免疫膠體金診斷技術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

孫博 葉陽 任德強(qiáng)

（哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司 150025）

膠體金屬于標(biāo)記技術(shù)，而且是臨床生產(chǎn)中比較常用的，應(yīng)用時具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。近這些年，該項(xiàng)技術(shù)已被大范圍的應(yīng)用于多種生物學(xué)研究領(lǐng)域。臨床生產(chǎn)中所使用的免疫印跡技術(shù)幾乎全部都是膠體金標(biāo)記技術(shù)。此外，在其他不少的生物學(xué)領(lǐng)域都有所應(yīng)用。

免疫膠體金診斷技術(shù)類似于ELISA 檢測法，主要是運(yùn)用在血清及尿液檢測過程中。對于整個樣品的檢測一般需要5～10min 的時間。膠體金技術(shù)最初主要就是由國外的醫(yī)學(xué)研究人員以酶標(biāo)免疫法作為基礎(chǔ)，然后采用膠體金替代酶作標(biāo)志物，抗原抗體結(jié)合的一種免疫學(xué)檢測法，同時也將此項(xiàng)技術(shù)成功的應(yīng)用在檢測人艾滋病病毒抗體的試劑盒研究中[1]，在有效檢測艾滋病病毒的研究方面貢獻(xiàn)非常大。但隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的研究不斷深入，越來越多的領(lǐng)域都在應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)，而當(dāng)前此項(xiàng)技術(shù)同樣也被廣泛地應(yīng)用在獸醫(yī)臨床診斷中。

1 技術(shù)的基本原理

免疫膠體金技術(shù)在我國免疫學(xué)領(lǐng)域相對較新[2]。我國的納米技術(shù)不斷發(fā)展，相關(guān)研究人員發(fā)現(xiàn)膠體金，并且將其廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)、分子學(xué)及生物學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科。膠體金主要指受到VC 和鞣酸等還原劑的作用，聚合氯金酸（HAuCl4）成為顆粒狀，而且大小也是特定的，而這些顆粒受到靜電作用會形成比較穩(wěn)定的物質(zhì)，呈現(xiàn)膠體狀。而膠體金技術(shù)的基本原理就是將微孔濾膜當(dāng)作載體，被已知的抗原或抗體包被，再將待測樣品滴入，經(jīng)過微孔膜的滲濾作用或者是毛細(xì)管的虹吸功能，樣品中的抗原或抗體會與被微孔濾膜包被的抗體或抗原發(fā)生相應(yīng)的結(jié)合，最后再通過膠體金標(biāo)記物的反應(yīng)形成紅色的線或點(diǎn)[3]，一般可呈現(xiàn)出陽性，如果沒有此種反應(yīng)現(xiàn)象則判定為陰性。

2 優(yōu)勢分析

（1）在獸醫(yī)臨床生產(chǎn)中使用免疫膠體金診斷技術(shù)在操作方面相對簡單，進(jìn)行檢測工作時一般僅需要試劑盒或者是試紙條，并不需要其他設(shè)備和試劑，對于樣品的前處理也比較簡單，或者干脆不需要采取前處理，而且樣品通常呈現(xiàn)出多樣化的特點(diǎn)，臨床中可以是血清、組織液、糞便和尿液等。

（2）獸醫(yī)臨床生產(chǎn)中采用免疫膠體金診斷技術(shù)相對會更加方便、快捷，一般反應(yīng)僅5～10min 就可以出結(jié)果，而ELISSA試驗(yàn)通常需要1～2h，PCR 檢測需要更長的時間。該項(xiàng)技術(shù)因?yàn)榉奖憧焖俚奶攸c(diǎn)而不會受到檢測場地的制約，所以更適合在獸醫(yī)生產(chǎn)基層和現(xiàn)場運(yùn)用。膠體金診斷技術(shù)具有快速特異性，同時又不會對檢驗(yàn)靈敏度產(chǎn)生影響，結(jié)合多年的工作經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靈敏度能達(dá)到1ng/ml 或達(dá)到更低水平[4]。

（3）臨床生產(chǎn)中使用免疫膠體金診斷技術(shù)的成本相對比較低，在實(shí)際檢測時也不需要準(zhǔn)備特殊的設(shè)備和試劑。在判定結(jié)果方面更加直觀，陰性、陽性結(jié)果會有明顯的顯色，應(yīng)用過程中只需要通過肉眼就比較容易加以判斷。

（4）免疫膠體金診斷技術(shù)具有一定的特異性，實(shí)際應(yīng)用范圍相對比較廣闊，在不同的檢測條件都可以正常運(yùn)用。而且可以同時針對多個項(xiàng)目內(nèi)容進(jìn)行相應(yīng)檢測，在很大程度上提高了樣品利用率，對難以獲得的樣品表現(xiàn)出更加明顯的優(yōu)勢。

（5）膠體金標(biāo)記方式具有相對穩(wěn)定的理化性質(zhì)，試劑盒或試紙條都可以保存比較長的時間，通常將其置于4℃的條件下以冷藏可以存放長達(dá)超過2 年，而且并不會出現(xiàn)信號衰減問題。

（6）因?yàn)槟z體金呈現(xiàn)紅色，所以不需要添加任何著色試劑，省去了酶標(biāo)致癌底物，在很大程度上降低了試驗(yàn)人員在工作中受到的危害，而且能避免工作環(huán)境受到不必要的污染，相比其他診斷技術(shù)更加安全、環(huán)保，也更加符合環(huán)保型社會的要求。

3 免疫膠體金技術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

免疫膠體金技術(shù)在臨床上應(yīng)用具有諸多優(yōu)點(diǎn)，所以陸續(xù)被廣泛應(yīng)用在獸醫(yī)臨床中，即在動物疾病診斷工作中一般主要包括兩個方面的內(nèi)容：其一是抗體檢測方面的應(yīng)用，其二是在病原檢測方面的應(yīng)用。

3.1 抗體檢測

在臨床開展抗體檢測過程中，免疫膠體金診斷的基本原理是相應(yīng)的抗原在硝酸纖維素膜（NC 膜）上呈現(xiàn)包被狀態(tài)，采用膠體金對相應(yīng)抗原進(jìn)行標(biāo)記，檢測的樣品如果顯示為陽性，則樣品中的抗體與NC 膜上的抗原或金標(biāo)抗原通過結(jié)合后會發(fā)生相應(yīng)的反應(yīng)，可見有紅色線條或點(diǎn)出現(xiàn)；但如果樣品呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，則不會出現(xiàn)上述現(xiàn)象。根據(jù)相關(guān)研究報道可知，對動物感染的很多疾病檢測過程中，通過應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)都可以獲得比較理想的符合率、靈敏度和特異性[5]。所以，可以得出結(jié)論：在臨床生產(chǎn)中針對動物疾病進(jìn)行診斷時采用膠體金診斷技術(shù)，在符合率、靈敏度和特異性方面的表現(xiàn)都比較好，所以膠體金診斷技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷方面的應(yīng)用價值非常高。

3.2 病原檢測

動物臨床生產(chǎn)中針對病原開展的相應(yīng)檢測工作過程中，實(shí)施免疫膠體金診斷技術(shù)的基本原理是硝酸纖維素膜（NC 膜）與膠體金分別包被抗特定病原的2 種抗體，如果被檢樣品呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，則樣品中的抗原與NC 膜上的抗體和金標(biāo)抗體通過結(jié)合而發(fā)生相應(yīng)的反應(yīng)，并且會在NC 膜上可見紅色的線或點(diǎn)；如果被檢樣品出現(xiàn)陰性反應(yīng)，同樣說明沒有上述情況出現(xiàn)。根據(jù)大量報道可知，在動物疾病實(shí)際診斷過程中，應(yīng)用膠體金標(biāo)診斷技術(shù)具有比較高的檢出率。同時結(jié)合很多相關(guān)轉(zhuǎn)接試驗(yàn)結(jié)果表明，膠體金檢測診斷技術(shù)在動物疾病診斷中的應(yīng)用能獲得比較高的檢出率，而且會表現(xiàn)出良好的特異性，將此技術(shù)廣泛應(yīng)用在動物疾病診斷方面的價值非常高。

4 結(jié)語

綜上所述，免疫膠體金診斷技術(shù)在動物臨床應(yīng)用中操作相對比較簡單，而且方便快捷，投入的相關(guān)檢測成本也不高，對樣品也具有比較高的利用率、檢測結(jié)果易于研判，檢出率和穩(wěn)定性都比較高，同時表現(xiàn)出比較強(qiáng)的特異性，結(jié)合以上優(yōu)點(diǎn)可以發(fā)現(xiàn)，此種檢測方法在動物生產(chǎn)現(xiàn)場比較適用，此外，開展大批量的檢測及大面積普查工作中也非常適用，因此，膠體金診斷技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷疾病過程中的應(yīng)用前景非?？捎^。