單核細(xì)胞增生李斯特菌進(jìn)化家系的研究進(jìn)展

周繼福，王 娉，郭 佳,3，趙曉美，陳 穎,*

（1.南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 南京 210023；2.中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京 100176；3.天津科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，天津 300000）

單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）（簡(jiǎn)稱單增李斯特菌）是一種胞內(nèi)兼性厭氧的可對(duì)人類健康造成嚴(yán)重危害的食源性致病菌[1]。其分布廣泛，食品（乳及乳制品、生熟肉類、蛋類、即食食品、水果蔬菜等）[2-3]，食品加工、儲(chǔ)存設(shè)備（設(shè)備表面、管道、生產(chǎn)環(huán)境和冰箱）[4-5]，自然環(huán)境（土壤、污水）[6]和動(dòng)物宿主（哺乳動(dòng)物、非哺乳動(dòng)物）細(xì)胞[7]中均有分離獲得該菌的報(bào)道。單增李斯特菌可在低pH值（3.3～4.2）、低溫、高鹽濃度（0.5%～1.2%）和高壓下存活[8]，易感人群為幼童（young）、老年人（old）、孕婦（pregnant）和免疫功能缺陷人群（immune-compromised people），也被簡(jiǎn)稱為“YOPI”[8]。感染后，住院率（92%）和死亡率（20%～30%）較高[9]。

根據(jù)菌體抗原（O）和鞭毛抗原（H）的血清凝集實(shí)驗(yàn)可以將單增李斯特菌分成13 種血清型（1/2a、1/2b、1/2c、4b、3a、3b、3c、4a、4c、4e、4ab、4d和7）[10-11]。不同血清型菌株的致病性存在差異，從臨床病例和受污染的食品中分離得到的菌株至少95%以上屬于血清型1/2a、1/2b、1/2c、4b[12-13]，其中1/2a和1/2b血清型菌株通常為食品分離株[11,14-15]。血清型4b菌株在臨床患者樣本中常見[16]，李斯特菌病中約有50%的病例是由4b血清型菌株感染所致。研究認(rèn)為血清型1/2和4b菌株致病性的差異與菌株細(xì)胞的壁磷壁酸（wall teichoic-acid，WTA）組成及其聚合物結(jié)構(gòu)不同有關(guān)[17]。依據(jù)表型特征和基因分型方法，可以將單增李斯特菌分成4 種進(jìn)化家系，家系I和家系II菌株的來源種類和數(shù)量最多，而家系III較少，家系IV則較為罕見[18]。家系I菌株包含6 種血清型（1/2b、4b、3b、4e、4d和7），家系II菌株包含4 種血清型（1/2a、1/2c、3a和3c），家系III和IV包含的血清型為4b、4a和4c[14]，4b血清型菌株在家系I、III和IV中均有發(fā)現(xiàn)[19]。菌株進(jìn)化家系研究通常會(huì)結(jié)合菌株的血清型（serotypes）、血清組（serogroups）、流行克隆（epidemic clones，ECs）、毒力類型（virulence types，VTs）、克隆復(fù)合體（clonal complexes，CCs）和序列類型（sequence types，STs）[20]，以比較菌株在系統(tǒng)發(fā)育、遺傳多樣性、生態(tài)位和致病性方面的異同點(diǎn)。不同家系的菌株致病性和宿主特異性不同，對(duì)人類健康的威脅程度也不同，在一些流行病學(xué)研究中，需要對(duì)單增李斯特菌進(jìn)化家系進(jìn)行鑒別，為食品安全的評(píng)估、可能的感染暴發(fā)提供科技支撐。本文對(duì)單增李斯特菌進(jìn)化家系的劃分依據(jù)、不同家系的特點(diǎn)、流行特征、檢測(cè)方法等進(jìn)行了歸納總結(jié)，希望能為研究與菌株家系有關(guān)的單增李斯特菌病提供一定參考。

1 單增李斯特菌進(jìn)化家系劃分

單增李斯特菌起初的“家系”相關(guān)劃分源于多位點(diǎn)酶電泳（multilocus enzyme electrophoresis，MEE）顯示不同電泳簇（electrophoretic types，ETs）結(jié)果和菌株血清型分布不一致[21]，為進(jìn)一步尋找分離株之間的潛在關(guān)系而引入“進(jìn)化家系”的概念?！凹蚁担╨ineages）”名稱的正式使用是在1997年，研究人員利用核糖體分型和3 種毒力基因hly、actA和inlA將133 株單增李斯特菌劃分為家系I和家系II，且對(duì)核糖體片段和16S rRNA基因序列的分析中首次確定菌株另外一種獨(dú)特家系——家系III的存在[22]?；诩蚁礗II菌株所呈現(xiàn)的獨(dú)特性質(zhì)和非典型性狀，Roberts等[23]采用EcoRI核糖分型和hly基因的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性酶切長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction length polymorphism，PCR-RFLP）法對(duì)46 株家系III菌株進(jìn)行分析，系統(tǒng)發(fā)育研究證明了家系III存在3 個(gè)亞系（III A、III B和III C）[24]。家系IV的正式劃分是在2008年，Ward等[25]利用多位點(diǎn)基因分型（multilocus genotyping，MLGT）方法建立系統(tǒng)發(fā)育樹，說明家系IV菌株獨(dú)立于家系III。至此，明確了單增李斯特菌可劃分為4 種不同的進(jìn)化家系[26]（表1）。菌株家系的劃分既可以明確分離株之間的相關(guān)關(guān)系，為菌株的系統(tǒng)發(fā)育和致病性研究提供思路，也可以作為菌株溯源和表達(dá)菌株生態(tài)位關(guān)系的依據(jù)。

表1 單增李斯特菌的家系劃分Table 1 Classification of the lineages of Listeria monocytogenes

2 單增李斯特菌進(jìn)化家系的特點(diǎn)

2.1 單增李斯特菌進(jìn)化家系表型差異

單增李斯特菌分離株遺傳特性的不同導(dǎo)致了菌株表型差異。不同家系菌株在生長(zhǎng)速率、毒力相關(guān)表型、生物膜形成能力、對(duì)NaCl的耐受能力[28]、產(chǎn)細(xì)菌素的能力[29]以及對(duì)食品的污染等方面均存在差異。這些差異可為食品加工條件的設(shè)定、菌株的生態(tài)位關(guān)系表征及初步判斷菌株毒力強(qiáng)弱提供部分依據(jù)和基礎(chǔ)。

不同家系菌株表型差異首先表現(xiàn)在菌株生長(zhǎng)速率和對(duì)食品的污染方面，在菌株生長(zhǎng)速率研究中，不同家系菌株在不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速率有所不同，其中37 ℃、含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)6% NaCI的BHI培養(yǎng)基中家系I和III菌株的生長(zhǎng)速率明顯高于家系II[20,30]。特定培養(yǎng)環(huán)境造成菌株生長(zhǎng)速率改變的同時(shí)一定程度上影響著菌株對(duì)食品的污染和對(duì)動(dòng)物、人類的侵襲，不同處理方法下菌株對(duì)食品的污染能力不同，在高壓和溫?zé)嵯?，家系I菌株對(duì)食品的污染能力高于家系II[31]。此外，在多種脅迫條件下家系II菌株的生長(zhǎng)和存活能力顯著高于家系I[32-33]。

菌株對(duì)細(xì)胞的污染和侵襲程度與細(xì)菌在細(xì)胞表面的生物膜形成相關(guān)[34]，研究顯示家系II菌株比家系I更易生成生物膜[35]，同時(shí)家系II菌株生物膜胞外基質(zhì)中含有更多的胞外DNA[36-37]。胞外基質(zhì)對(duì)細(xì)菌的黏附和定植至關(guān)重要，發(fā)生定植而溶解目標(biāo)細(xì)胞的李斯特菌溶血素（listeriolysin S，LLS）多產(chǎn)生于家系I而非家系II菌株[29]。借助原子力顯微鏡研究細(xì)菌黏附發(fā)現(xiàn)，家系II菌株與家系I相比，其總體黏附力較高但特異性力（氫鍵）和非特異性力（范德華力和靜電作用力）較低，并且細(xì)胞表現(xiàn)出更高的楊氏模量，同時(shí)表面形成更長(zhǎng)、更硬的生物聚合物[38-39]。

細(xì)菌成斑實(shí)驗(yàn)和溶脂表型實(shí)驗(yàn)可為菌株毒力強(qiáng)弱的測(cè)定提供初步依據(jù)，不同家系菌株形成的噬菌斑、空斑大小和成斑率以及溶脂性現(xiàn)象等毒力相關(guān)表型均表現(xiàn)出不同。在噬菌斑成斑實(shí)驗(yàn)中，家系II菌株的成斑率低于家系I和III，同時(shí)其形成的噬菌斑更小[22]。類似的，家系I和家系II菌株相較于家系III能形成更大的空斑[40]。相比于家系I和家系II的分離株，家系III菌株在卵黃瓊脂平板上表現(xiàn)出更強(qiáng)的溶脂活性[40]。

2.2 單增李斯特菌進(jìn)化家系基因組差異

菌株在基因組水平上的差異源于基因特異性研究，不同家系菌株的基因組差異主要體現(xiàn)在基因含量、基因突異、基因重組和基因表達(dá)等方面。

菌株的基因組差異首先表現(xiàn)在基因含量上，利用多種基因組分析工具發(fā)現(xiàn)家系I和家系II菌株基因含量存在差異，這種差異除前噬菌體數(shù)目、編碼蛋白質(zhì)的偽基因個(gè)數(shù)和菌株特異性基因外[41]，還包括毒力基因、應(yīng)激反應(yīng)基因和代謝相關(guān)的基因。使用RPKM（reads per kilobase per million mapped）法發(fā)現(xiàn)家系II菌株比家系I缺少編碼膜相關(guān)蛋白的167 個(gè)基因[42]。Chen Jianshun等[43]發(fā)現(xiàn)參與編碼菌株精氨酸脫亞氨酶和胍丁胺脫亞氨酶系的部分基因簇在家系I和家系II及大部分家系IV菌株中存在，但在家系III和少部分家系IV菌株則缺乏。對(duì)于不同家系菌株的基因組差異，菌株毒素-抗毒素系統(tǒng)的14 個(gè)等位基因同樣表現(xiàn)出明顯的差別[44]。與毒力基因相關(guān)的差異還包括李斯特菌致病島（Listeriapathogenicity islands，LIPI）LIPI-3和LIPI-4組成基因[45]，其中LIPI-3主要存在于家系I分離株[46]。除基因含量的差異外，單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）、轉(zhuǎn)座因子和基因缺失[29,47]等基因突變是基因組水平上最常見的差異。Zhang Xu等[48]通過Python編程語(yǔ)言對(duì)菌株基因組數(shù)據(jù)挖掘后，找到多個(gè)可以區(qū)分家系I、II、III菌株的特定SNP的候選基因。在基因突變中較為罕見的李斯特菌溶素正調(diào)節(jié)蛋白（listeriolysin positive regulatory protein，prfA）的移碼及錯(cuò)義突變使得家系I和家系II菌株的毒力降低[49]。此外，水平基因轉(zhuǎn)移現(xiàn)象也能反映不同家系菌株在基因水平上的差異，在基因轉(zhuǎn)移上，家系III菌株對(duì)于家系I和家系II是最佳的基因供體[50]。

不同家系菌株的進(jìn)化形成與同源重組和正向選擇密切相關(guān)[51]。菌株系統(tǒng)發(fā)育中的基因重組表明，家系II菌株比家系I更容易發(fā)生重組[50]，這導(dǎo)致了家系II菌株的高遺傳變異性，也使得家系II菌株更容易適應(yīng)變化的生態(tài)位，進(jìn)而可能影響食品及其相關(guān)生態(tài)位中家系II和家系I菌株的數(shù)量[52]。

2.3 單增李斯特菌進(jìn)化家系轉(zhuǎn)錄組差異

轉(zhuǎn)錄組研究是對(duì)基因結(jié)構(gòu)和基因功能的拓展研究，不同家系菌株的轉(zhuǎn)錄組研究顯示出菌株在噬菌體基因[53]、毒力相關(guān)基因、應(yīng)激調(diào)控因子[54]和細(xì)胞壁合成[41]等方面的差異。

在證明菌株基因組多樣性的同時(shí)，不同家系菌株在毒力基因分布上存在差異，研究顯示高毒力基因和低毒力基因分別分布在家系I和家系II菌株中[7]。在氧化劑、酸和熱響應(yīng)等應(yīng)激反應(yīng)方面的轉(zhuǎn)錄組研究顯示，家系I比家系II的ST菌株顯示出對(duì)氧化劑更高的應(yīng)激抵抗力，同時(shí)家系II菌株在體積分?jǐn)?shù)0.6% H2O2作用下表現(xiàn)更為敏感[33]。Sigma B（σB）作為菌株最主要的調(diào)節(jié)因子，其對(duì)家系I、II和III B菌株在酸和氧化應(yīng)激條件下的存活起重要作用，但是對(duì)家系III A菌株效果不明顯[55]。此外，作為σB的替代調(diào)節(jié)因子，PrfA也影響著菌株在壓力和毒性下的差異轉(zhuǎn)錄，菌株對(duì)膽汁的應(yīng)激抵抗研究發(fā)現(xiàn)，家系II菌株發(fā)生差異轉(zhuǎn)錄的基因要少于家系I[56]。

此外，Lee等[7]基于多位點(diǎn)序列分型（multilocus sequence typing，MLST）發(fā)現(xiàn)家系I和家系II菌株在大部分轉(zhuǎn)錄水平上存在差異。

2.4 單增李斯特菌進(jìn)化家系蛋白質(zhì)組差異

在基因組和轉(zhuǎn)錄組水平上的研究不足以完全體現(xiàn)不同家系菌株的特點(diǎn)，基因調(diào)控和表達(dá)的變化同樣會(huì)造成不同家系菌株致病性和侵襲能力的差異[57]。不同家系菌株可在蛋白質(zhì)定量表達(dá)[58]、蛋白質(zhì)表達(dá)程度和蛋白質(zhì)種類（核糖體蛋白種類[59]、表面蛋白）等方面體現(xiàn)差異。

家系I和家系II菌株在蛋白組水平上的直接差異體現(xiàn)在蛋白質(zhì)表達(dá)量上[58]。其次，使用二維凝膠電泳顯示家系II菌株的蛋白表達(dá)程度沒有家系I明顯[60]。建立蛋白質(zhì)種類和家系之間的聯(lián)系不僅可以促進(jìn)家系分型，也可以為菌株致病性研究提供幫助。Ojima-Kato等[59]借助基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）發(fā)現(xiàn)不同家系（家系I、II、III）的3 種核糖體蛋白存在差別。對(duì)于哺乳動(dòng)物所需的表面蛋白lmo0320，家系II菌株是家系I的2 倍左右[32]。與菌株毒力相關(guān)的表面蛋白在不同家系菌株中同樣存在差異[61]。這些蛋白質(zhì)水平上的差異研究對(duì)于菌株致病性研究和生態(tài)位關(guān)系的確定有著積極促進(jìn)作用。

2.5 單增李斯特菌進(jìn)化家系代謝組差異

通過對(duì)菌株細(xì)胞內(nèi)源物質(zhì)的動(dòng)態(tài)研究發(fā)現(xiàn)，不同家系菌株在代謝組的差異主要分為對(duì)物質(zhì)的吸收利用和分解[57]、代謝途徑差異[62]和物質(zhì)的分泌等方面。

不同成分碳源物質(zhì)的培養(yǎng)基會(huì)影響菌株的生長(zhǎng)繁殖。含D-阿洛糖的富集肉湯可以改善菌株的分離并減少非目標(biāo)細(xì)菌的生長(zhǎng)，研究發(fā)現(xiàn)只有家系II菌株可以利用D-阿洛糖作為生長(zhǎng)的碳源，其余家系菌株均不能[63]。此外，家系II菌株還可以代謝蔗糖[57]。研究菌株對(duì)物質(zhì)的分解發(fā)現(xiàn)，III B和III C亞系分離株缺乏發(fā)酵鼠李糖的能力，但亞系III A則能夠利用鼠李糖和乳酸[23]。這也從側(cè)面說明不同家系菌株在碳源利用上存在一定的差異[57]。

由于代謝組位于基因組和轉(zhuǎn)錄組的下游，因此不同家系菌株在基因組和轉(zhuǎn)錄組的差異會(huì)導(dǎo)致代謝組的不同。轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果表明家系II和家系I菌株在磷酸鹽代謝、脂質(zhì)代謝和輔酶輔基代謝中存在不同的富集趨勢(shì)[7]?；谌蚪M分析菌株遺傳關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)家系I和家系II菌株的部分基因座編碼的醛糖1-表異構(gòu)酶代謝途徑存在差異[62]，這表明不同家系菌株基因組和代謝之間存在高度保守性[57]。

2.6 單增李斯特菌進(jìn)化家系致病性

李斯特菌病的高致死率促進(jìn)了對(duì)單增李斯特菌致病性研究，而菌株的致病性取決于各種毒力因子[64]。目前發(fā)現(xiàn)的毒力因子有李斯特致病島家族（LIPI-1、LIPI-2、LIPI-3和LIPI-4）、蛋白質(zhì)（表面蛋白（Internalin A、Internalin B）和P60蛋白[65]）和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子[49,66]等，其中最主要的是LIPI-1。各種毒力因子的致病機(jī)理有所差異，如轉(zhuǎn)錄激活因子PrfA負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)和控制許多毒力基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[42]，inlAB操縱子編碼的兩個(gè)內(nèi)部蛋白對(duì)于進(jìn)入非吞噬細(xì)胞至關(guān)重要[66]。不同進(jìn)化家系菌株的致病性差異還與毒力因子的分泌相關(guān)。作為最重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，σB的存在影響著家系I、II和III B菌株對(duì)人上皮Caco-2細(xì)胞的入侵[55]。不同家系菌株中的毒力基因也影響著菌株的致病性，編碼Internalin蛋白的基因inlG、inlK和inlF通常出現(xiàn)在家系II菌株中[66]。同樣，InlA蛋白（由inlA基因編碼）的存在會(huì)影響菌株穿越人腸道屏障[67]，而擁有全長(zhǎng)inlA基因和LIPI-3/4的菌株通常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的李斯特菌病[68]。Chen Yi等[69]利用全基因組測(cè)序（whole-genome sequencing，WGS）技術(shù)對(duì)即食食品分離株的inlA基因的提前終止密碼子（premature stop codon，PMSC）測(cè)序，發(fā)現(xiàn)家系I或帶有全長(zhǎng)inlA的分離株通常比家系II或帶有inlAPMSCs的菌株具有更大的毒力潛能。除毒力因子外，不同家系菌株的致病性可能和細(xì)胞壁的WTA相關(guān)[17]。

不同家系菌株致病性強(qiáng)弱相差較大，大多數(shù)人類李斯特菌病的暴發(fā)是由含4 種外毒素的家系I菌株引起[70]，這可能和其高度克隆的特性相關(guān)[32]。菌株進(jìn)化中毒力會(huì)發(fā)生變化，這與毒力基因突變和相關(guān)蛋白丟失有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)家系II菌株的毒力喪失可能與毒力基因（prfA、inlA和inlB等）的突變有關(guān)[71]，表面蛋白的缺失同樣會(huì)促使家系III菌株毒力發(fā)生改變[72]。菌株致病性研究往往依賴于菌株分離，而菌株的分離獲得與國(guó)家地域、飲食風(fēng)俗、衛(wèi)生條件和采樣方法相關(guān)。Chenal-Francisque等[73]對(duì)五大洲共300 份分離株進(jìn)行流行病學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)很少有流行性菌株存在。在一些國(guó)家的研究中發(fā)現(xiàn)家系II菌株引起的人類李斯特菌病要多于家系I[74]。

3 單增李斯特菌不同進(jìn)化家系的分型方法

單增李斯特菌流行病學(xué)研究中，分離株的家系分型結(jié)果和菌株來源有著密切聯(lián)系，對(duì)分離獲得的菌株進(jìn)行家系鑒別后，需要進(jìn)一步研究分析不同來源分離株的關(guān)系以說明菌株的遺傳特性，而這種解釋往往依賴于合適的分型方法。將分型方法和生態(tài)位相結(jié)合可以為李斯特菌病防控和衛(wèi)生服務(wù)建設(shè)提供參考。

菌株精確的家系分型能為菌株種內(nèi)遺傳變異研究提供依據(jù)，尤其是菌株致病性方面[85]。最先用于家系分型的方法包括MEE、脈沖場(chǎng)凝膠電泳（pulsed-field gel electrophoresis，PFGE）、基于限制性片段的DNA指紋分型技術(shù)和核糖體分型等，其中PFGE使用范圍廣、區(qū)分能力強(qiáng)，被認(rèn)為是分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。Lopez-Valladares等[74]根據(jù)PFGE條帶將菌株分為家系I和家系II。然而PFGE結(jié)果在不同研究之間的解釋和比較上難以統(tǒng)一且不易準(zhǔn)確表明疾病暴發(fā)后菌株與環(huán)境之間的關(guān)聯(lián)性[77]。為此，MLST[86-87]、基于SNP的高分辨熔解（high resolution melting，HRM）技術(shù)[88]、多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析（multilocus variable number of tandem repeat analysis，MLVA）分型[89]、多位點(diǎn)毒力基因序列分型（multivirulence-locus sequence typing，MVLST）[90]及其他基于PCR的相關(guān)分型方法相繼投入應(yīng)用。Miya等[77]基于串聯(lián)重復(fù)區(qū)的核苷酸序列，建立比MLST有更強(qiáng)區(qū)分能力的多位點(diǎn)串聯(lián)重復(fù)序列分析（multilocus tandem repeats sequence analysis，MLTSA）分型方法，成功將菌株分為家系I和家系II。馬彥寧等[82]利用LIPI-1的等位基因特異性寡核苷酸，將菌株分為家系I、家系II和家系III。Wang Yi等[81]建立多重PCR方法用于4 種家系和2 個(gè)亞系菌株的快速區(qū)分鑒定。除此之外，利用不同家系菌株的特定SNP候選基因同樣實(shí)現(xiàn)了家系的分型[48]。這些分型方法的建立和應(yīng)用一定程度上加快了進(jìn)化家系的遺傳發(fā)育和致病性研究。但是MLST和MLVA方法缺乏對(duì)于大量疾病暴發(fā)株的區(qū)分能力[80,91]，且MLVA的區(qū)分能力略弱于PFGE[80]，等位基因特異性寡核苷酸（allele-specific oligonucleotide，ASO）-PCR對(duì)單管反應(yīng)確定菌株家系要求較高。為更好地進(jìn)行家系菌株分型，WGS越來越多地作為開發(fā)基因分型方法的基礎(chǔ)[92]，其數(shù)據(jù)還可以用于毒力基因的檢測(cè)和地理歸屬的確定。WGS被廣泛使用在跨區(qū)域、多來源的單增李斯特菌株家系分型、遺傳多樣性及致病性研究[93-94]。Chen Yi等[69]通過WGS序列的核基因組MLST（core genome MLST，cgMLST）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹對(duì)即食食品分株進(jìn)行家系分型研究，結(jié)合WGS分析確認(rèn)了家系I、家系II和家系III的相關(guān)分離株。比較基因組學(xué)方法不僅在致病株遺傳研究和家系分型中應(yīng)用普遍[95]，而且在探究對(duì)入侵宿主相關(guān)基因[96]和揭示不同家系菌株侵襲力、毒力[57]變化中同樣廣泛使用。除上述家系分型方法外，質(zhì)譜和菌株表面蛋白也被用于家系分型。Koudelka等[97]利用MALDI-TOF MS對(duì)李斯特菌病和食品分離株進(jìn)行家系分型，基于自建庫(kù)的分型準(zhǔn)確率為95.7%。Zhang等[98]將菌株的表面蛋白開發(fā)為單克隆抗體的抗原靶標(biāo)，特定單克隆抗體對(duì)家系II和I菌株的特異性識(shí)別率為91.3%（表2）。

表2 單增李斯特菌典型家系分型方法Table 2 Typing methods for typical lineages of Listeria monocytogenes

基于多種家系分型結(jié)果，單增李斯特菌4 種家系之間存在重疊的生態(tài)位關(guān)系。相較而言，家系I菌株在人類和動(dòng)物李斯特菌病中分離獲得較多[99]，家系II菌株主要分離自食品及食品加工環(huán)境[100]。家系III和家系IV菌株則較少分離獲得[101]，這可能和菌株的生物膜形成能力有關(guān)，加工過程產(chǎn)生的環(huán)境壓力造成菌株數(shù)量減少，從而難以分離獲得?？傊?，家系II和家系I菌株較常分離獲得，因而常見于菌株流行病學(xué)和遺傳發(fā)育研究。為更好地體現(xiàn)家系分型的研究意義，有必要綜合考慮菌株分離來源（國(guó)家或地區(qū)、分離位點(diǎn)、分離基質(zhì)和分離季節(jié)等）。

4 結(jié) 語(yǔ)

綜上所述，單增李斯特菌的進(jìn)化家系在表型、基因組及致病性等方面均存在差異，在食品安全領(lǐng)域?qū)Ψ蛛x菌株進(jìn)行家系分析，不僅可以對(duì)食品生產(chǎn)加工過程中菌株的耐受能力和膜形成能力做出預(yù)先判斷，為食品加工過程中菌株的消滅提供參考；同時(shí)，也可以了解不同家系菌株在食品中的分布規(guī)律，為食品中單增李斯特菌的風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。