氣相色譜法測定復(fù)方豬油膏中異龍腦含量的效果分析

舒 娟，石玉梅，徐曉芳，袁景祥

（1. 銅仁市檢驗檢測院，貴州 銅仁 554300 ；2. 銅仁市袁家寺骨科醫(yī)院，貴州 銅仁 554300）

復(fù)方豬油膏是袁氏家族的祖?zhèn)髅胤?，屬于我國地道的民族民間藥物。2003 年袁氏家族創(chuàng)建了銅仁袁家寺骨科醫(yī)院，并在院內(nèi)新建了10 萬級層流凈化豬油膏制劑室。2014年2 月該院復(fù)方豬油膏的制作通過了省、市食品藥品監(jiān)督管理局的現(xiàn)場評審。復(fù)方豬油膏由冰片、自然銅、黃丹、麝香、龍骨、滑石粉、豬油七味中藥組成，可祛膿拔毒、生肌、鎮(zhèn)痛、促進(jìn)骨痂的生長和組織細(xì)胞的修復(fù)、縮短骨折愈合的時間。用此藥治療跌打損傷、瘀血腫痛、痛風(fēng)、關(guān)節(jié)腫痛、風(fēng)濕熱痹的療效顯著，且對急慢性骨髓炎（骨蝕）也有一定的療效[1-2]。此藥的原質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，不能有效地控制其質(zhì)量。為了加強(qiáng)對復(fù)方豬油膏進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)對此藥中藥物活性成分的含量進(jìn)行有效的測定[3-5]。本文主要是探討用氣相色譜（gas chromatography，GC）法測定復(fù)方豬油膏中異龍腦含量的效果。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

分析純?yōu)橐宜嵋阴ィㄓ商旖蚴懈挥罹?xì)化工有限公司提供）和水楊酸甲酯（由天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所提供），異龍腦（由111512-201904 中國食品藥品檢定研究院提供），16 個不同批次的復(fù)方豬油膏樣品（由銅仁袁家寺骨科醫(yī)院提供），復(fù)方豬油膏陰性對照品（由銅仁袁家寺骨科醫(yī)院提供）。

1.2 儀器

島津GC2014 氣相色譜儀，AOC20i 自動進(jìn)樣裝置，METTLER TOLEDO-XPE56 百萬分之一天平，METTLER TOLEDO-XPE105 十萬分之一天平，KQ-500E 超聲波清洗器。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密量取水楊酸甲酯5 mL，置于1000 mL 的量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取異龍腦對照品適量，加入內(nèi)標(biāo)溶液制成每l mL 含異龍腦1.26970 mg 的溶液（即對照品溶液）。吸取對照品溶液1 μL，注入氣相色譜儀內(nèi)，計算校正因子。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取復(fù)方豬油膏1 g，置于具塞錐形瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液10 mL，稱定重量。對溶液進(jìn)行5 min 的超聲處理，放冷后再稱定重量，并用內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量。將溶液搖勻后進(jìn)行濾過處理，取續(xù)濾液過0.45 μm 的濾膜，即制得供試品溶液。

2.1.4 陰性對照溶液的制備 將復(fù)方豬油膏處方中的冰片去除，余藥按復(fù)方豬油膏的制備工藝進(jìn)行制備，制成陰性對照品，按 2.1.3 項下的方法制備成陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱為以Rtx?-1701 為固定相的毛細(xì)管柱（柱長為30 m，內(nèi)徑為0.32 mm，膜厚度為0.25 μm），柱溫為120℃，進(jìn)樣口溫度為200℃，火焰離子檢測器（flame ionization detector，F(xiàn)ID）的溫度為200℃，進(jìn)樣方式為分流式進(jìn)樣，分流比為20:1。理論板數(shù)為水楊酸甲酯峰不低于2500。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取異龍腦對照品適量，加入內(nèi)標(biāo)溶液制成每l mL含異龍腦3.17425 mg 的溶液（即對照品溶液）。精密吸取對照品溶液0.8 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分別置于10 mL 的量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度。精密吸取各濃度對照品溶液1 μL，注入氣相色譜儀中進(jìn)行檢測（色譜條件如上），以峰面積A 對濃度（mg/mL）進(jìn)行線性回歸計算，得到線性回歸方程 y=719359x+267526，R2=0.999。這表明，異龍腦在0.25394 ～3.17425 mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液1 μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，計算得到相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.87%。這表明，該檢測方法的精密度良好。

2.5 樣品穩(wěn)定性試驗

取復(fù)方豬油膏樣品（批號20190803），按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液，分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 進(jìn)樣測定（色譜條件如上）異龍腦的峰面積并計算其平均含量。測定的結(jié)果顯示，異龍腦的RSD 為1.18%。這表明，供試品溶液在24 h 內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取復(fù)方豬油膏樣品（批號20190803），按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。將供試品溶液平均分成6 份，用GC 法并按照上述色譜條件對6 份供試品溶液進(jìn)行測定，分別記錄其峰面積并計算其平均含量。結(jié)果顯示，異龍腦的RSD 為1.36%。這表明，該檢測方法的重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗

采用加標(biāo)回收法，精密稱取6 份已知含量的復(fù)方豬油膏樣品（批號為20190803，異龍腦的含量為16.80 mg/g），置于10 mL 的容量瓶中，精密加入異龍腦對照品溶液（濃度為1.2697 mg/mL）4 mL。采用2.1.1 項下的方法制成內(nèi)標(biāo)溶液，將溶液稀釋至刻度。按2.1.3 項下的方法制成供試品溶液，并采用GC 法按上述色譜條件對內(nèi)標(biāo)溶液進(jìn)行測定。測定的結(jié)果顯示，異龍腦的平均回收率為94.43%，RSD 為0.70%（n=6）。詳見表1。這表明，該檢測方法具有良好的回收率。

表1 復(fù)方豬油膏加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.8 樣品測定

取16 批次復(fù)方豬油膏樣品，將其按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。采用GC 法按上述色譜條件對供試品溶液進(jìn)行測定，每批次樣品均測定3 次，16 批次樣品中異龍腦含量的測定結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方豬油膏樣品的測定結(jié)果

2.9 專屬性試驗

按2.1.4 項下的方法制備陰性對照溶液。分別吸取陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液各1 μL，采用GC法按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖見圖1。

圖1 陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖

3 討論

復(fù)方豬油膏屬于我國地道的民族民間藥物。在100 余年的使用過程中，復(fù)方豬油膏被證實具有續(xù)筋接骨、活血化瘀、祛腐生肌的功效，同時對水、火燙傷也有一定的治療作用。本文建立了復(fù)方豬油膏的質(zhì)量控制方法。復(fù)方豬油膏處方中的冰片（合成龍腦）為君藥，具有開竅醒神、清熱止痛之功效，其主要藥物活性成分為異龍腦[6-8]。GC法是一種以氣體為流動相的色譜分析方法，主要用于分離分析易揮發(fā)的物質(zhì)。本研究在采用GC 法測定復(fù)方豬油膏中異龍腦的含量時，在上述色譜條件下陰性樣品在異龍腦吸收峰位置無干擾峰，這說明采用GC 法測定復(fù)方豬油膏中異龍腦含量的重現(xiàn)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確度高。

綜上所述，用GC 法測定復(fù)方豬油膏中異龍腦的含量具有精密性、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好及加樣回收率高等優(yōu)點，可用于對復(fù)方豬油膏進(jìn)行質(zhì)量控制。