姚彩虹 ，許旭東，龔小妹，周小雷*，羅祖良*

1.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023

2.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193

3.新疆大學生命科學與技術學院，新疆 烏魯木齊 830046

彭縣雪膽Hemsleya pengxianensisW.J.Chang為葫蘆科（Cucurbitaceae）雪膽屬HemsleyaCogn.ex F.B.Forbes & Hemsl.植物，主要分布于云南、貴州、四川、重慶等地[1]。現(xiàn)代研究表明，彭縣雪膽主要含有葫蘆烷三萜類、木脂素類、有機酸類等成分[2]。目前，以化學成分雪膽素為主的雪膽素膠囊以及“苗藥”雪膽腸胃丸已在市場有售，主要用于治療菌痢、腸炎、支氣管炎、急性扁桃體炎[3]，有著良好的開發(fā)前景。為進一步完善其藥效物質基礎，發(fā)現(xiàn)具有活性的化學成分，對瑤藥彭縣雪膽醋酸乙酯萃取部位進行了系統(tǒng)的分離，結合多種色譜分離方法，共分離得到17個葫蘆烷三萜類化合物，分別鑒定為彭縣雪膽萜A（hemsleyacin A，1）、jinfushanencin B（2）、短柄雪膽苷D（delavanoside D，3）、scandenogenin D（4）、jinfushanencin C（5）、jinfushanoside D（6）、hexanorcucurbitacin F（7）、短柄雪膽A（delavanoside A，8）、cucurbitacin V（9）、hemslepenside A（10）、jinfushanencin F（11）、scandenoside R3（12）、scandenoside R2（13）、巨花雪膽G（hemslecin G，14）、jinfushanoside A（15）、cucurbitacine F（16）、16-O-acetyl-cucurbitacin F（17），其中化合物1為新化合物，化合物2～9為首次從該屬植物中分離得到。采用MTT法對以上所分離得到化合物進行了體外抗腫瘤細胞活性篩選。結果表明，化合物1、5、10、14、16～17對HeLa細胞具有良好的抑制作用，半數(shù)抑制濃度（median inhibitory concentration，IC50）為2.82～7.13 μmol/L。

1 材料與方法

BrukerAvanceⅢ600型核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；HW-40C凝膠（Toyopearl公司）；賽默飛世爾LTQ-Obitrap XL液質聯(lián)用儀、LTQ-Obitrap XL型質譜儀（美國Thermo Fisher公司）；制備型Aglient高效液相色譜儀（美國Aglient公司）；MCI（日本三菱化學公司）；柱色譜硅膠、薄層色譜用硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）；RE-2000B型旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；常規(guī)試劑均為分析純，娃哈哈水。

藥材于2017年采自于廣西南寧，經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學院高山經(jīng)濟植物研究所易思蓉教授鑒定為葫蘆科雪膽屬植物彭縣雪膽H.pengxianensisW.J.Chang的干燥塊根，標本（CS170925）保存于廣西藥用植物園實驗室。

2 提取與分離

雪膽塊根10.0 kg粉碎后，以95%乙醇回流提取3次，每次3 h，回收乙醇得浸膏約1.1 kg。以3 L水溶解此浸膏后，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次1 L，減壓回收溶劑，得醋酸乙酯萃取物（350 g）。醋酸乙酯部位浸膏（350 g）經(jīng)硅膠柱色譜以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）進行梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜示蹤合并相同組分，共得到6個部分Fr.1～6。Fr.1經(jīng) MCI柱色譜分離，30%～100%甲醇梯度洗脫，得到7個組分（Fr.1.1～1.7）。Fr.1.2經(jīng)制備型HPLC（乙腈-水28∶72）制備得到化合物1（2.2 mg，tR＝13.1 min）、2（1.8 mg，tR＝15.1 min）。Fr.1.4經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇-二氯甲烷1∶1）及半制備高效液相色譜（乙腈-水35∶65）制備得到化合物3（3.0 mg，tR＝15.1 min）、4（2.3 mg，tR＝17.8 min）、5（2.6 mg，tR＝25.3 min）。Fr.2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇）及半制備高效液相色譜（乙腈-水25∶75）制備得到化合物6（2.1 mg，tR＝15.6 min）、7（3.1 mg，tR＝18.9 min）、8（3.1 mg，tR＝24.6 min）。Fr.3經(jīng)過反相RP-18柱色譜分離，30%～100%甲醇水梯度洗脫，得到6個組分（Fr.3.1～3.6）。Fr.3.3經(jīng)制備型 HPLC（乙腈-水38∶62）制備得到化合物9（2.6 mg，tR＝15.1 min）、10（1.8 mg，tR＝19.1 min）、11（2.6 mg，tR＝24.5 min）。Fr.4經(jīng)硅膠柱（200～300目）色譜，二氯甲烷-甲醇（40∶1～0∶1）梯度洗脫得到6個流分Fr.4.1～4.6。Fr.4.2經(jīng)制備型HPLC（乙腈-水37∶63）制備得到化合物12（2.6 mg，tR＝13.6 min）、13（1.9 mg，tR＝8.1 min）、14（2.1 mg，tR＝25.5 min）。Fr.4.3經(jīng)過反相RP-18柱色譜分離，40%～100%甲醇梯度洗脫，得到6個組分（Fr.4.3.1～4.3.6）。Fr.4.3.4經(jīng)制備型HPLC（乙腈-水38∶62）制備得到化合物15（3.2 mg，tR＝17.3 min）、16（1.9 mg，tR＝20.5 min）、17（2.6 mg，tR＝24.7 min）。

3 結構鑒定

化合物1：白色粉末，易溶于甲醇，[α]20D＋19.1°（c0.1，MeOH）。HR-ESI-MS顯示準分子離子峰m/z:641.332 0 [M＋Na]+（計算值C34H50O10Na, 641.330 2），結合1H-NMR和13C-APT推斷該化合物的分子式為C34H50O10，不飽和度為11。UV圖譜顯示化合物在222 nm處有較強吸收，說明結構中存在共軛體系。IR圖譜顯示結構中存在羥基（3404、3422、3437 cm-1），甲基（2942、2839 cm-1），羰基（1710 cm-1）。

化合物1的1H-NMR（表1）在高場區(qū)顯示7個甲基信號δH1.18 (s), 1.24 (s), 1.37 (s), 1.40 (s),1.51(s), 2.13(s), 1.91 (s)；1個烯烴的質子信號δH6.46(brs)。13C-APT（表1）譜給出36個碳信號，包括7個甲基信號δC20.3, 21.5, 19.6, 23.4, 25.2, 21.6,22.6，5個亞甲基信號δC35.6, 49.4, 44.3, 33.1, 35.6，7個次甲基信號70.3, 80.6, 124.6, 58.4, 36.7, 74.8,56.0，7個季碳信號δC44.7, 168.3, 48.1, 49.3, 50.4,80.1, 81.6，3個羰基信號δC216.2, 211.0, 199.7，2個酯基信號δC170.9, 170.6?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與已知化合物巨花雪膽G[4]基本相似，不同之處在于化合物1額外存在1個羰基和乙?；盘?。進一步分析13C-APT數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在羰基的影響下，化合物1的C-5 (δC168.3), C-6 (δC124.6), C-7 (δC199.7) 較巨花雪膽G的C-5 (δC145.7), C-6 (δC122.9), C-7 (δC66.4) 向低場位移；C-16乙酰氧基取代后，化合物1的C-16 (δC74.8) 較巨花雪膽G的C-16 (δC71.3)向低場位移。HMBC（圖1）譜圖中，H-6 (δH6.47)與C-7 (δC199.7) 相關，H-16 (δH6.07) 與C-16位羰基 (δC170.9) 相關，提示羰基和乙?；謩e存在于C-7和C-16位。1H-NMR譜中C-3氫信號表現(xiàn)為δH3.53 (1H, d,J= 2.4 Hz)，提示A環(huán)中存在2,3位置的順式二醇的結構。NOESY譜顯示，H-3和CH3-24，H-16和CH3-27存在相關，提示2-OH，3-OH及16-OAc均處于α位。因此，化合物1的結構被鑒定為2α,3α,20-三羥基葫蘆素-16,25-二乙酰氧基-5-烯-7,11,22-三酮，命名為彭縣雪膽萜A。

圖1 化合物1的1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關Fig.1 Key 1H-1H COSY, HMBC and NOESY correlations of compound 1

表1 化合物1的NMR數(shù)據(jù) (600 MHz for 1H-NMR, 150 MHz for 13C-APT, in pyridine-d5)Table 1 NMR data (600 MHz for 1H-NMR, 150 MHz for 13C-APT, in pyridine-d5) of compound 1

化合物2：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:495.216 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 0.69 (3H, s, H-18), 1.25 (3H, s, H-19), 0.86 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-21), 1.15 (3H, s, H-28), 1.43 (3H, s,H-29), 1.01 (3H, s, H-30), 3.71 (1H, s, H-3), 5.70 (1H,d,J= 4.8 Hz, H-6), 5.91 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-24),4.72 (2H, s, H-26), 4.73 (2H, s, H-27)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 21.7 (C-1), 30.2 (C-2), 76.0(C-3), 42.3 (C-4), 141.9 (C-5), 119.4 (C-6), 24.6(C-7), 44.4 (C-8), 49.2 (C-9), 36.3 (C-10), 214.3(C-11), 49.5 (C-12), 49.5 (C-13), 50.0 (C-14), 34.9(C-15), 28.4 (C-16), 50.0 (C-17), 17.3 (C-18), 20.6(C-19), 36.4 (C-20), 18.3 (C-21), 36.4 (C-22), 24.9(C-23), 141.3 (C-24), 127.8 (C-25), 65.8 (C-26), 58.9(C-27), 18.5 (C-28), 26.7 (C-29), 28.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[5]，故鑒定化合物 2為jinfushanencin B。

化合物3：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:641.497 0 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 0.68 (3H, s, H-18), 1.12 (3H, s, H-19), 0.83 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-21), 1.83 (2H, s, H-27), 0.95 (3H, s,H-28), 1.10 (3H, s, H-29), 1.55 (3H, s, H-30), 3.62(1H, s, H-3) , 5.50 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6), 5.72 (1H,t,J= 6.6 Hz, H-24), 4.31 (2H, s, H-26), 4.89 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ:22.3 (C-1), 28.9 (C-2), 87.6 (C-3), 42.4 (C-4), 141.7(C-5), 118.9 (C-6), 24.5 (C-7), 44.3 (C-8), 49.1 (C-9),36.3 (C-10), 214.1 (C-11), 49.4 (C-12), 49.5 (C-13),50.0 (C-14), 34.9 (C-15), 28.4 (C-16), 50.0 (C-17),17.3 (C-18), 20.7 (C-19), 36.2 (C-20), 18.6 (C-21),37.2 (C-22), 25.0 (C-23), 125.5 (C-24), 136.8 (C-25),68.5 (C-26), 14.4 (C-27), 19.2 (C-28), 28.7 (C-29),26.2 (C-30); 3-Glc: 107.8 (C-1′), 75.9 (C-2′), 79.1(C-3′), 72.2 (C-4′), 78.6 (C-5′), 63.4(C-6′)，以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[6]，故鑒定化合物3為短柄雪膽苷D。

化合物4：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:541.321 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.28 (3H, s, H-18), 1.22 (3H, s, H-19), 1.46 (3H, s,H-21), 1.36 (3H, s, H-28), 1.29 (3H, s, H-29), 1.43(3H, s, H-30), 4.11 (1H, m, H-2), 3.42 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3), 5.69 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6), 5.11 (1H, m,H-16), 5.15 (1H, m, H-23), 6.71 (1H, d,J= 8.4 Hz,H-24), 4.73 (2H, s, H-26), 4.72 (2H, s, H-27)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 34.4 (C-1), 70.7(C-2), 81.2 (C-3), 42.6 (C-4), 142.2 (C-5), 118.5(C-6), 24.0 (C-7), 42.6 (C-8), 49.0 (C-9), 34.0 (C-10),212.9 (C-11), 48.6 (C-12), 48.5 (C-13), 48.5 (C-14),41.5 (C-15), 70.3 (C-16), 55.8 (C-17), 19.9 (C-18),20.3 (C-19), 72.2 (C-20), 30.0 (C-21), 46.4 (C-22),70.6 (C-23), 128.3 (C-24), 142.1 (C-25), 65.3 (C-26),58.2 (C-27), 21.6 (C-28), 22.1 (C-29), 25.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[7]，故鑒定化合物4為scandenogenin D。

化合物5：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:615.420 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.28 (3H, s, H-18), 1.30 (3H, s, H-29), 1.42 (3H, s,H-28), 1.51 (3H, s, H-26), 1.45 (3H, s, H-27), 1.54(3H, s, H-19), 1.51 (3H, s, H-30), 1.60 (3H, s, H-21),3.38 (3H, s, CH3-7), 3.49 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3),4.15 (1H, m, H-2), 3.67 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-7), 4.94(1H, m, H-16), 6.10 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 34.8 (C-1), 71.2(C-2), 81.4 (C-3), 43.7 (C-4), 147.4 (C-5), 119.4(C-6), 76.7 (C-7), 48.7 (C-8), 48.9 (C-9), 35.6 (C-10),213.4 (C-11), 49.6 (C-12), 48.1(C-13), 50.8 (C-14),46.9 (C-15), 70.7 (C-16), 59.5 (C-17), 20.7(C-18),21.9 (C-19), 80.4 (C-20), 25.8 (C-21), 215.2 (C-22),32.6 (C-23), 35.7 (C-24), 82.2 (C-25), 26.3 (C-26),26.5 (C-27), 19.7 (C-28), 23.3 (C-29), 26.0 (C-30)170.6 (-OOCCH3), 22.4 (-OOCCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[8]，故鑒定化合物5為jinfushanencin C。

化合物6：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:497.370 1 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 0.89 (3H, s, H-18), 1.46 (3H, s, H-29), 0.95 (3H, s,H-28), 4.71 (2H, s, H-26), 4.72 (2H, s, H-27), 1.37(3H, s, H-19), 1.22 (3H, s, H-30), 0.94 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-21), 3.76 (1H, s, H-3) , 4.20 (1H, m, H-11),5.69 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6), 5.90 (1H, t,J= 6.0 Hz,H-24)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 26.2(C-1), 31.3 (C-2), 76.7 (C-3), 42.8 (C-4), 144.8 (C-5),119.6 (C-6), 25.2 (C-7), 44.0 (C-8), 40.6 (C-9), 36.5(C-10), 78.3 (C-11), 41.3 (C-12), 47.8 (C-13), 50.3(C-14), 34.9 (C-15), 28.7 (C-16), 51.2 (C-17), 17.8(C-18), 26.8 (C-19), 37.5 (C-20), 19.9 (C-21), 37.4(C-22), 25.2 (C-23), 128.2 (C-24), 141.5 (C-25), 65.4(C-26), 58.9 (C-27), 19.0 (C-28), 27.3 (C-29), 27.5(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[8]，故鑒定化合物6為jinfushanoside D。

化合物7：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:427.333 3 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.22 (3H, s, H-18), 1.31 (3H, s, H-29), 0.79 (3H, s,H-28), 1.47 (3H, s, H-19), 1.54 (3H, s, H-30), 2.14(3H, s, H-21), 3.49 (1H, d,J= 6.6 Hz, H-3), 4.09 (1H,m, H-2), 3.43 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-16), 5.72 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ:35.1 (C-1), 71.3 (C-2), 81.9 (C-3), 43.3 (C-4), 142.9(C-5), 118.9 (C-6), 24.6 (C-7), 43.8 (C-8), 49.5 (C-9),34.8 (C-10), 212.4 (C-11), 47.8 (C-12), 50.9 (C-13),49.6 (C-14), 46.5 (C-15), 71.7 (C-16), 68.4 (C-17), 19.6(C-18), 20.4 (C-19), 209.0 (C-20), 32.1 (C-21), 20.7(C-28), 22.8 (C-29), 25.9 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[7]，故鑒定化合物7為hexanorcucurbitacin F。

化合物8：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:803.458 0 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz,pyridine-d5)δ: 0.71 (3H, s, H-18), 1.24 (3H, s, H-19),0.83 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-21), 1.01 (3H, s, H-28),1.14 (3H, s, H-29), 1.42 (3H, s, H-30), 3.71 (1H, brs,H-3), 5.67 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6), 5.40 (1H, t,J=7.2 Hz, H-24), 4.56 (2H, s, H-27); 4.93 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′), 5.36 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′′)；13C-NMR(150 MHz, pyridine-d5)δ: 21.7 (C-1), 30.2 (C-2), 76.0(C-3), 42.3 (C-4), 141.8 (C-5), 119.4 (C-6), 24.6(C-7), 44.4 (C-8), 49.5 (C-9), 37.2 (C-10), 214.4(C-11), 49.2 (C-12), 49.5 (C-13), 50.0 (C-14), 35.0(C-15), 28.5 (C-16), 50.0 (C-17), 17.4 (C-18), 20.6(C-19), 36.4 (C-20), 18.9 (C-21), 37.2 (C-22), 25.3(C-23), 130.4 (C-24), 132.6 (C-25), 22.3 (C-26), 67.7(C-27), 18.6 (C-28), 20.6 (C-29), 26.7 (C-30);27-Glc(inner): 101.8 (C-1′), 84.2 (C-2′), 78.6 (C-3′),71.8 (C-4′), 78.4 (C-5′), 63.1 (C-6′); 26-Glc(terminal):106.8 (C-1′′), 77.3(C-2′′), 79.0 (C-3′′), 71.9 (C-4′′),78.7 (C-5′), 62.9 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[6]，故鑒定化合物8為短柄雪膽苷A。

化合物9：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:511.340 9 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.24 (3H, s, H-18), 1.27 (3H, s, H-19), 1.62 (3H, s,H-28), 1.12 (3H, s, H-29), 1.41 (3H, s, H-30), 1.55(3H, s, H-21), 1.51 (3H, s, H-26), 1.51 (3H, s, H-27),3.71 (1H, s, H-3), 5.25 (1H, m, H-16), 5.66 (1H, s,H-6)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 21.0 (C-1),29.7 (C-2), 75.3 (C-3), 41.7 (C-4), 141.2 (C-5), 118.8(C-6), 24.1 (C-7), 43.3 (C-8), 49.2 (C-9), 35.7 (C-10),214.6 (C-11), 49.8 (C-12), 50.9 (C-13), 48.5 (C-14),46.7 (C-15), 71.9 (C-16), 59.4 (C-17), 20.3 (C-18),20.1 (C-19), 74.3 (C-20), 27.0 (C-21), 47.9 (C-22),123.0 (C-23), 143.0 (C-24), 69.6 (C-25), 30.6 (C-26),30.5 (C-27), 18.8 (C-28), 27.7 (C-29), 26.1 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，故鑒定化合物9為cucurbitacin V。

化合物10：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:639.472 5 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 0.70 (3H, s, H-18), 1.16 (3H, s, H-19), 0.85 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-21), 0.98 (3H, s, H-28), 1.10 (3H, s,H-29), 1.56 (3H, s, H-30), 3.63 (1H, s, H-3), 5.52 (1H,d,J= 6.0 Hz, H-6), 6.46 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-24),9.55 (2H, s, H-26), 1.79 (3H, s, H-27), 4.87 (1H, d,J=7.8 Hz, Glc-H-1')；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 22.6 (C-1), 28.4 (C-2), 87.6 (C-3), 42.4 (C-4), 141.6(C-5), 118.9 (C-6), 24.5 (C-7), 44.3 (C-8), 49.5 (C-9),36.3 (C-10), 214.0 (C-11), 49.1 (C-12), 49.3 (C-13),50.0 (C-14), 34.9 (C-15), 28.9 (C-16), 49.9 (C-17),17.3 (C-18), 20.7 (C-19), 36.4 (C-20), 18.7 (C-21),35.2 (C-22), 24.8 (C-23), 145.6 (C-24), 139.7 (C-25),195.5 (C-26), 9.6 (C-27), 18.6 (C-28), 28.7 (C-29),26.3 (C-30), 107.8 (C-1′), 76.0 (C-2′), 79.2 (C-3′),72.1 (C-4′), 78.7 (C-5′), 63.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[3]，故鑒定化合物10為hemslepenside A。

化合物11：白色無定型粉末，易溶于甲醇。525.325 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.26 (3H, s, H-18), 1.22 (3H, s, H-19), 1.42 (3H, s,H-21), 1.97 (3H, s, H-26), 1.36 (3H, s, H-28), 1.28(3H, s, H-29), 1.47 (3H, s, H-30), 4.10 (1H, m, H-2),3.40 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3), 5.71 (1H, d,J= 6.0 Hz,H-6), 5.14 (1H, m, H-16), 5.09 (1H, m, H-23), 6.68(1H, d,J= 6.0 Hz, H-24), 4.52 (1H, s, H-27a), 4.58(1H, s, H-27b)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ:35.2 (C-1), 71.3 (C-2), 81.7 (C-3), 43.2 (C-4), 142.8(C-5), 119.0 (C-6), 24.6 (C-7), 43.3 (C-8), 49.8 (C-9),34.6 (C-10), 213.4 (C-11), 49.2 (C-12), 49.0 (C-13),49.1 (C-14), 42.2 (C-15), 70.8 (C-16), 56.5 (C-17),20.4 (C-18), 21.2 (C-19), 72.7 (C-20), 30.5 (C-21),47.2 (C-22), 71.4 (C-23), 129.4 (C-24), 139.1 (C-25),21.4 (C-26), 61.3 (C-27), 22.3 (C-28), 22.7 (C-29),25.8 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[8]，故鑒定化合物11為jinfushanencin F。

化合物12：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:819.926 3 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.21 (3H, s, H-18), 1.23 (3H, s, H-19), 1.68 (3H, s,H-21), 1.89 (3H, s, H-27), 1.29 (3H, s, H-28), 1.31(3H, s, H-29), 1.52 (3H, s, H-30), 3.66 (1H, s, H-3),5.46 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6), 4.90 (2H, d,J= 7.8 Hz H-26), 5.48 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-24)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 22.3 (C-1), 28.6 (C-2), 87.2(C-3), 42.1 (C-4), 141.6 (C-5), 118.9 (C-6), 25.0(C-7), 43.8 (C-8), 49.0 (C-9), 36.1 (C-10), 214.2(C-11), 49.2 (C-12), 49.8 (C-13), 50.1 (C-14), 34.9(C-15), 22.4 (C-16), 51.1 (C-17), 19.1 (C-18), 20.4(C-19), 74.2 (C-20), 26.1 (C-21), 44.7 (C-22), 23.1(C-23), 130.3 (C-24), 132.3 (C-25), 75.2 (C-26), 14.2(C-27), 19.1 (C-28), 28.1 (C-29), 26.7 (C-30); 3-Glc:107.9 (C-1′), 75.9 (C-2′), 79.1 (C-3′), 72.1 (C-4′), 78.6(C-5′), 63.4 (C-6′); 26-Glc: 103.4 (C-1′′), 75.6 (C-2′′),79.1 (C-3′′), 72.1 (C-4′′), 78.2 (C-5′′), 63.2 (C-6′′)，以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，故鑒定化合物12為scandenoside R3。

化合物13：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:657.401 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.07 (3H, s, H-18), 1.26 (3H, s, H-19), 1.53 (3H, s,H-21), 1.85 (1H, s, H-26), 1.13 (3H, s, H-28), 1.34(3H, s, H-29), 1.46 (3H, s, H-30), 4.23 (2H, s, H-27),3.62 (1H, s, H-3) , 5.47 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6), 5.85(1H, t,J= 7.2 Hz, H-24)；13C-NMR (150 MHz,pyridine-d5)δ: 22.5 (C-1), 29.0 (C-2), 87.7 (C-3), 42.2(C-4), 141.7 (C-5), 118.9 (C-6), 24.6 (C-7), 42.5(C-8), 49.2 (C-9), 36.1 (C-10), 213.6 (C-11), 49.2(C-12), 49.3 (C-13), 50.0 (C-14), 34.6 (C-15), 22.5(C-16), 51.8 (C-17), 18.2 (C-18), 20.5 (C-19), 72.9(C-20), 26.3 (C-21), 45.3 (C-22), 23.6 (C-23), 128.1(C-24), 136.5 (C-25), 21.0 (C-26), 61.3 (C-27), 18.4(C-28), 28.6 (C-29), 26.3 (C-30), 3-Glc: 107.9 (C-1′),75.9 (C-2′), 79.2 (C-3′), 72.9 (C-4′), 78.7 (C-5′), 63.4(C-6′)，以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[10]，故鑒定化合物13為scandenoside R2。

化合物14：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:601.416 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.28 (3H, s, H-18), 1.52 (3H, s, H-19), 1.76 (3H, s,H-21), 1.50 (3H, s, H-26), 1.51 (3H, s, H-27), 1.48(3H, s, H-28), 1.34 (3H, s, H-29), 1.61 (3H, s, H-30),1.90 (3H, s, COCH3-25), 3.50 (1H, d,J= 9.0 Hz,H-3), 4.17 (1H, m, H-2), 4.51 (1H, s, H-7), 4.92 (1H,t,J= 7.2 Hz, H-16), 6.25 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 34.4 (C-1), 70.7(C-2), 81.0 (C-3), 42.8 (C-4), 145.0 (C-5), 122.2(C-6), 65.9 (C-7), 52.8 (C-8), 50.1 (C-9), 35.1 (C-10),213.3 (C-11), 49.2 (C-12), 47.7 (C-13), 50.1 (C-14),46.3 (C-15), 70.1 (C-16), 58.7 (C-17), 22.7 (C-18),21.8 (C-19), 79.9 (C-20), 25.1 (C-21), 214.9 (C-22),32.0 (C-23), 35.2 (C-24), 81.4 (C-25), 25.7 (C-26),25.8 (C-27), 19.3 (C-28), 20.1 (C-29), 25.3 (C-30)170.0 (-OOCCH3), 22.0 (-OOCCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[4]，故鑒定化合物14為巨花雪膽G。

化合物15：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:659.416 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz,pyridine-d5)δ: 0.85 (3H, s, H-18), 1.30 (3H, s, H-19),0.91 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-21), 0.87 (3H, s, H-28),1.15 (3H, s, H-29), 1.56 (3H, s, H-30), 4.72 (2H, d,J=7.8 Hz, H-26), 4.72 (2H, d,J= 7.8 Hz, H-27), 3.66(1H, s, H-3) , 4.19 (1H, m, H-11), 5.49 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6), 5.90 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-24)；13C-NMR(150 MHz, pyridine-d5)δ: 27.2 (C-1), 30.0 (C-2), 88.4(C-3), 42.8 (C-4), 144.7 (C-5), 118.9 (C-6), 25.0(C-7), 43.9 (C-8), 40.5 (C-9), 36.6 (C-10), 78.6(C-11), 41.5 (C-12), 47.8 (C-13), 50.2 (C-14), 34.9(C-15), 28.7 (C-16), 51.0 (C-17), 17.4 (C-18), 26.7(C-19), 37.3 (C-20), 19.7 (C-21), 37.4 (C-22), 25.0(C-23), 128.1 (C-24), 141.2 (C-25), 65.8 (C-26), 58.9(C-27), 19.1 (C-28), 28.1 (C-29), 26.8 (C-30), 107.9(C-1′), 75.9 (C-2′), 79.1 (C-3′), 72.2 (C-4′), 78.2(C-5′), 63.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[11]，故鑒定化合物15為Jinfushanoside A。

化合物16：白色無定形粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z: 541.500 0 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.20 (3H, s, H-18), 1.45 (3H, s,H-29), 1.23 (3H, s, H-28), 1.60 (3H, s H-26), 1.50(3H, s, H-27), 1.29 (3H, s, H-19), 1.43 (3H, s, H-30),1.47 (3H, s, H-21), 3.43 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3), 4.16(1H, m, H-2), 4.92 (1H, m, H-16), 5.72 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-6), 6.50 (1H, d,J= 15.6 Hz, H-23), 7.54 (1H, d,J= 15.6 Hz, H-24)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ: 34.8 (C-1), 71.4 (C-2), 81.9 (C-3), 43.2 (C-4), 142.9(C-5), 119.1 (C-6), 24.6 (C-7), 43.6 (C-8), 49.6 (C-9),35.1 (C-10), 213.7 (C-11), 49.2 (C-12), 49.2 (C-13),51.6 (C-14), 43.2 (C-15), 70.9 (C-16), 59.6 (C-17),20.8 (C-18), 21.0 (C-19), 79.7 (C-20), 26.0 (C-21),204.7 (C-22), 121.2 (C-23), 156.0 (C-24), 70.7 (C-25),30.4 (C-26), 30.2 (C-27), 19.5 (C-28), 22.9 (C-29),25.9 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物16為cucurbitacine F。

化合物17：白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z:583.416 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, pyridine-d5)δ: 1.17 (3H, s, H-18), 1.32 (3H, s, H-29), 1.24 (3H, s,H-28), 1.53 (3H, s H-26), 1.52 (3H, s, H-27), 1.20(3H, s, H-19), 1.49 (3H, s, H-30), 1.50 (3H, s, H-21),3.43 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3), 4.14 (1H, m, H-2), 5.85(1H, t,J= 7.8 Hz, H-16), 5.73 (1H, d,J= 5.4 Hz,H-6), 7.46 (1H, d,J= 15.0 Hz, H-23), 7.54 (1H, d,J=15.0 Hz, H-24)；13C-NMR (150 MHz, pyridine-d5)δ:35.1 (C-1), 71.4 (C-2), 81.8 (C-3), 44.0 (C-4), 142.9(C-5), 119.0 (C-6), 24.4 (C-7), 43.0 (C-8), 48.7 (C-9),34.7 (C-10), 213.0 (C-11), 49.1 (C-12), 49.4 (C-13),51.0 (C-14), 43.3 (C-15), 74.9 (C-16), 55.7 (C-17),20.8 (C-18), 20.6 (C-19), 79.3 (C-20), 25.0 (C-21),204.3 (C-22), 120.2 (C-23), 157.2 (C-24), 70.7 (C-25),30.3 (C-26), 30.3 (C-27), 23.0 (C-28), 26.0 (C-29),19.3 (C-30), 170.7 (-OOCCH3), 21.6 (-OOCCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物17為16-O-acetyl-cucurbitacin F。

4 抗腫瘤活性測定

將人宮頸癌HeLa細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，37 ℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 h。給藥組加入100 μL不同質量濃度的樣品，樣品終質量濃度分別為100.0、50.0、10.0、5.0、1.0、0.5、0.1 μg/mL，每個質量濃度平行3個復孔?？瞻讓φ战M給予含DMSO的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，多柔比星（IC50＝0.24 μmol/L）為陽性對照組。培養(yǎng)24 h后，每孔加入5 mg/mL的MTT溶液20 μL，4 h后終止培養(yǎng)。將孔內(nèi)培養(yǎng)液小心吸出，每孔加入150 μL DMSO，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。用酶標儀在570 nm處測定各孔吸光度（A）值。

實驗結果顯示，化合物1、5、10、14、16～17對HeLa細胞有良好的細胞毒活性，IC50分別為5.07、7.13、3.53、3.79、6.49、2.82 μmol/L（表2）。

表2 化合物1～17對HeLa細胞的抗腫瘤活性Table 2 Antitumor activity of compounds 1—17 on HeLa cell lines

5 構效關系分析

雪膽單體化合物抗HeLa細胞增殖試驗結果表明部分化合物具有抑制HeLa細胞增殖活性。通過對比試驗數(shù)據(jù)，化合物的抗腫瘤活性與結構存在一定的構效關系。

葫蘆烷三萜皂苷元的活性要強于單糖苷、雙糖苷[14]，如化合物1、14的IC50值小于化合物3、12等含糖單元化合物。當化合物C-16位與C-23位通過醚鍵成環(huán)時，細胞毒活性降低或消失。如化合物4、11，IC50值分別為22.5、55.4 μmol/L，化合物3、8的IC50值均大于100 μmol/L。當化合物C-11位取代基由羰基變?yōu)榱u基時，化合物的細胞毒活性降低或消失[15]，如化合物8、15的IC50值均大于100 μmol/L，化合物2、6的IC50值在20～100 μmol/L。當化合物C-2、C-3位有羥基時，細胞毒活性增強，如化合物6的活性強于15。當化合物C-26位存在醛基時，化合物的細胞毒性增強[16]，如化合物10的IC50值為3.53 μmol/L。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突