湯興芳

摘? 要：目的? 評(píng)估酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV抗體）灰區(qū)結(jié)果。方法? 選擇2017年1月～2020年1月期間于重慶市長(zhǎng)壽區(qū)中醫(yī)院采用ELISA檢測(cè)血清抗-HCV結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者所呈標(biāo)本為研究樣本，對(duì)處于灰區(qū)的樣本選用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA法）檢測(cè)，并進(jìn)行核酸檢測(cè)（NAT）確認(rèn)。統(tǒng)計(jì)分析ELISA檢測(cè)結(jié)果呈灰區(qū)患者的CMIA及NAT復(fù)檢陽(yáng)性率。結(jié)果? 抗-HCV單、雙試劑（即同種試劑雙孔復(fù)試）灰區(qū)的結(jié)果經(jīng)CMIA、NAT復(fù)檢后均能檢出陽(yáng)性結(jié)果，且抗-HCV單試劑灰區(qū)復(fù)檢結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本檢出率（即灰區(qū)樣本復(fù)檢結(jié)果呈陽(yáng)性的標(biāo)本例數(shù)/灰區(qū)樣本總例數(shù)）高于雙試劑灰區(qū)，NAT法陽(yáng)性檢出率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? ELISA法檢測(cè)抗-HCV有一定的局限性，對(duì)處于灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢，有利于提高檢出率，便于早期診斷和治療。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);丙型肝炎病毒抗體;灰區(qū)

中圖分類號(hào)：R511? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1009-8011（2021）-13-0182-02

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是臨床常用的丙型病毒性肝炎檢測(cè)方法，但有研究指出，ELISA過程中存在多種影響因素，會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，尤其是臨界值附近結(jié)果，有時(shí)甚至?xí)型粚?shí)驗(yàn)室不同批次結(jié)果或是不同實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果不一致的現(xiàn)象[1-2]。對(duì)于部分丙肝“窗口期”感染患者，采用ELISA法檢測(cè)血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）易出現(xiàn)漏檢、誤診等情況[3]。在這種情況下，使用ELISA獲取的結(jié)果存在明顯風(fēng)險(xiǎn)，有可能影響到疾病的診斷及治療方案的合理選擇，甚至延誤病情，造成不良后果。本次研究通過對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢，評(píng)估分析ELISA檢測(cè)血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV抗體）灰區(qū)結(jié)果。詳細(xì)報(bào)告如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取重慶市長(zhǎng)壽區(qū)中醫(yī)院2017年1月～2020年1月期間采用ELISA檢測(cè)血清抗-HCV抗體結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者標(biāo)本作為研究對(duì)象。其中男性67例，女性68例;年齡34～62歲，平均年齡（49.20±8.20）歲;病程3～11年，平均病程（6.79±2.40）年。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2? 納排標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料齊全;②無其他嚴(yán)重臟器功能損傷情況。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他肝臟病變疾患者;②對(duì)研究知情不同意;③依從性低。

1.3? 方法

儀器設(shè)備：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）（生產(chǎn)企業(yè)：日本希森美康）、丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：湖南圣湘生物科技有限公司）、丙型肝炎抗體室間質(zhì)評(píng)血清（生產(chǎn)企業(yè)：重慶臨檢中心）、CFX96熒光定量PCR儀（生產(chǎn)企業(yè)：伯樂公司）、HISCL-5000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（生產(chǎn)企業(yè)：日本希森美康）。

在準(zhǔn)備好儀器與試劑后，分別獲取患者的血清，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA法）檢測(cè)以及核酸檢測(cè)（NAT）。檢測(cè)過程嚴(yán)格遵循檢測(cè)試劑盒的說明書和臨床檢驗(yàn)操作SOP文件進(jìn)行相關(guān)操作。

1.4? 觀察指標(biāo)

ELISA檢測(cè)結(jié)果呈灰區(qū)患者的CMIA及NAT復(fù)檢陽(yáng)性率。結(jié)果判定：①抗-HCV ELISA法檢測(cè)：選擇初篩樣本0.8<血樣測(cè)定吸光度值/臨界值（S/CO）<1.0試驗(yàn)室檢查結(jié)果顯示為灰區(qū)。S/CO為0.7～3.0的樣本采用同種試劑雙孔復(fù)試，結(jié)果均為灰區(qū)的樣本需進(jìn)行復(fù)檢，與單孔檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較;②CMIA法檢查：S/CO<1.0者為陰性;S/CO>1.0者為陽(yáng)性。③HCV-RNA熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測(cè)：陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為>25 IU/mL[4]。復(fù)檢陽(yáng)性率=復(fù)檢陽(yáng)性標(biāo)本例數(shù)/灰區(qū)樣本例數(shù)×100%。

1.5? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用（x±s）表示，行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

CMIA復(fù)檢陽(yáng)性20例，抗-HCV單試劑灰區(qū)CMIA復(fù)檢陽(yáng)性率高于雙試劑灰區(qū)，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.484，P<0.05）。NAT復(fù)檢陽(yáng)性26例，抗-HCV單試劑灰區(qū)HCV-RNA檢測(cè)陽(yáng)性率高于雙試劑灰區(qū)，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.059，P<0.05）。與CMIA法復(fù)檢結(jié)果相比，NAT復(fù)檢陽(yáng)性檢出率更高，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.129，P<0.05）。見表1。

3? 討論

丙型病毒性肝炎因感染丙型肝炎病毒（HCV）導(dǎo)致，以慢性肝臟損害為主，屬于乙類傳染病。丙型病毒性肝炎主要傳播途徑是血液傳播，輸血或血液透析過程中血液制品的污染是醫(yī)院感染的主要原因。人群普遍易感，且被感染后產(chǎn)生的抗-HCV并非保護(hù)性抗體，痊愈后仍可再患。HCV是一種于1989年經(jīng)分子克隆技術(shù)發(fā)現(xiàn)的具有較強(qiáng)傳染性的病毒，主要通過性行為、血液、母嬰途徑傳播。所致的丙型肝炎呈全球性分布，目前，全球范圍內(nèi)有1.8億以上HCV攜帶者。該疾病進(jìn)展緩慢，對(duì)人體肝臟的破壞極為隱匿，很多丙肝病毒感染患者的肝功能檢查結(jié)果往往顯示正常，容易造成誤診與漏診，但是人體一旦感染丙肝病毒，容易轉(zhuǎn)化成慢性肝炎并發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌，不僅威脅患者的身體健康，還會(huì)威脅患者的生命安全。目前，體外免疫檢測(cè)技術(shù)很多，且隨著抗體制備和標(biāo)記技術(shù)的提升，靈敏度和特異性都有了很大的提高，但ELISA作為一種傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測(cè)技術(shù)，是我國(guó)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)感染性疾病抗體的常用方法，具有檢測(cè)快速便捷、成本較低、獲取結(jié)果速度快等優(yōu)點(diǎn)。目前，一些血站、急救中心對(duì)于血液制品的管理與樣本檢測(cè)多采用ELISA法。ELISA法檢測(cè)的基本原理為抗原、抗體的特異性反應(yīng)，該方法快速、敏感、簡(jiǎn)便、易標(biāo)準(zhǔn)化、便捷，具有靈敏度和特異性高的優(yōu)勢(shì)。應(yīng)用實(shí)踐中，一些實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用工作臨界值即設(shè)立“灰區(qū)”，將推薦的判定值下調(diào)，以達(dá)到防止弱陽(yáng)性標(biāo)本漏檢的目的[5]。

本次研究選取近三年來重慶市長(zhǎng)壽區(qū)中醫(yī)院經(jīng)ELISA檢測(cè)的血清抗-HCV抗體結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者血清標(biāo)本作為研究對(duì)象，并進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合HCV抗原復(fù)檢，并進(jìn)行核酸檢測(cè)（NAT）確認(rèn)，對(duì)檢測(cè)后的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，抗-HCV單、雙試劑灰區(qū)結(jié)果經(jīng)CMIA、NAT復(fù)檢后均能檢出陽(yáng)性結(jié)果，抗-HCV單試劑灰區(qū)復(fù)檢結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本檢出率（即灰區(qū)樣本復(fù)檢結(jié)果呈陽(yáng)性的標(biāo)本例數(shù)/灰區(qū)樣本總例數(shù)）高于雙試劑灰區(qū)，并且NAT陽(yáng)性檢出率更高 （P<0.05）?？梢哉J(rèn)為，ELISA法對(duì)抗-HCV檢測(cè)的結(jié)果存在一定范圍內(nèi)的偏差，需要方法上的改進(jìn)和更新。但有研究提示[6]，由于HCV-RNA在HCV感染的急性期、慢性轉(zhuǎn)換期或感染恢復(fù)期時(shí)難以被檢出，單純依靠NAT復(fù)檢ELISA抗-HCV灰區(qū)仍然存在出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)。筆者認(rèn)為，適當(dāng)調(diào)整灰區(qū)設(shè)置，或采用FQ-PCR擴(kuò)增、抗原檢測(cè)等方法能夠進(jìn)一步矯正試驗(yàn)結(jié)果。

綜上所述，采用ELISA法對(duì)抗-HCV進(jìn)行檢測(cè)有一定的局限性，對(duì)處于灰區(qū)的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢，能夠有效提高檢出率。一方面能夠針對(duì)丙肝患者給予相應(yīng)的早期診斷對(duì)于及時(shí)制定治療方案有積極意義，另一方面能夠減輕患者心理負(fù)擔(dān)，同時(shí)避免醫(yī)療糾紛的發(fā)生。

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