不同炮制方法對川澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B的影響

蔡沓栗 林艷萍

1.福州市皮膚病防治院，福建 福州 350025；2.福建省老年醫(yī)院，福建 福州 350009

澤瀉是常用中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》中列為上品[1]，具有利水滲濕，泄熱，化濁降脂的功效，用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛，高脂血癥[2]。澤瀉的炮制加工主體分為生制、麩炒、鹽制等。三者在外觀性狀上差異主要表現(xiàn)在澤瀉厚片外表皮黃白色或淡黃棕色，切面黃白色；麩炒澤瀉厚片外表皮淡黃棕色，切面黃棕色；鹽澤瀉厚片外表皮淡黃棕色，切面深黃棕色，味淡淡咸味，微甘。實驗[3]證明，澤瀉經(jīng)加工炮制后，有利于有效成分的煎出。但藥理研究[4]表明，生品與麩炒、土制品均有一定的利尿作用，而鹽澤瀉幾乎不見利尿作用。2020年版《中國藥典》在之前的基礎(chǔ)上，對澤瀉的相關(guān)規(guī)定作了改變，但2010年版、2015年版和2020年版均對澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量測定作了相關(guān)規(guī)定[5-6]。因此，通過HPLC對三種不同川澤瀉(厚片)23-乙酰澤瀉醇B的含量進(jìn)行測定并分析，并對三者的性狀進(jìn)行評價。

1 儀器與材料

1.1 實驗材料 樣品于2015年購自于四川成都荷花池藥材市場，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室楊成梓教授鑒定為澤瀉科澤瀉Alismaplantago-aquaticaLinn.的干燥塊莖。

樣品包括三種,A：澤瀉厚片；B：麩炒澤瀉厚片；C：鹽澤瀉厚片。見圖1。

1.2 儀器 LC-20AT高效液相色譜分析儀(日本島津公司)；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；電子分析天平(奧豪斯儀器(上海)有限公司)；電子分析天平(METTLER TOLEDO,Made in Switzerland)；DFY-C-500快速開蓋萬能高速粉碎機(jī)(大德中藥機(jī)械有限公司)。

A.澤瀉厚片；B.麩炒澤瀉厚片；C.鹽澤瀉厚片圖1 三種規(guī)格川澤瀉的外觀拍照圖

1.3 試劑 23-乙酰澤瀉醇B(ID：OLN7-TT2S，中國食品藥品檢定研究院，純度大于99.5%)，乙腈(批號：20140421，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Platisil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-水(73∶27)為流動相進(jìn)行等度洗脫；流速為1 mL·min-1；檢測波長為208 nm；室溫條件下，測理論板數(shù)按23-乙酰澤瀉醇B峰計算應(yīng)不低于3000；柱溫30 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液的制備 用乙腈至50 mL量瓶中，定容至刻度，待用?？瞻譎PLC圖譜見圖2。

圖2 空白對照品的HPLC圖譜

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取23-乙酰澤瀉醇B 1.07 mg至50 mL量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成21.4 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜見圖3。

2.2.3 供試品溶液的制備 取上述三種商品于 40 ℃ 烘干至恒重，粉碎，過100目篩，精密稱定約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

圖3 對照品23-乙酰澤瀉醇B的HPLC圖譜

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取3.2.2項下標(biāo)準(zhǔn)溶液5、10、20、30、50、70 μL，依次注入液相色譜儀，按2.1項色譜條件測定峰面積。以對照品(23-乙酰澤瀉醇B)進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得對照品(23-乙酰澤瀉醇B)回歸方程。結(jié)果表明，回歸方程：Y= 20738X-3348.5(r=0.9999)，在0.107～1.498 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗 分別連續(xù)精密吸取同一對照品溶液5次，各20 μL，在2.1項色譜條件下分別注入高效液相色譜儀，測定23-乙酰澤瀉醇B峰面積，計算峰面積的RSD為1.15 %，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 分別精密稱取同一樣品粉末(過100目篩)5 份，按2.2.3項方法處理，進(jìn)樣20 μL，按2.1項色譜條件測定，測定23-乙酰澤瀉醇B峰面積，計算其含量，RSD 為1.57%，表明重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件在0、2、8、16、24 h精密吸取20 μL分別注入高效液相色譜儀，測定23-乙酰澤瀉醇B 峰面積的RSD為0.18%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取6份已知含量的澤瀉粉末(過100目篩)，每份約0.1 g，分別精密加入等量的對照品，按2.1項色譜條件測定含量。測得23-乙酰澤瀉醇B平均回收率為105.84%，RSD 為2.01%。見表1。

2.8 樣品測定 分別取各樣品，按2.2.3項制備方法制備，進(jìn)樣20 μL，按2.1項色譜條件測定，測得峰面積并代入回歸方程計算含量，測定結(jié)果見表2，見圖4～6。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果表

表2 含量測定實驗結(jié)果表

圖4 澤瀉厚片樣品的HPLC圖譜

圖5 麩炒澤瀉厚片樣品的HPLC圖譜

圖6 鹽澤瀉厚片樣品的HPLC圖譜

3 討論

3.1 實驗 通過HPLC對川澤瀉藥材中23-乙酰澤瀉醇B進(jìn)行測定，實驗結(jié)果表明測定結(jié)果穩(wěn)定，分離度良好，能得到理想的測定結(jié)果。其HPLC速度快，靈敏度高，重復(fù)性高，高效液相柱可反復(fù)使用，樣品使用量少，測定結(jié)果清晰，操作簡便。

3.2 這三種川澤瀉(厚片)的炮制品外觀有明顯區(qū)別 澤瀉厚片，呈橢圓形或橢圓形厚片，外表皮黃白色或淡黃棕色，偶見細(xì)小突起的須根痕。切面黃白色，粉性有多數(shù)細(xì)孔。經(jīng)麩炒的澤瀉厚片，切面黃棕色。鹽澤瀉厚片切面較經(jīng)麩炒的厚片切面顏色更深，為深黃棕色。市場上買家可輕易分辨選擇購買。

3.3 三種不同規(guī)格澤瀉商品含量比較 根據(jù)實驗結(jié)果表明，23-乙酰澤瀉醇B與其峰面積在0.107～1.498 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性方程為Y=20738X-3348.5，(r=0.9999)。根據(jù)線性方程對相同重量的澤瀉厚片、麩炒的澤瀉厚片和鹽炙的澤瀉厚片進(jìn)行含量計算，結(jié)果顯示三種川澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B的含量有所差異。其中，添加鹽炙的澤瀉厚片其23-乙酰澤瀉醇B含量最高，經(jīng)麩炒的厚片次之，澤瀉厚片相對較低。

澤瀉現(xiàn)代的炮制加工品主要包括生澤瀉、清炒澤瀉、麩炒澤瀉及鹽炙澤瀉等。最常用的炮制品為麩炒澤瀉和鹽澤瀉，其中澤瀉生品以利水滲濕為主，麩炒澤瀉以滲濕和脾、降濁生清為主，鹽炙澤瀉引藥下行，增強(qiáng)滋陰瀉熱及利尿作用。研究[7]發(fā)現(xiàn)炮制澤瀉(經(jīng)麩炒的厚片，添加鹽水炒制的厚片)中23-乙酰澤瀉醇B含量明顯高于生制澤瀉(厚片)。曹柳等[8]采用HPLC研究清炒、麩炒、鹽炙對澤瀉中澤瀉醇、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B含量的影響，與生澤瀉比較，清炒品種上述4種成分含量均降低，麩炒品均增加，鹽炙品除23-乙酰澤瀉醇B外均有增加。鄭云楓等[9]發(fā)現(xiàn)，鹽炙澤瀉藥材中的三萜類主成分23-乙酰澤瀉醇B發(fā)生兩種轉(zhuǎn)變：一是氧環(huán)開裂、重排，生成24-乙酰澤瀉醇A，再進(jìn)一步脫乙?；D(zhuǎn)化成澤瀉醇A；另一種變化是：先脫乙?；蓾蔀a醇B，繼而氧環(huán)開裂轉(zhuǎn)化成澤瀉醇A?？梢姖蔀a經(jīng)鹽炒、麩炒炮制后，其23-乙酰澤瀉醇B較生制品有不同程度的增加。