孟欣，李娜，王苗苗，張寧（西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，.檢驗(yàn)科，.婦產(chǎn)科，西安710061）

網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，Ret）是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，隨著Ret中RNA逐漸降解，發(fā)育為成熟紅細(xì)胞［1-2］。Ret是評(píng)價(jià)骨髓造血功能和紅細(xì)胞生成活力的重要指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于貧血的診斷、鑒別診斷和療效觀察以及骨髓移植或化療后造血功能恢復(fù)情況的監(jiān)測(cè)［3-5］。隨著全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的使用，Ret的檢測(cè)由傳統(tǒng)的新亞甲藍(lán)活體染色顯微鏡計(jì)數(shù)法逐步發(fā)展成熒光染色計(jì)數(shù)法［6-7］。2011年頒布實(shí)施的《網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考方法》、為Ret計(jì)數(shù)校準(zhǔn)提供了依據(jù)。但是該方法仍然為手工計(jì)數(shù)，不能滿足Ret計(jì)數(shù)自動(dòng)化檢測(cè)校準(zhǔn)的需求。國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)等國(guó)際性標(biāo)準(zhǔn)化組織正在研究新的Ret計(jì)數(shù)參考方法、標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

依據(jù)CNAS-CL02-A001：2018技術(shù)要求5.6.4，實(shí)驗(yàn)室用兩套及以上檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)有比對(duì)數(shù)據(jù)表明其檢測(cè)結(jié)果的一致性，實(shí)驗(yàn)方案可參考WS／T 407—2012《醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)定量檢驗(yàn)結(jié)果的可比性驗(yàn)證指南》以及WS／T 406—2012《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》［8］。因此，本研究對(duì)我院兩種血細(xì)胞分析系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)進(jìn)行比對(duì)評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診、住院患者EDTA-K2抗凝全血標(biāo)本共計(jì)154例，其中男性85例，女性69例，年齡（45.1±18.2）歲。所有樣本采集后4 h內(nèi)完成Ret檢測(cè)。

1.2 主要儀器與試劑 Mindray BC-6800 Plus全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和試劑（深圳邁瑞公司，以下簡(jiǎn)稱(chēng)“Mindray BC-6800 Plus”），Sysmex XN-9000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和試劑（日本希森美康公司，以下簡(jiǎn)稱(chēng)“Sysmex XN-9000”）。嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室SOP文件質(zhì)量要求進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。Sysmex XN-9000和Mindray BC-6800 Plus均按SOP文件嚴(yán)格執(zhí)行每日室內(nèi)質(zhì)控并確保結(jié)果在控。Sysmex XN-9000選用CBC＋RET模式，Mindray BC-6800 Plus選用RET模式，進(jìn)行Ret自動(dòng)計(jì)數(shù)。

1.3 評(píng)價(jià)方法 為保證實(shí)驗(yàn)室Ret計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，在儀器狀態(tài)良好的情況下，按照WS／T 406—2012，分別進(jìn)行精密度、線性、準(zhǔn)確度等性能驗(yàn)證，同時(shí)進(jìn)行兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)間可比性評(píng)價(jià)。

1.3.1 精密度評(píng)價(jià) 取高、中、低3濃度臨床樣本連續(xù)測(cè)定11次，棄去第一次結(jié)果，計(jì)算批內(nèi)變異系數(shù)（CV批內(nèi)）。使用高、中、低3濃度水平質(zhì)控品，每日進(jìn)行2次室內(nèi)質(zhì)控，連續(xù)檢測(cè)20 d，剔除失控?cái)?shù)據(jù)后計(jì)算在控?cái)?shù)據(jù)，即為日間變異系數(shù)（CV日間）。

1.3.2 線性評(píng)價(jià) 取1份接近預(yù)期上限的高值全血標(biāo)本，分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%、0的比例稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定2次，取均值作為實(shí)測(cè)值。

1.3.3 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)物統(tǒng)計(jì)結(jié)果，計(jì)算每份質(zhì)評(píng)物單次檢測(cè)結(jié)果與室間質(zhì)評(píng)參考值的相對(duì)偏差，評(píng)估其準(zhǔn)確度。

1.3.4 兩個(gè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)可比性評(píng)價(jià) 依據(jù)WS／T 407—2012中可比性驗(yàn)證方法，驗(yàn)證Sysmex XN-9000和Mindray BC-6800 Plus兩個(gè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)偏差是否符合要求。

1.3.5 Ret計(jì)數(shù)比對(duì)符合率評(píng)價(jià) 依據(jù)WS／T 406—2012中5.8實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的結(jié)果可比性驗(yàn)證方法，對(duì)收集的臨床樣本分別用Sysmex XN-9000和Mindray BC-6800 Plus各檢測(cè)Ret計(jì)數(shù)2次，計(jì)算每個(gè)系統(tǒng)均值，比較Ret計(jì)數(shù)不同濃度范圍符合率。

1.3.6 Ret多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)相互比較 依據(jù)CNASCL02-A001：2018中5.6.4檢驗(yàn)結(jié)果可比性方案，挑選高、中、低值樣本23例，計(jì)算希森美康與邁瑞、希森美康不同型號(hào)、邁瑞不同型號(hào)之間Ret計(jì)數(shù)回歸方程、相關(guān)系數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。計(jì)量資料用ˉx±s表示；變量間相關(guān)性用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)；不同方法學(xué)結(jié)果一致性采用Bland-Altman偏移散點(diǎn)圖評(píng)價(jià)，不同方法相關(guān)性采用Passing-Bablok回歸分析。采用雙側(cè)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)推斷，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度評(píng)價(jià) 根據(jù)WS／T 406—2012，Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus檢測(cè)低、中、高水平Ret計(jì)數(shù)的批內(nèi)和日間精密度見(jiàn)表1。

表1 Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus檢測(cè)Ret計(jì)數(shù)的精密度結(jié)果

2.2 線性評(píng)價(jià) 將實(shí)測(cè)值與理論值作相關(guān)性回歸分析，計(jì)算Y＝a X＋b（a為線性斜率）及相關(guān)系數(shù)r2，見(jiàn)表2。a在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，線性符合質(zhì)量要求。

2.3 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 單次檢測(cè)2份國(guó)家衛(wèi)健委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)物Ret計(jì)數(shù)，計(jì)算質(zhì)評(píng)物Ret計(jì)數(shù)與參考靶值相對(duì)偏差，見(jiàn)表3，偏倚＝（檢測(cè)值－靶值）／靶值×100%，準(zhǔn)確度符合質(zhì)量要求。

表3 Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus檢測(cè)Ret計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度

2.4 兩個(gè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)相關(guān)性和一致性評(píng)價(jià) 兩套檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)分析154例標(biāo)本Ret計(jì)數(shù)結(jié)果呈正相關(guān)，直線回歸方程Y＝1.123 4X－5.865 4，r＝0.970，P＜0.01。

Bland-Altman偏移散點(diǎn)圖分析顯示，Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus檢測(cè)Ret計(jì)數(shù)結(jié)果差值95%CI為（－46.64×109／L，36.34×109／L），差值均值為－5.149×109／L，差值均值的標(biāo)準(zhǔn)差為21.17×109／L。隨著Ret計(jì)數(shù)的增加，散點(diǎn)的分布呈現(xiàn)分散狀態(tài)，見(jiàn)圖1。

圖1 Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus Ret計(jì)數(shù)Bland-Altman偏移散點(diǎn)圖

2.5 2個(gè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)可比性 按照Sysmex XN-9000和Mindray BC-6800 Plus Ret計(jì)數(shù)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，估計(jì)比對(duì)用標(biāo)本濃度范圍，確定3個(gè)比對(duì)標(biāo)本，水平1（30.66～45.996）×109／L，水平2（65.08～97.614）×109／L，水平3（93.72～140.58）×109／L，水平1重復(fù)檢測(cè)4次，水平2重復(fù)檢測(cè)2次，水平3重復(fù)檢測(cè)2次。

Ret缺少基于臨床研究或?qū)＜夜沧R(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，參照室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)允許總誤差（TEa）30%的標(biāo)準(zhǔn)，將15.0%（即1／2TEa）作為3個(gè)濃度水平樣本檢測(cè)的分析質(zhì)量要求，每個(gè)樣本比對(duì)偏差小于上述標(biāo)準(zhǔn)，即為比對(duì)通過(guò)。3個(gè)不同濃度樣本比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表4。

表4 Sysmex XN-9000與Mindray BC-6800 Plus Ret計(jì)數(shù)比對(duì)結(jié)果

2.6 154例不同濃度樣本Ret符合率 以Sysmex XN-9000為基準(zhǔn)儀器，Mindray BC-6800 Plus為比對(duì)儀器，每個(gè)樣本的相對(duì)偏差符合判定標(biāo)準(zhǔn)15.0%的要求，且符合率≥80%比對(duì)通過(guò)。分別計(jì)數(shù)154例樣本Ret，總體符合率為64.94%，各濃度范圍符合率見(jiàn)表5。

表5 Ret不同濃度范圍比對(duì)符合率

2.7 多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)回歸分析 不同檢測(cè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)回歸方程、相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表6。Sysmex XN-9000與Sysmex XN-3000，Mindray BC-6800 Plus-1與Mindray BC-6800 Plus-2回歸方程斜率符合1±0.05要求，r＞0.97，其余系統(tǒng)均不符合比對(duì)要求。

表6 不同檢測(cè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)回歸分析結(jié)果

3 討論

很多實(shí)驗(yàn)室擁有多種品牌或者同一品牌的多種型號(hào)設(shè)備，同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同系統(tǒng)間結(jié)果的可比性是質(zhì)量管理的重要目標(biāo)，是實(shí)現(xiàn)患者結(jié)果可比性的重要保障［9］。臨床檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Ret計(jì)數(shù)在不同檢測(cè)系統(tǒng)中結(jié)果差異巨大［10］，為評(píng)估Ret計(jì)數(shù)的性能，確保計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，本研究根據(jù)CNAS-CL02-A001：2018技術(shù)要求，制訂性能評(píng)價(jià)及比對(duì)方案。

本研究2種系統(tǒng)采用不同的Ret校準(zhǔn)方式，Sysmex XN-9000 Ret通道采用經(jīng)參考方法賦值Ret計(jì)數(shù)的校準(zhǔn)品進(jìn)行。Mindray BC-6800 Plus根據(jù)常規(guī)校準(zhǔn)品RBC增益校準(zhǔn)，調(diào)整Ret通道中紅細(xì)胞粒子在散點(diǎn)圖中上下左右的空間位置。Sysmex校準(zhǔn)物將參考方法賦值直接傳遞到儀器，確保儀器和參考方法結(jié)果一致。但Ret具有在高熒光、中熒光和低熒光強(qiáng)度區(qū)連續(xù)分布的特征，校準(zhǔn)物無(wú)法反映不同熒光強(qiáng)度區(qū)域連續(xù)分布的特征，也無(wú)法保證準(zhǔn)確測(cè)量LFR和IRF等相關(guān)參數(shù)［11-12］。Mindray校準(zhǔn)方式則可以彌補(bǔ)以上方法的缺陷，但又無(wú)法保證其與參考方法檢測(cè)結(jié)果的一致。

精密度是檢測(cè)結(jié)果可靠性的前提，是檢測(cè)系統(tǒng)可比性的根基。本研究2種系統(tǒng)Ret批內(nèi)、日間不精密度均小于10%，顯示2種系統(tǒng)重復(fù)性良好，線性符合評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)要求，準(zhǔn)確度良好。154例標(biāo)本結(jié)果呈現(xiàn)正相關(guān)（r＝0.970，P＜0.01）。Bland-Altman偏移散點(diǎn)圖分析顯示，隨著Ret的增加，散點(diǎn)的分布呈現(xiàn)分散狀態(tài)。

本研究參照WS／T 407—2012制定驗(yàn)證方案，根據(jù)室內(nèi)質(zhì)控總均值估計(jì)需要比對(duì)的樣本濃度范圍，分別為（30.66～45.996）×109／L、（65.08～97.614）×109／L、（93.72～140.58）×109／L，覆蓋參考區(qū)間及常見(jiàn)濃度范圍，留取比對(duì)樣本［13］。根據(jù)每份樣本重復(fù)檢測(cè)次數(shù)的估算方法確定樣本檢測(cè)次數(shù)。Ret計(jì)數(shù)缺乏明確的質(zhì)量分析要求，參照室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)允許總誤差將15.0%（即1／2TEa）作為3個(gè)濃度水平樣本檢測(cè)的分析質(zhì)量要求。研究結(jié)果顯示樣本1比對(duì)偏差13.14%，樣本2比對(duì)偏差11.87%，符合質(zhì)量要求。樣本3比對(duì)偏差53.93%，大于分析質(zhì)量要求，比對(duì)不通過(guò)。

本研究以Sysmex XN-9000為基準(zhǔn)儀器，Mindray BC-6800 Plus為比對(duì)儀器，154例樣本Ret總體符合率64.94%。當(dāng)Ret濃度（80～120）×109／L時(shí)，符合率最高，濃度大于200×109／L時(shí)，符合率僅為10%。兩種比對(duì)方案均顯示，不同系統(tǒng)Ret不具有可比性，不建議使用回歸方程調(diào)節(jié)系數(shù)達(dá)到結(jié)果一致。分析原因可能有，不同血細(xì)胞分析儀Ret熒光染料差異，對(duì)細(xì)胞識(shí)別能力不同。李杰等［14］研究顯示，高白細(xì)胞樣本會(huì)干擾Ret計(jì)數(shù)。蔣浩琴等［8］提示紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、有核紅細(xì)胞、血小板增多等均能導(dǎo)致Ret假性增高，熒光類(lèi)藥物和瘧原蟲(chóng)等影響因素對(duì)Ret結(jié)果會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。因此，選擇比對(duì)樣本時(shí)要注意納入標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，Ret的校準(zhǔn)方式不同，Sysmex XN-9000采用經(jīng)參考方法賦值Ret計(jì)數(shù)的校準(zhǔn)品進(jìn)行，Mindray BC-6800 Plus根據(jù)常規(guī)校準(zhǔn)品RBC增益校準(zhǔn)，由此可能造成儀器Ret計(jì)數(shù)的差異。因此，需要研究制定血細(xì)胞分析儀Ret計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)方法，以滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求［15］。

多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)Ret計(jì)數(shù)回歸分析結(jié)果顯示，僅僅只有Sysmex XN-9000與Sysmex XN-3000之間，Mindray BC-6800 Plus相同系列儀器之間符合相關(guān)性要求，提示不同系統(tǒng)之間Ret不具有可比性。