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      三疣梭子蟹“乳化病”病理學(xué)研究

      2021-11-27 22:18宮春光劉曉麗田洋王鳳敏李春嶺殷蕊孫桂清
      河北漁業(yè) 2021年11期
      關(guān)鍵詞:梭子蟹性腺乳化

      宮春光 劉曉麗 田洋 王鳳敏 李春嶺 殷蕊 孫桂清

      摘 要:為從病理學(xué)角度闡明三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)“乳化病”的致病機(jī)理,選取中度和重度感染“乳化病”的三疣梭子蟹進(jìn)行了病理研究。結(jié)果顯示:河北省黃驊地區(qū)池塘養(yǎng)殖三疣梭子蟹“乳化病”的致病病原為血卵渦鞭蟲(Hematodinium sp.);患病三疣梭子蟹的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均會(huì)受到不同程度的破壞。中等程度感染的病蟹多數(shù)組織器官尚存比較完整的組織結(jié)構(gòu);而重度感染的病蟹組織器官被嚴(yán)重破壞,其中肝胰腺和螯足肌肉已經(jīng)失去原有組織結(jié)構(gòu),性腺也幾乎完全消失。

      關(guān)鍵詞:三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus);“乳化病”;病理;血卵渦鞭蟲(Hematodinium sp.)

      三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是河北省的傳統(tǒng)養(yǎng)殖品種,具有較高的知名度和產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢。但近幾年“乳化病”的爆發(fā)給產(chǎn)業(yè)帶來了巨大影響,導(dǎo)致養(yǎng)殖戶虧損嚴(yán)重、養(yǎng)殖面積銳減。筆者對(duì)該病進(jìn)行了病理研究,以期從病理學(xué)角度闡明該病的致病機(jī)理,為尋找該病的有效防控方法提供理論依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 樣品采集

      病蟹采樣時(shí)間為2020年10月1日,采樣地點(diǎn)為黃驊市南排河鎮(zhèn)北方第一漁村。發(fā)病池塘的養(yǎng)殖模式為三疣梭子蟹與日本對(duì)蝦混養(yǎng),其中,三疣梭子蟹的雄蟹已經(jīng)在9月份出塘售賣,塘中存蟹為育肥雌蟹,發(fā)病個(gè)體也均為雌蟹。發(fā)病池塘水色呈褐綠色,藻色偏淡,透明度在40~50 cm,水溫15 ℃。養(yǎng)殖業(yè)者介紹,該池塘在近幾天發(fā)病明顯(蟹的活力下降、死亡明顯增加),而隔壁池塘(也是該養(yǎng)殖戶的池塘)的蟹在前幾天已經(jīng)全部死亡。這兩口池塘在出塘雄蟹時(shí)均未見發(fā)病,同池養(yǎng)殖的日本對(duì)蝦也未見發(fā)病。

      取中等程度發(fā)病和重度發(fā)病的病蟹放入泡沫箱中,加少量冰塊降溫,運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原、病理研究。

      1.2 制作血涂片

      用 75%酒精對(duì)梭子蟹步足基部擦拭消毒, 用1 mL無菌注射器于其關(guān)節(jié)膜處抽取約200 μL血淋巴,滴于載玻片上,混合等量的中性紅溶液(中性紅:PBS=0.02% w/v),在顯微鏡下進(jìn)行觀察并拍照。

      1.3 制作病理切片

      取病蟹的鰓、肝胰腺、心臟、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等7種組織,Bouin氏液固定24 h,自來水沖洗12 h,經(jīng)70%、80%、85%、90%、95%、100%酒精逐級(jí)脫水后,二甲苯+酒精、二甲苯透明,浸蠟,石蠟切片,H.E染色,顯微觀察、拍照。

      2 結(jié)果與討論

      2.1 結(jié)果

      2.1.1 病蟹的外觀癥狀 病蟹甲長為6.7~7.3 cm,甲寬為14.3~15.6 cm,體重為97~106 g;與同等規(guī)格健康蟹相比,病蟹體重明顯偏輕(輕約20%左右)。具體外觀癥狀見圖1(封二)?;疾€(gè)體活力差,爬行緩慢、螯足無力,體色暗淡,體表有藻類、有機(jī)物等附著物(蟹的自凈能力下降)。解剖觀察,發(fā)病嚴(yán)重的蟹體內(nèi)充滿乳白色(微黃)濃稠液體,肝胰腺明顯偏小且顏色偏白,性腺嚴(yán)重萎縮或乳化(有的病蟹幾乎找不到性腺);病蟹的螯足和步足空癟,肌纖維間有水樣物;心臟被乳白色液體包裹,心肌彈性差;鰓呈灰褐色。

      2.1.2 血涂片觀察 血淋巴涂片檢查顯示,在病蟹血淋巴中有大量病原—血卵渦鞭蟲(Hematodinium sp.),該寄生蟲在血淋巴中主要以多核滋養(yǎng)體和團(tuán)聚體的形態(tài)存在,見圖2(封二)。

      2.1.3 組織病理變化

      2.1.3.1 鰓 病蟹鰓的切片顯示,鰓絲腔內(nèi)充斥著大量血卵渦鞭蟲蟲體,其中,以多核滋養(yǎng)體為主,部分鰓絲腔內(nèi)出現(xiàn)蛛網(wǎng)狀滋養(yǎng)體;中度感染的病蟹鰓絲基本完整,但部分鰓小隔消失;重度感染的鰓絲管腔膨脹變形,鰓絲末端的鰓小片膨脹變形,鰓小隔完全缺失。見圖3(封二)。

      2.1.3.2 肝胰腺 中度感染時(shí),病蟹肝胰臟中有大量血卵渦鞭蟲進(jìn)入肝小管間隙,肝小管間隙明顯增大,結(jié)締組織幾乎完全缺失,但肝胰臟整體結(jié)構(gòu)尚在;重度感染時(shí),肝胰臟組織結(jié)構(gòu)完全被破壞,絕大部分肝小管消失,僅存少量肝小管輪廓。見圖4(封三)。

      2.1.3.3 心臟 中度感染的病蟹,心臟基本組織結(jié)構(gòu)完整,部分心肌纖維溶解斷裂,肌束間隙增大,肌絲纖維互相分離;重度感染的病蟹心臟,大量心肌纖維彎曲、斷裂、溶解壞死,肌絲纖維相互分離,喪失原本的條帶結(jié)構(gòu),肌纖維間結(jié)締組織完全破損缺失,心臟內(nèi)充滿蟲體。見圖5(封三)。

      2.1.3.4 體肌肉 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹體肌肉,部分組織結(jié)構(gòu)完整,部分肌絲斷裂溶解,肌絲纖維排列疏松,相鄰肌絲纖維互相分離,間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹體肌肉,大量肌肉組織變性壞死,肌絲排列紊亂且相互分離,大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解,喪失正常緊密的條帶狀結(jié)構(gòu),壞死部分充滿血卵渦鞭蟲體。見圖6(封三)。

      2.1.3.5 螯足 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹螯足肌肉,組織結(jié)構(gòu)基本完整,部分肌絲斷裂溶解,間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹螯足肌肉,大量肌肉組織變性壞死,肌絲排列紊亂且相互分離,大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解,幾乎失去原有組織結(jié)構(gòu)。見圖7(封三)。

      2.1.3.6 第一步足 中度感染的病蟹第一步足肌肉,部分組織結(jié)構(gòu)完整,部分肌絲斷裂溶解,間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹第一步足肌肉,大量肌肉組織變性壞死,肌絲排列紊亂且相互分離,大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解,留下大片空白處,幾乎失去原有組織結(jié)構(gòu)。見圖8(封三)。

      2.1.3.7 性腺 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹性腺非常小,萎縮明顯,病理切片觀察,性腺已經(jīng)完全失去其原有組織結(jié)構(gòu),僅存少量卵母細(xì)胞輪廓,性腺內(nèi)部充滿血卵渦鞭蟲蟲體;重度感染的病蟹已經(jīng)完全找不到性腺,性腺已經(jīng)完全乳化或萎縮。見圖9(封三)。

      2.2 討論

      本次采樣的病蟹外觀癥狀與許文軍等[1-2]、王印庚等[3]所描述的癥狀相似,該病也有 “肌肉白濁癥”“牛奶病”和“牙膏病”等稱謂,各種命名均是依據(jù)其主要癥狀(肌肉和肝胰腺等組織被乳化呈白色或淡黃色液體)而來。

      血卵渦鞭蟲被認(rèn)為是一類感染海水甲殼類的寄生性甲藻(parasitic dinoflagellates)[4]。本研究在病蟹血淋巴、乳化液體、鰓、肝胰臟、心臟、體肌肉、螯足肌肉、第一步足肌肉等組織器官內(nèi)發(fā)現(xiàn)了大量血卵渦鞭蟲,觀察到了該寄生蟲的多核滋養(yǎng)體、單核滋養(yǎng)體、絲狀滋養(yǎng)體、類變形蟲滋養(yǎng)體、團(tuán)聚體、蛛網(wǎng)狀滋養(yǎng)體和孢子前細(xì)胞等各個(gè)發(fā)育時(shí)期的蟲體,這一結(jié)果與王金鳳等[5]的研究一致。血卵渦鞭蟲在宿主體內(nèi)的系統(tǒng)性感染增殖導(dǎo)致宿主的主要器官和組織均發(fā)生不同程度的病變,本研究采樣的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均受到不同程度的破壞。各組織器官被破壞的程度與血卵渦鞭蟲感染程度呈正相關(guān),中等程度感染的病蟹多數(shù)組織器官尚存比較完整的組織結(jié)構(gòu),而重度感染(乳化嚴(yán)重)的病蟹體內(nèi)充滿大量乳白色液體,其各組織器官受損也最為明顯,部分組織器官(肝胰腺和螯足肌肉)已經(jīng)失去原有組織結(jié)構(gòu),性腺也完全消失。

      從各組織器官被破壞程度看,肝胰腺、螯足肌肉和體肌肉的損傷最為明顯,其次是第一步足肌肉和心臟,鰓的損傷相對(duì)最小。性腺組織有些特殊,重度感染的病蟹完全失去了性腺(或性腺未發(fā)育),中等程度感染的病蟹僅存疑似性腺,切片顯示完全失去性腺原有結(jié)構(gòu),僅存卵母細(xì)胞輪廓。其原因有可能是血卵渦鞭蟲的感染能夠抑制三疣梭子蟹的性腺發(fā)育。本次采樣沒有雄蟹,沒有觀察到雄蟹感染后性腺的情況,血卵渦鞭蟲對(duì)三疣梭子蟹性腺的影響是溶解破壞還是抑制生長還有待于進(jìn)一步研究。

      參考文獻(xiàn):

      [1]

      許文軍,徐漢祥,施惠,等.三疣梭子蟹Portunus trituberculatus(Miers) 血卵渦鞭蟲病診斷與綜合防治措施[J].現(xiàn)代漁業(yè)信息,2006,21(11):27-28.

      [2] 許文軍,施慧,徐漢祥,等.養(yǎng)殖梭子蟹血卵渦鞭蟲感染的初步研究[J].水生生物學(xué)報(bào),2007,31(5):27-32.

      [3] 王印庚,楊洋,張正,等.津冀地區(qū)養(yǎng)殖三疣梭子蟹大量死亡的病原和病理分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2017,24(3):596-605.

      [4] 李才文,許文軍.海水甲殼類寄生性病原血卵渦鞭蟲(Hematodinium spp.)研究進(jìn)展[J].海洋與湖沼,2014,45(1):1-10.

      [5] 王金鳳,李才文,李蒙,等.血卵渦鞭蟲感染三疣梭子蟹的病原形態(tài)學(xué)及組織病理學(xué)變化[J].海洋與湖沼,2015,46(4):748-757.

      (收稿日期:2021-08-05)

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