場需求不斷擴大，鹿產(chǎn)品越來越暢銷。但目前市售鹿產(chǎn)品品質(zhì)參差不齊，以次充好現(xiàn)象時有發(fā)生，嚴(yán)重影響消費者用藥的安全性和有效性。

鹿產(chǎn)品中外源性污染物主要來源有兩個，一是鹿生長過程中從所接觸的土壤、空氣、飼料和水等環(huán)境中吸附或積蓄；二是在養(yǎng)殖過程中疾病防治的藥物殘留以及加工、運輸和貯藏過程中造成的二次污染[3]。本文就鹿產(chǎn)品中常見外源污染物來源以及相關(guān)研究等進行綜述，以期為相關(guān)鹿產(chǎn)品開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 鹿產(chǎn)品中重金屬研究進展

重金屬可以通過飼料、飲水、空氣及其他接觸方式進入動物體內(nèi)，其中飼料和飲水是主要途徑。重金屬在動物體內(nèi)蓄積并經(jīng)食物鏈放大隨食品進入人體，引起機體的慢性損傷，影響神經(jīng)系統(tǒng)、新陳代謝和免疫機能[4]。進入人體的重金屬要經(jīng)過較長時間的積累才會顯示出毒性，因此早期往往不易被察覺，很難在毒性發(fā)作前引起足夠的重視，從而更加重了其危害性。

鹿產(chǎn)品中的重金屬元素有多種來源，例如鉛的來源主要有兩種：一種是受污染空氣的呼吸吸收；另一種是受污染食物的胃腸吸收，后者大部分是由于飼料作物表面的沉積，而作物從天然含鉛的土壤中吸收的鉛量很小；在飼養(yǎng)時，鹿也會吃一些土壤，因此土壤中的鉛也可能會增加機體的總負擔(dān)[5]。其次，在鹿茸生長過程中需要調(diào)動鹿全身的營養(yǎng)成分向鹿茸角聚集，其中就包括大量微量和常量無機元素[6]，可能會導(dǎo)致鹿茸中重金屬元素含量的蓄積。此外，加工、運輸以及外界環(huán)境的污染也會導(dǎo)致鹿茸中無機元素含量的差異，例如通過對比不同加工方式鹿茸中重金屬含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過煮炸的鹿茸16種無機元素（K、Ca、Na、Mg、P、Cu、Zn、Mn、Fe、Ni、Co、Cr、Pb、Cd、As和Hg）總量高于凍干茸[7]。

2020版《中華人民共和國藥典》四部中規(guī)定了原子吸收分光光度法和電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定Pb、Cd、As、Hg和Cu 5種金屬元素的方法；規(guī)定了高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜法測定汞、砷元素形態(tài)及價態(tài)的方法。我國現(xiàn)階段沒有關(guān)于鹿茸及鹿茸制品中重金屬含量規(guī)定的國家標(biāo)準(zhǔn)，2020版《中華人民共和國藥典》規(guī)定了39種中藥材的重金屬的限量標(biāo)準(zhǔn)，其中僅有鹿角膠一項鹿制品規(guī)定重金屬總量不得超過30 mg/kg，砷鹽不得超過2 mg/kg。我國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《鹿茸片》[8]、《地理標(biāo)志產(chǎn)品西豐鹿茸》[9]、國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中污染物限量》[10]和地方標(biāo)準(zhǔn)《地理標(biāo)志產(chǎn)品吉林梅花鹿鹿茸、鹿鞭、鹿尾、鹿血、鹿胎膏、鹿筋和鹿脫盤》[11]中均對Pb、Cd、As和Hg 4種重金屬含量做出規(guī)定，但標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一，詳細限量見表1。

表1 重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Limit standards of the heavy metals（mg/kg）

王燕華等[7]比較了不同加工方式及不同部位的梅花鹿鹿茸無機元素的含量差異，其結(jié)果認為元素Ca、P、Mg、Fe、Ni和Co的含量呈現(xiàn)蠟片、粉片和紗片依次增加的趨勢，元素K、Na、As及重金屬元素Cu、Zn、Mn、Cr、Pb、Cd和Hg則較多地分布在蠟片部位。同種加工方式的鹿茸無機元素的含量呈現(xiàn)蠟片、粉片和紗片依次升高的趨勢，且粉片、紗片部位明顯高于蠟片部位。商云帥等[12]對鹿茸和鹿肉中5種重金屬含量進行了檢測，應(yīng)用原子吸收光譜法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法、原子熒光光譜法和全自動汞分析儀測定Pb、Cd、As、Hg和Cu的含量，所測樣品中5種重金屬含量均遠低于《NY/T1162-2006鹿茸片》規(guī)定限量值。孫偉麗等[13]利用微波消解前處理及電感耦合等離子質(zhì)譜儀比較了梅花鹿三杈茸不同加工方式不同區(qū)段20種礦物質(zhì)元素含量的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重金屬元素Pb、Cd、As和Hg在鹿茸中含量很低，符合《食品中污染物限量》規(guī)定。趙海平等[14]從吉林省和山東省7個梅花鹿養(yǎng)殖區(qū)收集了42份鹿茸樣品，凍干處理保存，采用微波消解及電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定樣品中18種礦物質(zhì)元素含量，結(jié)果表明樣品中Pb、Cd、As和Hg均未超出《中華人民共和國藥典》（2015版）對中藥材重金屬質(zhì)量分數(shù)的規(guī)定，符合我國中藥材重金屬的安全性要求。Grazyna等[15]采集了赤鹿的肌肉、腎臟和肝臟樣本，用電感耦合等離子質(zhì)譜法檢測了包括鉛、鎘在內(nèi)的17種微量元素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個腎臟中Ba、Cd、Cr、Ga、Pb、Se、Sr和Ti的含量高于同一動物的肝臟或肌肉組織，其中新鮮肌肉組織、肝臟和整個腎臟中Cd的中位數(shù)分別為0.07、0.18和3.3 mg/kg，造成這種結(jié)果可能是因為鉛、鎘可以通過多種途徑進入動物體內(nèi)，且鎘會在動物腎臟中積累，含量隨著年齡的增加而增加。但考慮到允許攝入量的不確定性以及大多數(shù)人對鹿肉消費較少，他認為這兩種重金屬的風(fēng)險不一定很大。李倩等[16]用微波消解前處理及電感耦合等離子質(zhì)譜儀對梅花鹿鹿骨、鹿角和鹿髓中的無機元素進行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)按《中華人民共和國藥典》（2015版）的限量要求，鹿骨、鹿髓中的Hg、As、Cd及鹿角中的Cu、Hg、As和Cd的含量超標(biāo)。鹿茸中重金屬元素含量普遍較低，因此電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）和電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（ICP-OES）是目前常用的重金屬元素檢測方法，較原子吸收光譜（AAS）法而言，這兩種方法的檢出限低、靈敏度高且可同時分析多種元素。目前國內(nèi)有關(guān)鹿產(chǎn)品中重金屬的文章大多關(guān)注于含量檢測，對于梅花鹿、馬鹿鹿產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)鏈中土壤、飼料及鹿茸中重金屬來源以及重金屬在鹿茸中分布的研究依然較少。

2 鹿產(chǎn)品中抗生素研究進展

抗生素是指來源于微生物代謝產(chǎn)物及其衍生物，在低濃度下對其他微生物具有抑制或殺滅作用的藥物[17]。其中磺胺類藥物使用普遍，具有抗菌譜廣、吸收較迅速、較為穩(wěn)定及不易變質(zhì)等優(yōu)點[18]，在我國畜牧業(yè)中常用于預(yù)防和治療細菌感染性疾病。合理使用抗生素可以對動物疾病進行預(yù)防和治療，也可以促進畜禽生長，有效降低養(yǎng)殖成本[19]。例如鹿場中常見使用青霉素和硫酸卡那霉素對鹿的肺炎病進行治療以及使用肌肉注射恩諾沙星治療鹿的下痢疾病[20]。通常情況下動物源性食品中抗生素殘留并不會對人體產(chǎn)生致命性的影響，但人體內(nèi)抗生素積累到一定含量之后則會導(dǎo)致腸胃功能紊亂、影響臟器功能的不良反應(yīng)[21,22]。目前對人體危害最嚴(yán)重的的抗生素為青霉素，除此之外還有鏈霉素和氯霉素。抗生素不僅會在人體內(nèi)逐漸積累，導(dǎo)致體內(nèi)微生物群失調(diào)、肝腎功能異常等問題，還會造成人體對抗生素藥物耐藥性的增強，甚至危害生態(tài)環(huán)境的安全[23]。目前我國對于抗生素在養(yǎng)殖業(yè)的相關(guān)政策尚未完善，且我國對于鹿制品中抗生素殘留研究較少，抗生素殘留的問題已經(jīng)引起人們的重視。

國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)2020版《中華人民共和國藥典》對動物源產(chǎn)品中的抗生素檢測方法進行了規(guī)定，見表2。國內(nèi)外檢測抗生素常用技術(shù)包括高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、免疫分析法和微生物檢測法等。

表2 抗生素的檢測方法Table 2 Methods for the dection of antibiotics

王麗艷[30]對吉林、河南及其他一些省市地區(qū)臨床分離的鹿源致病性大腸桿菌進行了耐藥性的初步調(diào)查，選取了10株對-內(nèi)酰胺類抗生素具有不同耐藥強度的菌株進行了6種-內(nèi)酰胺類抗生素最小抑菌濃度的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10株菌對氨芐西林和阿莫西林的耐藥性很高，因此在治療前對病原進行耐藥性檢測十分必要。QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged和Safe）是近年來國際上最新發(fā)展起來的一種快速檢測的樣品前處理技術(shù)，具有快速、準(zhǔn)確、高效的特點。黃勝廣等[31]采用QuECHERS前處理技術(shù)，以乙腈-乙酸乙酯為提取劑，150 mg乙二胺基-N-丙基、100 mg C18與70 mg中性氧化鋁為凈化劑，建立了一種UPLCMS/MS同時測定梅花鹿鹿茸中36種獸藥殘留的方法，其中包括頭孢噻呋、頭孢拉定等5種頭孢類抗生素獸藥，其方法操作簡單，凈化效果顯著。Walt等[32]對白尾鹿肌肉注射氟苯尼考、頭孢噻呋、圖拉霉素、土霉素和莫西替丁5種抗生素，并在注射后11 d、21 d和31 d檢測肌肉和肝臟樣本中藥物殘留含量；在3個時間點的肌肉和肝臟樣品中僅檢測出圖拉霉素平均含量為0.69 mg/kg，在所有樣品中均未檢測出氟苯尼考、頭孢噻呋或莫西替丁，在11 d的肝臟樣品中檢測出了土霉素，含量為0.05 mg/kg；組織中殘留的抗生素含量均低于美國食品藥品管理局標(biāo)準(zhǔn)。Anderson等[33]利用加熱電噴霧電離（HESI）和大氣壓化學(xué)電離（APCI）優(yōu)化了靈敏度，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了白尾鹿組織中氟苯尼考殘留的確認和檢測方法，肝臟和肌肉中檢測結(jié)果為0.4~0.6g/g和0.02~0.05g/g，低于美國食品藥品管理局標(biāo)準(zhǔn)。

國際食品法典委員會和歐盟等規(guī)定食品中的磺胺總量不能超過100g/kg，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定磺胺類藥物的總殘留量最高為100g/kg[34]。我國對動物源食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法規(guī)定見表3。

表3 磺胺類藥物檢測方法Table 3 Testing methods of sulfa drugs

黃勝廣等[42,43]采用分散固相萃取的前處理技術(shù)、UPLC-MS/MS法同時測定梅花鹿鹿茸及鹿鞭中的18種磺胺。樣品以乙腈為提取劑，以PSA（乙二胺基-N-丙基）、C18（十八烷基硅烷）與中性氧化鋁為凈化劑，鹿茸及鹿鞭中檢出的磺胺類藥物殘留均小于0.5g/kg，并未超出食品標(biāo)準(zhǔn)中磺胺限量。此操作簡便，凈化效果顯著，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，檢出限低。Jiang等[44]開發(fā)了一種新的雙比色酶聯(lián)免疫吸附法（DC-ELISA），可同時檢測牛奶中22種磺胺類藥物。氟喹諾酮類和磺胺類藥物的檢出限分別為2.4 ng/mL和5.8 ng/mL，其所開發(fā)的免疫分析方法適用于低分子量污染物的高通量篩選。該方法將兩種不同的酶（堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶）同時用于單次免疫測定的每個孔中，用于檢測多種低分子量化合物。HPLC法靈敏度低，抗干擾能力差；GC-MS法樣品需經(jīng)衍生化處理，操作復(fù)雜；酶聯(lián)免疫分析法重復(fù)性較低，穩(wěn)定性較差；UPLC-MS法具有選擇性強、靈敏度高和檢測限低等優(yōu)點，是目前最常采用的磺胺類藥物殘留的檢測方法。

3 鹿產(chǎn)品中鎮(zhèn)靜劑類藥物研究進展

鹿茸的采收是在鹿茸快速生長期，這一時期的鹿茸具有豐富的血管、神經(jīng)和軟骨組織[45]，并且公鹿體型龐大，具有一定的攻擊性，若直接保定鋸茸，會給鹿帶來較大的痛苦和應(yīng)激反應(yīng)，容易發(fā)生意外事故。出于動物福利和人員安全考慮，養(yǎng)殖戶會在采茸前對鹿進行充分地麻醉，將鹿麻倒后再鋸茸。鹿用麻醉劑的主要成分為鹽酸賽拉嗪（Xylazine，鹽酸二甲苯胺噻嗪，商品名隆朋），是第一個廣泛用于動物的-2腎上腺素能受體激動劑，不同劑量使動物產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、肌松和麻醉等效應(yīng)[46]。從藥物殘留問題來看，采茸后鹿茸中的藥物殘留不僅可能會影響到鹿茸的藥理作用，還對人類健康具有潛在的危害[47]。長期食用含有賽拉嗪殘留的動物源食品可能會表現(xiàn)出惡心、嘔吐、頭暈、無力、四肢及口舌麻木等癥狀。賽拉嗪在肝微粒體中的主要代謝產(chǎn)物是由CYP3A介導(dǎo)的，在體內(nèi)吸收、代謝和分解的速度很快，半衰期為4.1 min，其主要代謝產(chǎn)物為2,6-二甲基苯胺（2,6-Dimethylaniline,DMA）[48]。2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)將其列于2B類致癌物清單中。

目前動物福利已經(jīng)是畜牧業(yè)發(fā)展中不可缺少的重要內(nèi)容，鹿的福利問題影響鹿茸及鹿副產(chǎn)品在市場中的銷售，決定著養(yǎng)殖者的利潤。在澳大利亞、新西蘭等地的養(yǎng)鹿業(yè)中普遍使用利多卡因進行局部麻醉[49]，但是該法需要一定的設(shè)備，成本較全身麻醉高。目前國內(nèi)通常都使用全身麻醉的方法，即通過吹針在鹿的臀部注射麻醉藥進行麻醉，一般用藥10~15 min后，鹿處于全身麻醉狀態(tài)，此時可進行鋸茸。鋸茸結(jié)束后采用結(jié)扎止血法，止血后可按照麻醉藥用量的1:1肌肉注射麻醉拮抗藥如蘇醒靈或鹿醒寶等消除麻醉作用[50]。此種方法進行麻醉的設(shè)備簡單、操作方便、成本低廉，但是從行為學(xué)角度觀察表明，其對鹿產(chǎn)生了極大地傷害，不僅從倫理和福利上欠妥，而且還有可能造成鹿茸中的藥物殘留。

國家標(biāo)準(zhǔn)（GB31660.6-2019）[51]規(guī)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測動物性食品中5種2-受體激動劑殘留，我國對于鹽酸賽拉嗪的殘留量限量標(biāo)準(zhǔn)不多，僅在《農(nóng)業(yè)部235號公告動物性食品中獸藥最高殘留限量》[34]中對賽拉嗪等鎮(zhèn)靜劑做出規(guī)定，見表4。

表4 動物性食品中鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留限量Table 4 Residue limits for tranquilizers in animal feeding stuffs

高明輝等[52]分別于馬鹿割茸前后從頸靜脈采取血樣，用于檢測賽拉嗪對機體抵抗力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)割茸后1 h血清殺菌活性降低，割茸后3 h又恢復(fù)到原來水平；IgM含量在24 h略有下降，48 h后恢復(fù)到正常水平，即馬鹿割茸時注射賽拉嗪不引起血清中殺菌活性、溶菌酶活性以及IgG和IgM的實質(zhì)性變化。尹柏雙等[53]通過給梅花鹿注射復(fù)合麻醉劑，監(jiān)測了梅花鹿麻醉后血壓及檢測靜脈血中（PRA）腎素、醛固酮（ALD）、血管緊張素（AⅡ）、心鈉素（ANP）和降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）含量，研究發(fā)現(xiàn)血漿中ANP、AⅡ、ALD和PRA含量呈先降低后升高的趨勢，于麻醉劑注射后75 min時達到最低點；CGRP含量先升高后降低，于麻醉劑注射后75 min時達到最高點，各項指標(biāo)在麻醉劑注射后120 min恢復(fù)到正常水平。Kovacova等[54]應(yīng)用細胞體外模型檢查了氯胺酮、甲苯噻嗪和氯胺酮甲苯噻嗪混合物對鹿的細胞毒性，與從心臟和腎臟培養(yǎng)的細胞相比，肝源性細胞對氯胺酮和甲苯噻嗪作為單一藥物的細胞毒作用表現(xiàn)出更高的敏感性，氯胺酮甲苯噻嗪混合物對腎源性細胞的細胞毒性顯著提高。

黃勝廣等[55]采用分散固相萃取的前處理技術(shù)，建立了一種UPLC-MS/MS法同時測定梅花鹿鹿茸中賽拉嗪和代謝產(chǎn)物2,6-二甲基苯胺的方法，結(jié)果表明在70只鹿茸中有4只檢出賽拉嗪，其中1只未達到定量限；各鹿茸樣品均未檢出賽拉嗪代謝產(chǎn)物2,6-二甲基苯胺，原因可能為賽拉嗪代謝物是苯胺衍生物，是非常易揮發(fā)的物質(zhì)，且代謝物的濃度太小，保留時間短，代謝物可能與溶劑一起洗脫。Dickson等[56]檢測了新西蘭馬鹿茸中的賽拉嗪殘留量，采用高效液相色譜法半定量確認提取物中賽拉嗪的存在，定量結(jié)果用氣相色譜法測定，測得鹿茸中賽拉嗪含量在70~220 ng/g之間。鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留檢測方法主要集中于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，該方法分析范圍廣、分離能力強且靈敏度高，相較其他檢測方法應(yīng)用更加普遍。目前國內(nèi)外對于鹿麻醉劑代謝途徑、代謝產(chǎn)物及鹿產(chǎn)品中麻醉劑殘留研究較少。

4 鹿產(chǎn)品中激素類藥物研究進展

鹿茸是目前發(fā)現(xiàn)的唯一可以完全再生的哺乳動物附屬器官[57]，具有年周期性再生的特性，角柄和初角茸的形成及鹿茸的再生與雄激素濃度變化密切相關(guān)。鹿茸角在整個生長周期內(nèi)都受體內(nèi)睪酮含量的嚴(yán)格控制[58]。在實際生產(chǎn)中，當(dāng)頭茬茸采收之后，在鋸口處會自然生長出再生茸，但是該再生茸往往不規(guī)則、重量低且骨化程度較高，影響再生茸的經(jīng)濟價值。若在頭茬茸采收后人為地控制鹿體內(nèi)睪酮的水平，則可延緩鹿茸的骨化，降低鹿只性欲，既可提高再生茸的產(chǎn)量，又能減少爭偶角斗傷亡。給梅花鹿注射增茸素可以促進二茬茸的發(fā)育，增加二茬茸的質(zhì)量，但是經(jīng)抗雄性激素處理的鹿茸產(chǎn)量及壽命可能會受到影響，且鹿茸可能會涉及到藥物殘留等問題。增茸素大多為抗雄性激素或孕酮制成的藥物緩釋劑，常見有醋酸氯地孕酮、康士得和氟他胺等[59]。通常是在頭茬茸采收后將激素緩釋劑一次性皮下注射于頸背部或角基處。由于增茸素的釋放是一個緩釋的過程，往往會導(dǎo)致再生茸中增茸素殘留，長時間食用含有孕激素的食品可能影響人體的激素平衡，產(chǎn)生惡心、頭痛和月經(jīng)紊亂等問題[60]。

目前對于鹿茸中激素殘留的研究較少。我國農(nóng)業(yè)部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》[34]中規(guī)定，醋酸氟孕酮最高殘留限量為1g/kg，對醋酸氯地孕酮并未做出明確限定，各激素規(guī)定見表5。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第176號公告中《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》[61]收錄了醋酸氯地孕酮。此外，我國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 21981-2008）規(guī)定了液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定動物源食品中50種激素殘留量的方法[62]。

表5 動物性食品中激素類藥物殘留限量Table 5 Hormone drug residue limits in animal feeding stuffs

激素的檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。氣相色譜法和液相色譜法的靈敏度較低，特異性差，不適用于痕量獸藥殘留分析的要求[63]。黃勝廣等[64]采用分散固相萃取的前處理技術(shù)，建立了一種UPLC-MS/MS法同時測定梅花鹿鹿茸中包括醋酸氯地孕酮在內(nèi)的5種外源孕激素的檢測方法。鹿茸樣品以乙腈為提取劑，50 mg PSA與30 mg中性氧化鋁為凈化劑，結(jié)果5種孕激素在0.2~10 ng/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加標(biāo)回收率為80.1%~105.4%，RSD均小于5%。Lu等[65]建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定鹿茸中18種性激素的分析方法。鹿茸中的性激素經(jīng)固相萃取富集和凈化，經(jīng)七氟丁酸酐衍生處理，實現(xiàn)了包括睪酮、孕酮在內(nèi)的18種性激素的有效分離，并在3份鹿茸樣品中檢測出了甲羥孕酮，4份樣品中檢出了乙炔雌二醇，這兩種激素都為外源激素。王任晶等[66]應(yīng)用放射免疫方法測定了31批梅花鹿茸藥材及其飲片中睪酮、孕酮和雌二醇3種激素含量，結(jié)果顯示梅花鹿藥材中梅花鹿脫盤中激素含量最高，飲片中蠟片激素含量最高，為梅花鹿藥材及其飲片的品質(zhì)評價提供了依據(jù)。由于激素種類繁多，相對分子質(zhì)量大，檢測難度較大。氣相色譜法要求分析物有較低的沸點和很好的揮發(fā)性，由于激素單體性質(zhì)的差異常需要對其進行多種衍生處理[67]，雖然氣相色譜法也能實現(xiàn)對其定性和確證分析，但需要衍生處理而太耗時，不能滿足快速分析的需要。有的激素也不容易通過衍生得到很好的極性和熱穩(wěn)定性，因此激素殘留檢測的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)多采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。

5 食源性病原微生物研究進展

我國對于食品中微生物菌落總數(shù)、大腸菌群、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌的檢驗均制定了國家標(biāo)準(zhǔn)[68-73]?！吨腥A人民共和國藥典》[21]、國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中致病菌限量》[74]及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《鹿茸片》[7]對微生物指標(biāo)做出規(guī)定（見表6）?，F(xiàn)階段國內(nèi)外常用的食源性致病菌監(jiān)測技術(shù)主要有傳統(tǒng)生化鑒定 法、免疫學(xué)檢測技術(shù)、PCR技術(shù)、色譜及其聯(lián)用技術(shù)等。

表6 微生物殘留限量Table 6 The limits of microbial resibues

班碩等[75]用濃度為2%的醋酸溶液噴涂后，在距離紫外燈53.38 cm的距離用紫外線照射120 s，在此條件下，鹿肉的初始菌落明顯降低了97.5%。梅妹等[76]對長春市周邊地區(qū)的梅花鹿源大腸桿菌進行分離、培養(yǎng)和生化反應(yīng)鑒定，測定了菌株對15種抗菌藥物的敏感性，并且應(yīng)用PCR方法檢測了9種耐藥基因。結(jié)果表明，菌株對磺胺類和四環(huán)素耐藥性最嚴(yán)重，而且大多數(shù)菌株呈多重耐藥性。傳統(tǒng)的細菌檢測方法，如培養(yǎng)和菌落計數(shù)法，可能需要幾個小時甚至幾天才能得出結(jié)果[77]。近年來，食源性致病菌的免疫學(xué)檢測技術(shù)飛速發(fā)展。任曉航[78]根據(jù)鹿茸及鹿血中布魯氏菌和結(jié)合分歧桿菌的特異性基因序列，設(shè)計合成特異性引物和探針，成功分別建立了兩種菌株的實時熒光定量PCR檢測方法。膠體金法快速診斷方法具有較好的特異性，不需要專門儀器、不需要進行專業(yè)培訓(xùn)并且具有簡便快速的優(yōu)點，能達到快速診療的目的，但該方法靈敏度較差，容易造成漏診?；蛐酒?、基因探針等雖具有靈敏度高、檢測時間短等優(yōu)點，但試劑價格昂貴，需要一些特殊的設(shè)備、場地和專門的技術(shù)人員，目前只是處于實驗室研究階段。

6 結(jié)語與展望

動物類藥材是中醫(yī)臨床方劑的重要組成部分，可替代品種少，療效獨特，地位十分重要。隨著我國人民健康意識的提高，市場對鹿產(chǎn)品的需求逐漸增加，特別是對于優(yōu)質(zhì)梅花鹿茸更是供不應(yīng)求。鹿茸作為動物藥之首，其品質(zhì)直接關(guān)系著臨床療效和用藥安全。目前鹿茸藥材主要來源于人工養(yǎng)殖，養(yǎng)殖過程中重金屬的引入、獸藥殘留及加工和貯藏過程中食源性病原微生物的污染都有可能影響鹿茸及鹿產(chǎn)品的品質(zhì)。隨著國家“中藥標(biāo)準(zhǔn)化”進程的推進，提高與完善動物類藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加指標(biāo)性及專屬性成分含量的檢測，提高動物藥材、飲片真?zhèn)舞b別的準(zhǔn)確性、增加針對性的檢查項目，如水分、灰分、重金屬、微生物和獸藥殘留等檢測，避免增重、摻假使假現(xiàn)象，提高鹿茸及鹿副產(chǎn)品安全性等是鹿產(chǎn)品需要重點解決的問題之一。