基于SIRT1通路茶黃素對慢性間歇低氧幼鼠氣道損傷及重塑的作用機(jī)制研究*

張冰潔，鄧敏超，魏 農(nóng)，張曉楓

（江南大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 無錫 214100）

阻塞性睡眠呼吸暫停（obstructive sleep apnea，OSA）是一種以慢性間歇低氧為基本病理生理特征的肺部疾病，表現(xiàn)為睡眠中氣道反復(fù)塌陷（部分或全部），出現(xiàn)慢性間歇低氧與睡眠片段化。OSA往往與慢性氣道疾病并存，比如支氣管哮喘患者常合并OSA，但因哮喘癥狀掩蓋而影響OSA的診療，長期可加重哮喘病情，引起氣道損傷甚至重塑[1]。近些年發(fā)現(xiàn)提取自植物中的黃酮類化合物對OSA、哮喘等肺部疾病有明顯作用，其中紅茶中提取的茶黃素有良好的清除自由基、抗氧化、改善微循環(huán)等功效，同時(shí)對免疫調(diào)節(jié)、炎癥等亦有積極作用[2]。然而，茶黃素的藥理研究尚停留于實(shí)驗(yàn)階段，關(guān)于其用于哮喘、OSA等肺部疾病中的作用及其機(jī)制報(bào)道鮮見。故本實(shí)驗(yàn)?zāi)MOSA的病理生理基礎(chǔ)，建立慢性間歇低氧幼鼠模型，并用茶黃素干預(yù)，觀察茶黃素對慢性間歇低氧幼鼠氣道損傷與重塑的作用，探討可能的作用機(jī)制，旨在為臨床治療慢性間歇低氧誘發(fā)的肺部疾病提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38只3周齡SPF級健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量50～60 g，購自北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2019-0010。實(shí)驗(yàn)開展前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，單籠飼養(yǎng)，溫度（24±2）℃，濕度40%～60%，自然光照，自由攝食水。本實(shí)驗(yàn)中大鼠均為脫頸處死，實(shí)驗(yàn)操作符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則，經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 藥物與試劑 茶黃素（上海一基生物試劑有限公司，批號：20181225，純度＞99%）；沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator1，SIRT1）抑制劑Nicotinamide（北京百奧萊博科技有限公司，批號：20191109，純度＞99.5%，用時(shí)以生理鹽水溶解）；丙二醛（malondialdehyde，MDA）ELISA試劑盒（批號：20190516）、超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）ELISA試劑盒（批號：20190519）均購自南京森貝伽生物科技有限公司；血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）ELISA試劑盒（批號：20191022）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）ELISA試劑盒（批號：20190908）均購自武漢菲恩生物科技有限公司；金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibifor of metalloproteinase-1,TIMP-1）ELISA試劑盒（上海仁捷生物科技有限公司，批號：20190214）；兔抗小鼠腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK）一抗（批號：20191102）、磷酸化AMPK（p-AMPK）一抗（批號：2019000815）、SIRT1一抗、過氧化物酶增殖激活受體-γ共激活子-1α（peroxisome-proliferatoractivated receptor-γcoactivator-1α，PGC-1α）一抗（批號：20191214）、GAPDH一抗（批號：20190908）均購自上海聯(lián)邁生物工程股份有限公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（碧云天生物技術(shù)有限公司，批號：20191017）。

1.3 主要儀器CYE-Ⅱ型氧、二氧化碳?xì)怏w測定儀（上海嘉定學(xué)聯(lián)儀表廠）；間歇低氧艙、空氣模擬對照艙（自制，不銹鋼為主體，艙蓋中間為玻璃，氣體鋼瓶、流量計(jì)、減壓閥、控制程序、電磁閥、繼電器、顯示器等組成控制系統(tǒng)，間歇低氧艙大小為125 cm×48 cm×24 cm，側(cè)壁進(jìn)氣、排氣單向閥各4個(gè)，空氣模擬對照艙大小60 cm×48 cm×24 cm，側(cè)壁進(jìn)氣、排氣單向閥各2個(gè)，艙內(nèi)壓力保持常壓）；醫(yī)用壓縮氧氣（濃度＞99.5%）、壓縮高純度氮?dú)猓舛龋?9.9%）（溫州市醫(yī)用氧廠）；4V330V-10型電磁閥（寧波亞德客自動(dòng)化工業(yè)有限公司）；EXL-808型酶標(biāo)儀（美國BioTeK公司）。

1.4 造模與分組38只SD健康幼鼠留取8只作空氣對照組，其余建造慢性間歇低氧幼鼠模型[3]：將幼鼠置于間歇低氧艙內(nèi)，將99.9%高純度氮?dú)狻?9.5%醫(yī)用氧氣交替輸入艙內(nèi)，1次低氧-復(fù)氧循環(huán)為90 s，具體操作如下：通氮?dú)?0 s（壓力0.3 kPa），停30 s，通氧氣12 s（氧流量25 L/min），停18 s，停止通氣期間由測氧儀分別檢測間歇低氧艙中氧濃度最高值、最低值。低氧濃度保持在7.8%左右，復(fù)氧濃度保持在21.0%左右，CO2濃度＜0.01%，濕度（50±10）%。每天艙內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)間為7.5 h（08:50:00—16:20:00）。空氣對照組幼鼠置于空氣模擬對照艙內(nèi)，通壓縮空氣，由同一個(gè)單片機(jī)程控，條件同造模幼鼠。實(shí)驗(yàn)期間艙上蓋厚布模擬黑夜，創(chuàng)造艙內(nèi)黑夜條件，引導(dǎo)幼鼠進(jìn)入睡眠狀態(tài)。每天出艙后，置于日光燈下模擬白天，飲食、活動(dòng)不限。1次/d，連續(xù)低氧干預(yù)4周。30只造模幼鼠分為模型組、抑制劑組、茶黃素組，每組10只。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 茶黃素組幼鼠每天在進(jìn)入間歇低氧艙前0.5 h腹腔注射60 μg/mL茶黃素[4]，抑制劑組幼鼠腹腔注射茶黃素60 μg/mL后，再腹腔注射SIRT1抑制劑Nicotinamide 20 mg/kg[5]，均以生理鹽水溶解至0.2 mL，模型組與空氣對照組幼鼠腹腔注射等體積生理鹽水。1次/d，連續(xù)2周，觀察幼鼠一般狀況。

1.6 實(shí)驗(yàn)取材 干預(yù)4周后進(jìn)行1%戊巴比妥鈉麻醉，股動(dòng)脈取血，4℃3 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，取上清，分裝放置后凍存在-80℃冰箱，用于MMP-9、TIMP1、VEGF檢測；打開胸腔，暴露并游離肺組織，取右下肺葉組織，10%中性甲醛固定后進(jìn)行病理檢測；取右肺上葉組織液氮冷凍，用于ELISA與Western blotting檢測。用注射器灌洗左肺，勻速注入左肺4 mL的0.9%無菌氯化鈉溶液，反復(fù)回抽3次后，收集肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），1 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，取其沉淀待測細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 幼鼠BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù) 離心BALF后取沉淀細(xì)胞，以0.9%無菌氯化鈉溶液200 μL混勻，取20 μL細(xì)胞混懸液，以380 μL冰醋酸混勻，再次吸取20 μL混懸液，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中用高倍顯微鏡計(jì)數(shù)有核細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞。

1.7.2 ELISA法檢測幼鼠肺組織MDA含量與SOD活力 取部分離體右肺上葉組織，4℃生理鹽水漂洗，用濾紙吸干水分，稱取1 g濕重肺組織，以4℃生理鹽水4 mL混勻，用玻璃勻漿器制備成勻漿，每次10 s，間隙30 s，共3～5次，冰水中操作。3 500 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，取上清液，參考MDA、SOD ELISA試劑盒說明書，稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔并加樣，37℃溫育30 min，配液后洗滌，除空白孔外每孔加入酶標(biāo)試劑，溫育，洗滌，顯色，終止，在450 nm波長處測定各孔吸光度值（OD值），重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，取平均值。

1.7.3 HE染色觀察幼鼠肺組織病理 取10%中性甲醛固定的肺組織，脫水，透明，石蠟包埋，修剪蠟塊后連續(xù)切片，厚度約為4 μm。切片脫蠟復(fù)水后，蘇木精染色15 min，用自來水沖洗，提插數(shù)次，以75%鹽酸乙醇分化30 s，溫水（50℃左右）浸泡5 min，置入伊紅液2 min，常規(guī)脫水，透明，封片。圖像分析炎性指數(shù)，（×200）鏡下計(jì)數(shù)炎癥細(xì)胞，每張切片隨機(jī)抽取10個(gè)視野，取計(jì)數(shù)平均值。評定標(biāo)準(zhǔn)：無肺泡炎，計(jì)1分；輕度肺泡炎，肺泡隔增寬，病變范圍＜20%，計(jì)2分；中度肺泡炎，病變范圍占20%～50%，計(jì)3分；重度肺泡炎，病變范圍＞50%，彌漫性分布，計(jì)4分。

1.7.4 ELISA檢測血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量 取凍存的股動(dòng)脈血清，參考VEGF、MMP-9、TIMP-1 ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔與空白孔，每待測樣品孔中加入100 μL樣品，37℃溫箱中加入反應(yīng)板2 h，棄液，濾紙印干洗滌反應(yīng)板。每孔加入100 μL酶標(biāo)試劑，37℃溫箱置入反應(yīng)板1 h，洗板。每孔加入100 μL底物液，暗處反應(yīng)，每孔加入50 μL終止液終止，450 nm處測量各孔OD值，計(jì)算VEGF、MMP-9、TIMP-1含量。

1.7.5 Western blotting檢 測 幼 鼠 肺 組 織AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表達(dá) 取另一部分離體右肺上葉組織，用勻漿器研碎，加入RIPA裂解液，12 000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，取上清。BCA法提取總蛋白，蛋白、上樣緩沖液混勻，沸水浴變性10 min，冷卻后取50 μg蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉2 h。條帶浸入一抗（AMPK稀釋1∶500、p-AMPK稀釋1∶1 000、SIRT1稀釋1:500、PGC-1α稀釋1∶500、GAPDH稀釋1∶1 000）中，4℃孵育過夜，次日加HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗（稀釋1∶2 000），室溫孵育2 h，取出聚偏二氟乙烯膜，PBS清洗3次，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，Quatity One凝膠軟件分析系統(tǒng)分析蛋白條帶灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，細(xì)胞計(jì)數(shù)、MDA濃度、SOD濃度、炎癥評分等計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（s）表示，進(jìn)行Levene與方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，行單因素方差分析與LSD-t比較，不齊則進(jìn)行Welch檢驗(yàn)與Dunnett T3比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 幼鼠一般狀況8只空氣對照組幼鼠實(shí)驗(yàn)過程中精神良好，毛發(fā)有光澤，進(jìn)食、排便正常，體質(zhì)量正常增長，未聞及異常呼吸音；30只造模幼鼠出現(xiàn)口唇發(fā)紺、呼吸急促、站立不穩(wěn)等癥狀，表明造模成功。模型組幼鼠隨干預(yù)時(shí)間延長，上述表現(xiàn)日益明顯，且精神萎靡、毛色黃無光澤、進(jìn)食減少、體質(zhì)量增長緩慢，輕者氣喘，重者聞及喉間痰鳴音。茶黃素組、抑制劑組幼鼠精神、毛發(fā)、進(jìn)食與排便等情況有所改善。

2.2 各組幼鼠BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 與空氣對照組比較，模型組、抑制劑組、茶黃素組幼鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少（P＜0.05）；與抑制劑組比較，茶黃素組幼鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少（P＜0.05）。（見表1）

表1 各組幼鼠BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)比較s，×106/L）

表1 各組幼鼠BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)比較s，×106/L）

注：與空氣對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與抑制劑組比較，cP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 給藥劑量 細(xì)胞總數(shù) 嗜酸性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 中性粒細(xì)胞空氣對照組 8 - 9.64±1.28 0.55±0.07 1.23±0.04 0.25±0.04模型組 10 - 35.41±3.56a 3.52±0.11a 2.95±0.07a 0.99±0.08a抑制劑組 10 茶黃素60 μg/mL+Nicotinamide 20 mg/kg 22.16±2.89a b 2.44±0.13a b 2.22±0.05a b 0.74±0.09a b茶黃素組 10 60 μg/mL 14.66±1.77a b c 1.72±0.16a b c 1.78±0.06a b c 0.52±0.05a b c F 58.473 314.062 502.889 64.108 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 各組幼鼠肺組織MDA含量、SOD活力比較 與空氣對照組比較，模型組、抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織中MDA含量均明顯升高、SOD活力均明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織中MDA含量均明顯降低、SOD活力均明顯升高（P＜0.05）；與抑制劑組比較，茶黃素組幼鼠肺組織中MDA含量明顯降低、SOD活力明顯升高（P＜0.05）。（見表2）

表2 各組幼鼠肺組織MDA含量、SOD活力比較

表2 各組幼鼠肺組織MDA含量、SOD活力比較

注：與空氣對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與抑制劑組比較，cP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 給藥劑量 MDA（nmol/mg）SOD（U/mg）空氣對照組 8 - 5.77±0.45 139.94±2.98模型組 10 - 12.69±0.23a 96.42±3.67a抑制劑組 10茶黃素60 μg/mL+Nicotinamide 20 mg/kg 10.12±0.17a b 112.66±2.69a b茶黃素組 10 60 μg/mL 8.64±0.21a b c 125.39±4.74a b c F 305.248 79.053 P 0.000 0.000

2.4 各組幼鼠肺組織病理變化情況HE染色肺組織病理切片可見：空氣對照組幼鼠氣道黏膜正常，氣道壁未見增厚，無炎癥細(xì)胞浸潤，未見明顯上皮細(xì)胞脫落；模型組幼鼠氣管壁增厚，可見大量上皮細(xì)胞脫落，大量炎癥細(xì)胞浸潤。與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠氣管壁增厚、上皮細(xì)胞脫落、炎癥細(xì)胞浸潤程度等有所減輕。（見圖1）

圖1 各組幼鼠肺組織病理切片圖（HE染色，×400）

與空氣對照組比較，模型組、抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織炎癥評分均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織炎癥評分均明顯降低（P＜0.05）；與抑制劑組比較，茶黃素組幼鼠肺組織炎癥評分明顯降低（P＜0.05）。（見圖2）

圖2 各組幼鼠肺組織炎癥評分比較

2.5 各組幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量比較 與空氣對照組比較，模型組幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量均明顯降低（P＜0.05）；與抑制劑組比較，茶黃素組幼鼠幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量均明顯降低（P＜0.05）。（見圖3）

圖3 各組幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量比較

2.6 各組幼鼠肺組織AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表達(dá)比較 與空氣對照組比較，模型組幼鼠肺組織p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白相對表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白相對表達(dá)量明顯升高（P＜0.05）；與抑制劑組比較，茶黃素組幼鼠肺組織p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白相對表達(dá)量明顯升高（P＜0.05）。4組幼鼠肺組織AMPK蛋白相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見圖4～5）

圖4 各組幼鼠肺組織AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表達(dá)Western blotting圖

圖5 各組幼鼠肺組織AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白相對表達(dá)量比較（x±s）

3 討 論

慢性間歇低氧指的是反復(fù)低氧、復(fù)氧交替過程，可激發(fā)呼吸、內(nèi)分泌、神經(jīng)等一系列病理生理改變，其所致肺損傷是哮喘、OSA等疾病發(fā)作的基本始動(dòng)環(huán)節(jié)。有研究[6]認(rèn)為，慢性間歇低氧可能通過系統(tǒng)性炎癥、氧化應(yīng)激等途徑致病。中醫(yī)對慢性間歇低氧的研究尚處于起步階段，關(guān)于其誘發(fā)的氣道損傷與重塑可歸為“肺脹”范疇，主要從虛、瘀等方面進(jìn)行辨證論治，但對慢性間歇低氧的基礎(chǔ)研究較少。然而，因慢性間歇低氧屬于特殊類型缺氧，而有抗缺氧效果的中藥較多，故可借其抗缺氧效應(yīng)用于研究。近年來，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，茶黃素生物學(xué)作用廣泛，不僅有抗病毒、抑菌、抗癌、抗炎、抗黏液高分泌、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，還是一種極為有效的抗氧化劑、自由基清除劑，在食品與醫(yī)藥保健等領(lǐng)域上的地位日漸突出[7]。茶黃素用于慢性間歇低氧致氣道損傷與重塑治療，取得了一定成效。

慢性間歇低氧可誘發(fā)慢性炎癥長期刺激，損傷氣道壁，出現(xiàn)氣道高反應(yīng)性與氣流阻塞等情況，從而導(dǎo)致氣道重塑，主要表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤、氣道平滑肌增厚等[8]。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，茶黃素組幼鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)減少，提示茶黃素可減輕幼鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤。氣道重塑與炎癥細(xì)胞、炎癥因子長期存在所致氣道炎癥及慢性炎癥引起的氧化應(yīng)激存在密切關(guān)系[9]。SOD是肺部內(nèi)源性抗氧自由基損傷系統(tǒng)的重要物質(zhì)，對機(jī)體氧化、抗氧化平衡有重要作用，測量肺部SOD濃度可間接反映氧自由基對肺組織細(xì)胞的損傷程度[10]；MDA是氧自由基代謝產(chǎn)物，能反映肺組織膜完整性受破壞程度[11]。本研究中，與模型組比較，茶黃素組幼鼠MDA含量降低、SOD活力升高，提示茶黃素可增強(qiáng)SOD活力，發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。氣道重塑由多種細(xì)胞因子參與，如MMP-9、VEGF、TIMP-1等。MMP-9是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝的主要限速酶，在正常肺組織內(nèi)幾乎不表達(dá)，可通過降解生長因子前體，激活生長因子，致氣道平滑肌增殖、肥厚，重塑氣道[12]。TIMP-1是MMP-9的主要抑制劑，可通過特異性抑制MMP-9生物學(xué)活性，增加細(xì)胞外基質(zhì)沉積同時(shí)減少其降解，造成氣道重塑[13]。氣道炎癥及氣道重塑等均與VEGF相關(guān)，VEGF在OSA、哮喘等患者中表達(dá)明顯升高。藥物處理降低VEGF表達(dá)，可減輕機(jī)體肺部病理改變，提示氣道炎癥性損傷及重塑與VEGF有關(guān)[14]。本研究通過觀察幼鼠肺組織病理切片發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，茶黃素組幼鼠氣管壁增厚、上皮細(xì)胞脫落、炎癥細(xì)胞浸潤等病理反應(yīng)減輕，且肺組織炎癥評分降低，提示茶黃素可減輕氣道炎癥，保護(hù)氣管結(jié)構(gòu)完整，改善氣道重塑。

SIRT1是目前研究最深入的Sirtuin蛋白，可與多種重要轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄共調(diào)控因子互相作用，經(jīng)乙?；饔谜{(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、靶蛋白活性，從而參與衰老、代謝等發(fā)生發(fā)展，而這些過程多與缺氧有關(guān)。XUR Y等[15]發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可通過上調(diào)SIRT1表達(dá)減輕心肌缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，推測SIRT1表達(dá)上調(diào)可能抑制細(xì)胞凋亡。PGC-1α在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，與氧化應(yīng)激關(guān)系最密切。HUANG J等[16]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)上調(diào)PGC-1α與SIRT1表達(dá)可減輕氧化應(yīng)激損傷，提示PGC-1α與SIRT1表達(dá)上調(diào)可能減輕氧化應(yīng)激損傷，并抑制氧化應(yīng)激損傷所致炎癥與細(xì)胞凋亡。AMPK被認(rèn)為是應(yīng)激反應(yīng)酶，在能量缺乏情況下（如缺氧/復(fù)氧）被激活，可產(chǎn)生急性效應(yīng)，輔助完成抗應(yīng)激反應(yīng)、維持生存的細(xì)胞行為[17]。AMPK在應(yīng)激狀態(tài)下被激活，對細(xì)胞有保護(hù)作用，HUANGX T等[18]研究表明Galectin-1可通過AMPK-Nrf2途徑抑制肺部炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激，說明AMPK參與了肺部炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激過程。本研究結(jié)果顯示，與空氣對照組比較，模型組幼鼠肺組織中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表達(dá)下調(diào)，提示慢性間歇低氧可能通過抑制AMPK/SIRT1/PGC-1α通路造成氣道損傷與重塑；與模型組比較，抑制劑組、茶黃素組幼鼠肺組織中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表達(dá)上調(diào)，且茶黃素組高于抑制劑組，提示茶黃素可能通過激活A(yù)MPK/SIRT1/PGC-1α通路減輕慢性間歇低氧導(dǎo)致的氣道損傷，抑制氣道重塑。

綜上所述，茶黃素可能是通過上調(diào)AMPK/SIRT1/PGC-1α通路減輕慢性間歇低氧幼鼠氣道損傷、抑制氣道重塑，為臨床研發(fā)、應(yīng)用茶黃素提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對開辟慢性間歇低氧所致氣道損傷與重塑的治療提供了新方法。