2018—2020 年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對

尹燦友，李 麗，鄧 飛，邱明雙，邵 靚，周莉媛，陳 斌，裴超信，吉色曲伍，李英林

（1.西昌市農業(yè)農村局西鄉(xiāng)片區(qū)畜牧獸醫(yī)中心站，四川西昌 615000；2.四川省動物疫病預防控制中心，四川成都 610041；3.涼山州動物疫病預防控制中心，四川西昌 615000）

為加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設，提高全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力，四川省動物疫病預防控制中心按照農業(yè)農村部《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》[1]、《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作實施方案》[2]、《關于開展獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知》以及四川省農業(yè)農村廳《關于開展全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知要求》等文件有關要求，于2018—2020 年組織開展了全省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力比對工作。全省21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室按要求在規(guī)定時間內完成了盲樣領取、檢測、正式報告出具和結果上報等流程。比對結果既可客觀反映四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力及水平，也可反映出存在的問題。本文對2018—2020 年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結果進行了梳理分析，以期提高獸醫(yī)實驗室檢測能力，更好地發(fā)揮獸醫(yī)實驗室作用。

1 材料與方法

1.1 比對項目

四川省歷年比對項目為3 個，包括1～2 個病原學檢測項目和1～2 個血清學檢測項目。2018—2020 年涉及的比對項目包括：禽流感病毒核酸檢測（RT-PCR 方法）、口蹄疫病毒核酸檢測（RT-PCR/熒光RT-PCR 方法）、豬瘟病毒抗體檢測（ELISA方法）、禽流感病毒抗體檢測（HA/HI 方法）、非洲豬瘟病毒核酸檢測（熒光PCR 方法）以及O 型口蹄疫病毒抗體檢測（固相競爭ELISA 方法），共計6 個項目。

1.2 比對項目采用方法及標準

2018—2020 年四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室比對項目、采用方法和標準，詳情見表1。

表1 比對項目、方法及標準

1.3 比對樣品

2018 年每個比對項目設置5 份盲樣，2019—2020 年每個比對項目均設置6 份盲樣。樣品均由相應國家參考實驗室或試劑公司提供，經四川省動物疫病預防控制中心驗證、編號和封裝后，由參與比對的21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室派專人在指定時間統(tǒng)一領取，并要求在12 h 內送達參與比對的實驗室。

1.4 比對試劑

參與比對的21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室采用的試劑均來自同一廠家、同一批次，由四川省動物疫病預防控制中心統(tǒng)一采購、驗證并發(fā)放。比對試劑廠家及批號見表2。

表2 比對試劑名稱、廠家及批號

1.5 結果判定標準

比對項目結果的參考值及判定標準見表3。

表3 比對結果參考值、判定標準

2 比對結果

2018 年全省整體平均正確率為95.59%，其中禽流感病毒核酸檢測16 個市（州）結果完全正確，口蹄疫病毒核酸檢測19 個市（州）結果完全正確，豬瘟病毒抗體檢測21 個市（州）結果完全正確；2019 年全省整體平均正確率為97.09%，其中禽流感H9 亞型抗體檢測17 個市（州）結果完全正確，口蹄疫病毒核酸檢測21 個市（州）結果完全正確，豬瘟抗體檢測19 個市（州）結果完全正確；2020年全省整體平均正確率為97.88%，其中禽流感H5亞型抗體檢測17 個市（州）結果完全正確，非洲豬瘟病毒核酸檢測19 個市（州）結果完全正確，口蹄疫抗體檢測21 個市（州）結果完全正確。具體結果見表4。

表4 2018—2020 年全省各地市（州）級獸醫(yī)實驗室比對結果

3 分析與討論

3.1 就總體水平而言

2018—2020 年連續(xù)3 年的比對結果正確率都在95%以上，說明四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力處于較高水平，能滿足非洲豬瘟、禽流感等重大動物疫病檢測需要；就各年整體正確率來看，2019 年全省平均正確率（97.09%）較2018 年（95.59%）上升了1.50 個百分點，2020 年（97.88%）較2019 年上升了0.79 個百分點，正確率總體呈逐年上升趨勢。

3.2 就檢測方法而言

對于核酸檢測，在檢測禽流感和口蹄疫病毒核酸時，2019 年采用的熒光RT-PCR 正確率高于2018 年的普通RT-PCR，同時2020 年采用熒光PCR 開展非洲豬瘟病毒核酸檢測比對時正確率也高達98.41%，這與熒光RT-PCR/PCR 的特異性、靈敏度、自動化程度高于普通RT-PCR/PCR 有關。對于抗體檢測，ELISA 方法和HA-HI 試驗都是獸醫(yī)實驗室常見的血清學檢測方法，ELISA 因為采用商品化試劑盒且結果判定使用儀器讀數，而HA-HI試驗因紅細胞需自備且結果判定受人為主觀因素影響，因此ELISA 方法正確率略高于HA-HI 試驗。

4 存在問題

4.1 部分實驗室設備條件差

2018 年有2 個市（州）因獸醫(yī)實驗室條件限制而無法開展病原學檢測，另外有個別實驗室因凝膠成像系統(tǒng)故障無法顯示電泳結果。2019 年個別市（州）因實驗室設備配置太低無法開展多重熒光病原學檢測，也有實驗室因設備配套設施不完善而影響檢測結果。

4.2 部分實驗人員對某些檢測方法不熟悉，檢測能力有待提高

2020 年口蹄疫抗體檢測采用固相競爭ELISA方法。該方法是OIE 在國際貿易中口蹄疫血清學檢測指定方法之一，既可定性又可測定效價。檢測結果顯示：只有6 個實驗室能將陰陽性對照和被檢樣品的效價完全判定正確，而部分實驗室僅能正確判定陰陽性，但對說明書中效價判定方法理解不到位；另有個別實驗室只作了定性檢測，未按要求進行效價測定。2020 年雖然大部分市（州）非洲豬瘟病毒核酸檢測正確率能達到100%，但仍然有個別市（州）實驗室出現假陰性（漏檢）結果或/和Ct 值偏差較大的情況。

4.3 部分檢測結果報告不規(guī)范

四川省歷年比對均要求各市（州）實驗室不僅報送檢測結果，也要求提交檢測原始記錄及檢測報告。但從檢測報告和原始記錄上看，連續(xù)3 年均有部分實驗室存在記錄和報告不詳盡、不完整、不規(guī)范的問題。比如凝膠電泳圖清晰度差或未標注泳道，HA 試驗報告中數據填寫不規(guī)范，未填寫陰、陽性對照結果以及缺少ELISA 試驗的OD 值。

5 建議

5.1 加強獸醫(yī)實驗室建設，更新完善檢測設施設備

目前，各地高度重視獸醫(yī)實驗室建設工作，動物疫病防控工作正逐步構建以全面開展實驗室監(jiān)測預警和疫病凈化為重點的新防疫理念。四川省獸醫(yī)實驗室系統(tǒng)已初步建成了省、市、縣三級獸醫(yī)實驗室的分工格局，但個別市（州）獸醫(yī)主管部門在推進獸醫(yī)實驗室建設中重視程度不夠，進展緩慢。需進一步提高認識，不斷加強獸醫(yī)實驗室建設，加大支持力度和資金投入，更新完善檢測設施設備[3]。

5.2 加強實驗室技術人員培訓，提升檢測能力和水平

各市（州）實驗室應當不斷加強內部培訓和規(guī)范化建設，完善實驗室質量管理體系和生物安全管理體系，提升實驗室能力和管理水平。建議進一步穩(wěn)定和強化獸醫(yī)實驗室人員隊伍和能力建設[4]，加強與省級動物疫病預防控制中心和其他市（州）級單位之間的交流、培訓，穩(wěn)步推進實驗室管理體系更上新臺階。

5.3 繼續(xù)推進獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作，加強比對考核

全省獸醫(yī)實驗室考核是在農業(yè)農村部統(tǒng)一組織下的獸醫(yī)行業(yè)實驗室檢測能力認可工作[5]。同時，市（州）級實驗室檢測能力是全省動物疫病監(jiān)測工作的重要技術支撐。截至目前，四川省大部分市（州）級實驗室通過了全省獸醫(yī)實驗室考核，仍未通過實驗室考核的市（州）、縣（區(qū)）需抓緊進行實驗室條件建設，完善儀器設備和技術人員配置。比對項目涉及的疫?。ㄇ萘鞲?、口蹄疫、豬瘟、非洲豬瘟）均屬于一類動物疫病，因此圍繞這幾類動物疫病開展的實驗室比對工作緊緊抓住了當前重大動物疫病防控的重點。比對結果正確率未達到100%的地方需認真總結，及時查找和糾正問題，做到持續(xù)改進，不斷提升。建議繼續(xù)推進動物疫病防控系統(tǒng)獸醫(yī)實驗室考核工作，穩(wěn)步推進生物安全監(jiān)管，定期開展比對核查工作。