超高效液相色譜法檢測尿液中的安非他明和氯胺酮

摘要：隨著混合毒品使用的泛濫，近年來出現(xiàn)了多種毒品混合使用的現(xiàn)象，如“搖頭丸”和“K粉”，因此開發(fā)同時(shí)檢測多種毒品組分的分析方法對禁毒工作顯得尤為重要。本文使用超高效液相色譜建立了一種快速測定人體尿樣中安非他明和氯胺酮的檢測方法。該方法具有操作簡便、高效快速和靈敏度高的特點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于司法檢測實(shí)驗(yàn)室。

關(guān)鍵詞：安非他明 氯胺酮 超高效液相色譜 尿液

安非他明是一種常見的苯胺類中樞神經(jīng)興奮劑，主要作用于中樞神經(jīng)和交感神經(jīng)，屬于中樞神經(jīng)興奮類毒品【1】。由于其易于合成，見效快、藥力維持時(shí)間長，因此于20世紀(jì)90年代開始在全球范圍內(nèi)泛濫，非買合成、買賣安非他明已經(jīng)成為了日益嚴(yán)重的社會問題，聯(lián)合國禁毒署認(rèn)為其將有可能取代海洛因和鴉片成為21世紀(jì)全球?yàn)E用最為廣泛的毒品。根據(jù)衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局關(guān)于《苯丙胺類興奮劑濫用及相關(guān)障礙的診斷治療指導(dǎo)原則》安非他明在體內(nèi)代謝主要由肝臟完成，約70%經(jīng)肝臟代謝完成，其余30%隨尿液排出體外【2-5】。

氯胺酮，俗稱“K粉”，是一種常用的外科手術(shù)用注射麻醉藥，氯胺酮注射后會使人產(chǎn)生一種夢幻感并導(dǎo)致精神亢奮，所以也被濫用作為毒品。氯胺酮自20世紀(jì)90年代進(jìn)入中國以來，主要在酒吧、舞廳等娛樂場所被濫用。氯胺酮主要在肝臟內(nèi)完成生物代謝、生產(chǎn)去甲氯胺酮，再經(jīng)進(jìn)一步代謝用腎臟排出體外，有2.5%的氯胺酮以原型形式經(jīng)由尿液排出。2001年5月，國家食品藥品監(jiān)督管理局將氯胺酮列入二類精神藥品管理【2-5】。

隨著毒品的泛濫，多種毒品混合使用的現(xiàn)象愈發(fā)增多。近年來多次出現(xiàn)合并濫用毒品現(xiàn)象，因此開發(fā)同時(shí)檢測人體組織中的多種毒品含量的檢測技術(shù)對禁毒工作具有重要意義。尿液因其易于活動而成為經(jīng)常被檢測的對象，但尿液基質(zhì)存在成分復(fù)雜、干擾成分多，需經(jīng)過復(fù)雜前處理工作才能保證分析準(zhǔn)確度【6，7】。本文使用超高效液相色譜建立了一種快速測定人體尿樣中安非他明和氯胺酮的檢測方法。該方法具有操作簡便、高效快速和靈敏度高的特點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于司法檢測實(shí)驗(yàn)室。

1材料與方法

1.1 儀器、材料及試劑

液相色譜儀（島津LC-30A，包含CBM-20A系統(tǒng)控制器、LC-30AD高精度輸液泵、DGU-20A在線脫氣機(jī)、SIL-30AC自動進(jìn)樣器、CTO-30A柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器）;漩渦混合器（iKA，MS3 basic）;單通道移液器（Eppendorf，Reference 2）;三乙胺、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純購自上海安譜實(shí)驗(yàn)科學(xué)有限公司，乙腈購自Fisher Scientific，均為色譜純級，安非他明和氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品由遼寧省公安廳提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 液相色譜儀分析條件

色譜柱：Shim-packODSⅡ（3.0mmI.D.×100mm，2.2μm）

流動相A：20mM磷酸二氫鉀/10mM三乙胺水溶液（磷酸調(diào)節(jié)PH=3.0），流動相B：乙腈;流動相比例：A/B=90/10（v/v）;流速：0.9mL/min;洗脫方式：等度洗脫;柱溫：35℃;紫外檢測波長：290nm;進(jìn)樣量：10μL

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取不同量的安非他明和氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，使用超純水稀釋配制，配制濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0及10.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至棕色樣品瓶于-4℃儲備保存。

1.2.3尿液樣品制備

采集健康人體尿液樣本儲備于-18℃冷藏、解凍后過0.22μm微孔濾膜后，取濾液稀釋10倍后用于超高效液相色譜分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 校準(zhǔn)曲線及精密度

在0.2-10.0μg/mL濃度范圍內(nèi)，兩種目標(biāo)組分線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)R均在0.9999以上。

為考察儀器精密度，本研究分別對兩種目標(biāo)組分濃度為0.5、2.0、10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行6次重復(fù)性考察（結(jié)果以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD計(jì)）。結(jié)果表明：安非他明在三個(gè)濃度級別的保留時(shí)間RSD范圍為0.0346%-0.388%之間，峰面積RSD范圍為0.611%-2.56%之間;氯胺酮在三個(gè)濃度級別的保留時(shí)間RSD范圍為0.0355%-0.0829%之間，峰面積RSD范圍為0.378%-4.30%之間，匯總結(jié)果見表1及表2。

2.2 方法回收率及檢出限

選擇在健康人體尿液中添加低中高三種濃度的安非他明和氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品，采用前文所述前處理方法處理樣品，每一濃度平行處理3份，計(jì)算回收率和方法學(xué)精密度，回收率范圍為84.73%-106.40%，RSD范圍為1.31%-4.12%，結(jié)果滿足分析要求，結(jié)果見表3。

為考察儀器對兩種目標(biāo)組分的靈敏度，使用溶劑和空白尿樣基質(zhì)分別配制濃度為0.5μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)分析6針以計(jì)算儀器靈敏度并考察尿液基質(zhì)對儀器響應(yīng)值的影響，如表4所示，尿液基質(zhì)對儀器靈敏度影響較小，通過溶劑標(biāo)液和基質(zhì)標(biāo)液計(jì)算出的儀器檢出限、定量限相差不大。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本研究使用超高效液相色譜儀結(jié)合紫外檢測器，測定尿樣中安非他明和氯胺酮兩種常見毒品。該方法簡單快速，避免了復(fù)雜的前處理過程。利用超高效液相色譜儀實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)快速分析兩種目標(biāo)物，具有分析速度快、靈敏度高的特點(diǎn)，能夠用于涉嫌吸毒人員檢測和興奮劑快速篩查。

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作者簡介：夏久智（1985.07-），男，碩士，中級，盤錦市公安局刑事技術(shù)支隊(duì)。