王敏，李明俊

（1.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000；2.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000）

1 我國(guó)部分地區(qū)豬弓形蟲(chóng)流行病學(xué)

從1977 年豬弓形蟲(chóng)病被報(bào)道至今，我國(guó)關(guān)于豬弓形蟲(chóng)病研究已經(jīng)過(guò)去40 多年。整理我國(guó)部分地區(qū)豬弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查資料，分析如下：①我國(guó)豬弓形蟲(chóng)感染情況較為普遍，全國(guó)豬弓形蟲(chóng)平均感染率為40%左右，大部分省份弓形蟲(chóng)感染率為20%～45%，弓形蟲(chóng)感染情況最嚴(yán)重的為重慶地區(qū)，為75.94%，感染率最低是西藏地區(qū)，為5.1%[1-7]；②在我國(guó)，豬弓形蟲(chóng)感染情況較為嚴(yán)重地區(qū)主要分布在沿海亞熱帶地區(qū)，而在相對(duì)寒冷且干燥的地區(qū)豬弓形蟲(chóng)感染率則低。如西藏地區(qū)藏豬弓形蟲(chóng)感染僅為5.1%；③豬弓形蟲(chóng)感染還與豬場(chǎng)的飼養(yǎng)方式和豬自身免疫情況有關(guān)，散戶豬場(chǎng)感染率高于規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)，經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)胎次數(shù)越多弓形蟲(chóng)感染率越高，并且可能多次反復(fù)感染弓形蟲(chóng)。

2 臨床癥狀

豬弓形蟲(chóng)急性感染主要表現(xiàn)為：稽留熱，體溫為40～42℃，精神沉郁甚至食欲廢絕，便秘與腹瀉交替出現(xiàn)，其耳后和腹下部出現(xiàn)血斑，并伴有腹股溝淋巴結(jié)腫大，持續(xù)時(shí)間大概7～10d。若感染豬能挺過(guò)這段時(shí)間，其食欲和體溫逐漸恢復(fù)正常，弓形蟲(chóng)在其肌肉、腦部等形成包囊，轉(zhuǎn)化為慢性感染，若機(jī)體免疫系統(tǒng)受損，則再次出現(xiàn)急性感染癥狀。一般免疫力正常的豬感染弓形蟲(chóng)無(wú)明顯癥狀，呈慢性感染，當(dāng)豬弓形蟲(chóng)感染呈急性癥狀時(shí)常引起死亡[8]。

3 豬弓形蟲(chóng)病臨床診斷技術(shù)

3.1 弓形蟲(chóng)病診斷技術(shù)概述

豬弓形蟲(chóng)感染診斷技術(shù)主要分為3 類(lèi)：①弓形蟲(chóng)病原檢測(cè)，如取檢測(cè)豬的血液、組織液進(jìn)行涂片，以是否觀察到弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體作為診斷依據(jù)，或者從疑似弓形蟲(chóng)感染的豬取淋巴結(jié)等組織進(jìn)行處理，然后感染小鼠，對(duì)感染小鼠進(jìn)行追蹤觀察，并取有明顯癥狀的腹水或腦組織進(jìn)行涂片，以是否觀察到弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體或腦包囊作為診斷依據(jù)；②弓形蟲(chóng)分子生物學(xué)診斷，主要以是否擴(kuò)增到弓形蟲(chóng)特異性片段為診斷依據(jù)。如傳統(tǒng)PCR 擴(kuò)增弓形蟲(chóng)529bp，巢式PCR 檢測(cè)弓形蟲(chóng)P30 基因，若兩者擴(kuò)增結(jié)果均為陽(yáng)性，則基本可判斷為該豬已感染弓形蟲(chóng)；③弓形蟲(chóng)免疫學(xué)診斷，主要以是否檢測(cè)到抗弓形蟲(chóng)抗體或抗原作為診斷依據(jù)，常用方法有IFA、IHA、MAT、ELISA 和GICA。

3.2 常用弓形蟲(chóng)感染診斷方法優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析

①弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體診斷，優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確；缺點(diǎn)：診斷時(shí)間長(zhǎng)、需要飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求；適用對(duì)象：實(shí)驗(yàn)室研究；②弓形蟲(chóng)分子生物學(xué)診斷，優(yōu)點(diǎn)：特異性高、靈敏度高、診斷方法種類(lèi)多樣；缺點(diǎn)：需要費(fèi)用高昂的儀器和標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境、對(duì)診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求；適用對(duì)象：一般用于實(shí)驗(yàn)室研究；③弓形蟲(chóng)免疫學(xué)診斷，優(yōu)點(diǎn)：可批量檢測(cè)、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員要求相對(duì)較低、操作相對(duì)簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)：特異性不及弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體診斷，靈敏度不及分子生物學(xué)診斷；適用對(duì)象：一般用于臨床診斷[9]。

3.3 臨床常用診斷方法概述

IHA，間接血凝試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：indirect hemagglutination test，1957 年Jacob 和Lunde 率先用于檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染，1994 年曾為國(guó)際認(rèn)定的弓形蟲(chóng)診斷方法兩種之一，其優(yōu)點(diǎn)：價(jià)格合理、特異性強(qiáng)且操作方便。實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)紅細(xì)胞吸附弓形蟲(chóng)特異性抗原，檢測(cè)血清中有抗弓形蟲(chóng)抗體，若紅細(xì)胞不穩(wěn)定，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，且重復(fù)性差，臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)敏感性不及ELISA[10]。

MAT，改良凝集試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：modified agglutination test，是其他國(guó)家用于豬弓形蟲(chóng)感染診斷使用較多的診斷方法[11]。與ELISA、IHA 和LAT 一并，四種方法檢測(cè)同樣豬血清，結(jié)果顯示MAT 的敏感性最高[12]。利用MAT 檢測(cè)仔豬弓形蟲(chóng)、蠕蟲(chóng)和病毒感染陽(yáng)性血清，結(jié)果顯示：無(wú)交叉感染，該方法的特異性較高[13]。但由于成本較高，最終沒(méi)有被廣泛推廣。

ELISA，間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名：enzyme-linked immunosorbent assay，1976 年Voller 首次用于弓形蟲(chóng)診斷，是我國(guó)近20 年豬弓形蟲(chóng)病診斷使用最多的診斷方法，檢測(cè)內(nèi)容為豬抗弓形蟲(chóng)IgG。優(yōu)點(diǎn)：診斷時(shí)間較短、特異性高、靈敏性高、重復(fù)性好、檢測(cè)內(nèi)容靈活、可批量檢測(cè)、操作可程序化，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化檢測(cè)，是理想的臨床檢測(cè)方法。

GICA，為膠體金免疫層析技術(shù)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：colloidal gold immunochromatography assay。報(bào)道顯示：已制備的以弓形蟲(chóng)分泌抗原為檢測(cè)對(duì)象的膠體金試紙條，敏感性高，與IHA 符合率為82.4%[14]。Huang 等用膠體金與重組融合蛋白吸附，制備金標(biāo)試紙條，用于檢測(cè)貓弓形蟲(chóng)抗體，結(jié)果顯示該實(shí)驗(yàn)的敏感性達(dá)100%，特異性達(dá)94.5%[15]。2010 年李聰穎制備的可用于山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)的試紙條，結(jié)果顯示：樣品檢測(cè)與ELISA 檢測(cè)結(jié)果符合率為85%[16]。膠體金免疫層析技術(shù)操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、檢測(cè)過(guò)程短，是臨床檢測(cè)中理想檢測(cè)方法。

4 弓形蟲(chóng)病診斷方法的發(fā)展現(xiàn)狀

4.1 弓形蟲(chóng)病診斷方法常用診斷抗原

臨床上弓形蟲(chóng)病診斷方法主要是以弓形蟲(chóng)全蟲(chóng)蛋白或弓形蟲(chóng)分泌蛋白為診斷抗原，檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)抗弓形蟲(chóng)抗體，或者制備弓形蟲(chóng)分泌抗原重組蛋白的抗體檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)的弓形蟲(chóng)抗原，目前文獻(xiàn)報(bào)道主要有基于弓形蟲(chóng)MIC3、SAG1、SAG2、SAG3、GRA6、GRA7、BAG1 等基因型檢測(cè)方法的研究，但普遍都存在特異性和敏感性不夠理想的問(wèn)題[17]。

4.2 目前弓形蟲(chóng)病診斷方法的不足與可能的改進(jìn)措施

以豬弓形蟲(chóng)病診斷試劑盒為例：①抗體檢測(cè)對(duì)象均為IgG 抗體，而IgG 抗體檢測(cè)臨床價(jià)值不突出，檢測(cè)豬抗IgM 抗體作為診斷依據(jù)效果更為理想。豬感染弓形蟲(chóng)，一般在7d 左右出現(xiàn)抗弓形蟲(chóng)IgM 抗體，并逐漸升高至頂峰，在2 個(gè)月左右消失，而抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體則在1 月后出現(xiàn)，一般可以維持1 年以上。一般可根據(jù)豬血清中是否含抗弓形蟲(chóng)IgM 抗體結(jié)果，判定該豬是否在近期感染弓形蟲(chóng)，而抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體存在時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體可作為弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查研究依據(jù)，但作為藥物防治的指導(dǎo)意義不大；②可嘗試豬弓形蟲(chóng)抗IgM 抗體和弓形蟲(chóng)抗原聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行判斷，IgM 是感染初期產(chǎn)生的抗體，一般可作為早期診斷依據(jù)，IgG 抗體產(chǎn)生時(shí)間晚于IgM 的主要抗體[18]，而弓形蟲(chóng)分泌抗原的出現(xiàn)則提示極有可能是急性感染，因此抗原與IgM 抗體檢測(cè)聯(lián)合使用具有較好的臨床診斷價(jià)值?！?/p>